少弱精子癥患者血清INHB對IVF臨床妊娠結局的預測價值*

陳琰坤，冼卓杰，池霖生，黃建州，馬文敏

(廣東省佛山市婦幼保健院輔助生殖技術中心 528000)

近年來，因人們不良生活方式增多、飲食結構改變、環境污染等因素影響，全球男性不育癥的發生率呈逐年遞增趨勢，而精子數量減少和活力不足是導致男性不育的常見因素，常并稱為少弱精子癥[1]。少精癥是指連續2次精液分析顯示成年男性精液中精子數少于15×106/mL，弱精子癥是指連續2次精液分析顯示精子活力小于32%或前向運動精子與非前向運動精子比例小于40%，少弱精子癥已成為影響男性生育能力的重要因素[2]。體外受精(in vitro fertilization，IVF)技術作為1種直接高效的治療方法，較好地解決了一部分患者不孕不育問題，有研究表明，體外受精-胚胎移植技術有助于提高男性少弱精子癥患者的受精率[3-5]。在評估判斷男性生育功能及IVF成功率的指標方面，精液分析是常用指標，但在實際應用中，也受到存放、環境、人工等因素影響，并不能準確預測IVF受精成功率。因此，尋找預測少弱精子癥患者臨床妊娠結局的標志物具有重要臨床意義。血清抑制素B(inhibin B，INHB)是與生殖密切相關的生物因子，研究表明，INHB可通過影響促卵泡激素(follicle stimulating hormone，FSH)而發揮生精作用，臨床常用于男性不育的診斷，但鮮見其用于預測少弱精子癥患者行IVF的結局[6]。基于上述背景，本文通過研究少弱精子癥患者血清INHB對其行IVF臨床妊娠結局的影響，以期探討其是否可作為預測IVF成功與否的標志物。

1 資料與方法

1.1 一般資料

所有研究對象為2017年6月到2019年6月就診于本院并行IVF助孕的夫婦，男方均被診斷為少弱精子癥，從中選取妊娠成功的夫婦100對作為妊娠成功組，另再選取妊娠失敗的夫婦100對作為妊娠失敗組?？偣?00對病例，其中男方平均年齡(32.71±4.78)歲，女方平均年齡(30.02±3.52)歲，不育(4.22±2.26)年。詳細收集并記錄兩組病例的年齡、BMI等基本數據。本研究經本院醫學倫理委員會審批，獲得了所有患者的書面同意。病例納入及排除標準，納入標準：(1)所有病例不孕原因均為男性少弱精子癥，少弱精子癥符合世界衛生組織(World Health Organization，WHO)頒布的《人類精液檢查與處理實驗室手冊5 版》中個關于少精癥及弱精癥的診斷[7]，見表1；(2)患者臨床資料完整。排除標準：(1)因女方因素影響受孕者，如排卵障礙、子宮內膜異位或其他宮腔因素等；(2)男方有家族性遺傳病史，外生殖器、輸精管經體檢未見明顯異常；(3)染色體核型異常、近期有感染病史或者全身性疾病史者。

1.2 方法

1.2.1精液收集及處理

男方禁欲2～7 d后為最佳標本收集時間。采用手淫法獲取精液，用潔凈干燥的容器收集所有精液，于37 ℃水浴條件進行液化，記錄精液量；之后采用SQA-V全自動精子質量分析儀(購自以色列Medical Electronic Syserm公司)進行精子密度及精子活力測定；采用改良巴氏染色法處理，由具備資質的技術人員對精子形態進行分析。

表1 少弱精子癥診斷標準

1.2.2IVF-胚胎移植

取卵后置于無菌培養皿中，4～6 h后加入精子，控制精子、卵子終濃度比不低于10 000∶1，于37 ℃、6% CO2的生化培養箱中進行培養。約4～6 h后觀察卵子受精情況，間隔16～18 h觀察原核情況；于取卵后第3天觀察胚胎情況并進行評級，選取優質胚胎(Ⅰ級或Ⅱ級)進行移植，操作需借助B超進行引導，移植后常規黃體支持。移植后第14天測定血清人絨毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)和尿HCG，若為陽性，則判定為生化妊娠；若為陰性，則間隔4周后行B超檢查，如有妊娠囊則臨床妊娠成功。

