前列腺癌患者癌組織中miR- 183- 5p表達的意義及其診斷價值分析

吳繼宏，梁泰生，高宏君，羅向東，吳剛

(廣西中醫藥大學附屬瑞康醫院 泌尿外科，廣西 南寧 530000)

前列腺癌(prostate cancer，PCa)在年齡≥50歲的男性中較常見，隨年齡增長，其患病風險相應增高。該病發病危險因素包括不良飲食習慣、遺傳史、年齡等，是導致男性腫瘤患者死亡的重要因素之一[1- 2]。研究表明PCa具有無限生長傾向以及轉移風險高的特點，但該病早期缺乏典型癥狀，患者不易察覺，當出現明顯癥狀時，通常已進展至中晚期，腫瘤生長可累及周圍組織，或伴有轉移，錯過最佳干預時機，預后較差[3]。因此，盡早對PCa進行診斷是改善預后的關鍵。由于該病的發病機制比較復雜，涉及一系列基因、蛋白等的參與，臨床仍需探索相關的基因、蛋白作為腫瘤標志物，為PCa診療提供新靶點。目前，已有大量研究提示微小核糖核酸(microRNA，miR)與細胞分化、代謝、增殖等過程有關，在PCa、肝癌、肺癌等惡性腫瘤中具有調節功能[4]。朱龍萍等[5]指出miR- 183- 5p在食管鱗狀癌組織中呈高表達，其表達可能與淋巴結轉移有關。還有研究發現子宮內膜癌組織中可見miR- 183- 5p表達下調，具有抗腫瘤活性[6]。這表明miR- 183- 5p表達與腫瘤發生有關，且在不同腫瘤中的表達存在特異性。Larne等[7]研究則提示miR- 183可能通過調節前列腺特異性抗原(PSA)水平影響PCa的進展。miR- 183- 5p是從miR- 183前體的5′端臂加工而來，間接推測miR- 183- 5p異常表達可能也會影響PCa患者的病情?；诖耍狙芯刻接慞Ca患者癌組織中miR- 183- 5p的表達水平及其診斷價值，以期協助該病的早期診療。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2018年9月至2021年5月收治的PCa患者117例作為PCa組，同期收治的良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)患者65例為BPH組。納入標準：(1) PCa組：病理診斷為PCa的首診患者；就診時無急性或慢性炎癥者；術前未行新輔助治療者；自愿簽署同意書者。(2) BPH組：臨床診斷為BPH而行電切手術治療者；就診時無急性或慢性炎癥者；自愿簽署同意書者。排除標準：患嚴重心腦血管疾病(例如急性心肌梗死、腦卒中等)者；患其他部位的原發性腫瘤者；因PCa復發就診者；既往有血液系統疾病、自身免疫性疾病、傳染性病史者；急性尿潴留者。研究方案獲醫院倫理委員會批準，兩組患者年齡、體質指數、前列腺體積、高血壓史、糖尿病史等比較差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患者基線資料比較

1.2 檢測方法

通過手術獲取組織樣本，利用實時逆轉錄聚合酶鏈反應(quantitative real- time reverse transcription polymerase chain reaction，qRT- PCR)測定組織中miR- 183- 5p表達水平。主要儀器為熒光定量PCR儀(江蘇迅睿生物技術有限公司，MA- 688型)、電熱恒溫水槽(上海森信實驗儀器有限公司，DK- 8D型)、離心機(湘儀離知機儀器有限公司，YXJ- 2型)。主要試劑為乙醇、異丙醇、氯仿、逆轉錄試劑、PCR檢測試劑，購自美國GIBCO公司。首先利用Trizol試劑對組織總RNA進行提取，取組織樣本0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，置入研缽內，并加液氮，研磨，加裂解液，待裂解充分后移至EP管內，振蕩，促使組織團塊消失。加入0.2 ml氯仿，4 ℃下離心15 min(12 000 r·min-1)，待離心完畢，可見3層水相，取上層無色水相置于EP管內，加入0.6 ml異丙醇，室溫下反應10 min。4 ℃下離心10 min(12 000 r·min-1)，對總RNA管底沉淀物進行觀察，棄上清液。加入1.0 ml 75%乙醇，4 ℃下離心5 min(12 000 r·min-1)，棄上清液。再次4 ℃下離心10 min(12 000 r·min-1)，對總RNA管底沉淀物進行觀察，棄上清液。風干3 min，加入DNA酶Ⅰ 30 μl，促進溶解、混勻。檢測RNA樣本濃度與純度，A260 nm/A280 nm值范圍需在1.8～2.1之間，確定樣本符合要求后，存至-80 ℃溫度下。采用逆轉錄試劑對樣本進行逆轉錄，合成cDNA，行qRT- PCR擴增，并采用熒光定量PCR儀進行檢測。PCR反應條件：94 ℃ 3 min預變性；94 ℃ 30 s變性，50 ℃ 30 s退火，72 ℃ 60 s延伸，45個循環。引物序列：(1) miR- 183- 5p上、下游序列分別為5′- GGTTTCATCCAGGATCGAGCAGG- 3′、5′- ACAAAGATGGTCACGGTCTGCC- 3′；(2) 內參引物U6上、下游序列分別為5′- CTCGCTTCGGCAGCACA- 3′、5′- AACGCTTCACGAATTTGCGT- 3′。采用2-ΔΔCt法表示miR- 183- 5p相對表達量。

1.3 統計