1.2.3血液采集及INHB的測定

清晨空腹條件下，采集男性患者靜脈血3 mL，3 000 r/min轉速離心10 min，收集上層血清，保存于-80 ℃下待測。應用全自動化學發光免疫分析儀(德國西門子公司)進行血清FSH、黃體生成素(luteinizing hormone，LH)及睪酮(testosterone，T)測定，所有試劑由德國西門子公司提供；應用ELISA法測定血清INHB，儀器為深圳邁瑞BS-220全自動生化分析儀，試劑盒購自武漢默沙克生物科技有限公司。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 2組患者一般資料比較

2組研究對象的女方年齡、女方BMI、男方不育年限、男方血清LH、男方血清T及男方形態正常的精子比率(morphology normal sperm，MNS)差異均無統計學意義(P>0.05)。但妊娠成功組男方年齡和男方BMI、男方不良生活習慣比例(包括：吸煙、過量飲酒、長期熬夜、濫用藥物等)、男方血清FSH顯著低于妊娠失敗組，而男方血清INHB、精子活力及精子密度則顯著高于妊娠失敗組，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

2.2 血清INHB與患者精液參數及FSH的相關性分析

采用Pearson相關性分析對所有患者的血清INHB與精液參數及血清FSH關系進行分析，結果顯示血清INHB與精子密度(r=0.424，P<0.001)、精子活力(r=0.207，P=0.003)及精子總數(r=0.587，P<0.001)呈正相關，而與血清FSH(r=-0.568，P<0.001)呈負相關。

為進一步明確行IVF的少弱精子癥患者臨床妊娠結局的影響因素，采用logistic回歸進行分析，以臨床妊娠結局(成功=1，失敗=0)為因變量，自變量為一般資料中具有統計學差異的男方年齡(≤30歲=1，>30歲=0)、男方BMI(≤25 kg/m2=1，>25 kg/m2=0)、男方不良生活習慣(無=1，有=0)、男方血清FSH(正常=1，異常=0)、男方血清INHB(妊娠成功組=1，妊娠失敗組=0)、精子活力(正常=1，異常=0)及精子密度(>15×106/mL=1，≤15×106/mL=0)。結果發現男方年齡(OR=3.346，95%CI:1.100～10.179)、男方BMI(OR=2.675，95%CI:1.134～6.310)、男方不良生活習慣(OR=2.854，95%CI:1.186～6.871)、男方血清FSH(OR=3.512，95%CI:1.278～9.654)、男方血清INHB(OR=4.139，95%CI:1.421～12.056)、精子活力(OR=3.414，95%CI:1.397～8.345)及精子密度(OR=3.207，95%CI:1.203～8.547)均是影響少弱精子癥患者行IVF臨床妊娠結局的獨立影響因素(P<0.05)，見表3。

表2 2組研究對象基礎數據比較

表3 Logistic回歸預測危險因素

2.4 血清INHB對少弱精子癥行IVF臨床妊娠的預測作用

為進一步探討少弱精子癥患者血清INHB對其行IVF臨床妊娠的預測價值，以妊娠成功賦值為1，妊娠失敗則賦值0，繪制男方血清INHB對臨床妊娠結局的ROC曲線，以95.60 pg/mL作為預測的臨界值，結果ROC曲線下面積(AUC)為0.865，靈敏度為76.6%，特異度為82.3%。見圖1。

圖1 少弱精子癥患者血清INHB預測其行IVF臨床妊娠結局的ROC曲線

3 討 論

近年來，男性原因導致不育越來越受到人們的關注，據統計，男性生育能力下降可能與雄激素水平下降，性活動減少，精子形態和活動性改變，以及精子的質量退化和DNA完整性有關[8-10]。隨著輔助生育技術的不斷進步，不孕不育不再是無法攻克的難題，許多少弱精子癥患者通過行IVF獲得治療并成功生育。但在實際應用中，IVF影響因素眾多，成功率仍有待提高。趙曾華[11]進行的一項關于肥胖男性對IVF治療結局影響的研究發現，肥胖組男性的精子密度、優質精子占比及異常受精率均偏低，優質胚胎數及臨床妊娠率顯著低于體重正常男性；馬國燕等[12]發現，高齡男性患者行IVF，其囊胚形成率及前向運動精子比率偏低，且與低齡男性患者比較具有更高的DNA碎片率及流產風險。除此之外，關少艮等[13]還發現，高FSH也提示IVF妊娠和活產成功率更低，流產率更高。本研究中，妊娠成功組男方年齡和男方BMI、男方不良生活習慣比例、男方FSH顯著低于妊娠失敗組，而男方血清INHB、精子活力及精子密度則顯著高于妊娠失敗組，差異有統計學意義(P<0.05)。

有研究顯示，男性體內特定生殖激素的循環水平與精液質量參數有關，尤其是INHB和FSH被認為是精子發生和支持細胞功能的標志物[14]。INHB是1種異二聚糖蛋白，由1個共同的α亞單位和1個特定的β亞單位組成。青春期前男性體內INHB主要由睪丸未成熟支持細胞合成與分泌，成年后體內INHB可能是由睪丸支持細胞或其他間質細胞共同合成。INHB可調節男性下丘腦-垂體-睪丸性腺軸，特異性反饋調節FSH，也是精子生成的敏感指標，是評價精子生成的有效內分泌標志物。研究認為，血清INHB與精子濃度、精子總數、前向運動精子、正常形態精子數呈正相關，可作為診斷男性不育良好的生物學標志物[15-16]。莫美蘭等[17]研究證明，不育男性血清INHB與血清性激素及總精子數具有一定相關性，可用于評估無精子癥患者的睪丸生精狀態；梁英強等[18]以精索靜脈曲張(VC)男性患者為研究對象，發現隨著VC程度加重，血清INHB呈下降趨勢，經手術治療后，血清INHB水平有效提高，故INHB有望成為預測男性少弱精子癥行IVF臨床妊娠結局的潛在標志物。本研究對血清INHB與精液參數及血清FSH關系進行分析，結果顯示男方血清INHB與精子密度、精子活動率及精子總數呈正相關，而與血清FSH呈負相關，這也驗證了前面的論述。血清INHB由支持細胞和生精細胞共同生成，可能通過支持生殖細胞的發育，對其存活和成熟發揮作用，并促成血睪屏障的建立，導致精子釋放時相互分離，以此影響精子發生過程及生成數量[19]；也可能通過負反饋于FSH，調整精子的生成。因此，INHB可用于預測男性少弱精子癥患者行IVF臨床妊娠結局。

少弱精子癥患者行IVF臨床妊娠結局的影響因素很多，單一因素用于評價IVF成功與否均相對局限。本研究通過logistic回歸方法進一步對影響少弱精子癥患者行IVF臨床妊娠結局的危險因素進行分析，結果發現男方年齡、男方BMI、男方不良生活習慣、男方血清FSH、男方血清INHB、精子活力及精子密度均是影響少弱精子癥患者行IVF臨床妊娠成功的獨立危險因素(P<0.05)。故在臨床治療時，應特別關注30歲以上、肥胖、不良生活習慣多的男性患者，可通過測定血清FSH、INBH進行綜合判斷。最后，為進一步探討血清INHB的預測價值，以95.60 pg/mL作為預測的臨界值，通過繪制血清INHB對臨床妊娠結局的ROC曲線，得到AUC為0.865，靈敏度為76.6%，特異度為82.3%。

綜上所述，少弱精子癥患者的血清INHB水平與其精液參數及血清FSH密切相關，對IVF臨床妊娠結局具有一定的預測價值。本研究更多考察男性因素對妊娠結局的影響，但不孕不育影響因素眾多，作用機制復雜，單一參數不可能準確、全面地反映整個生精過程，故臨床治療時需進行綜合判斷。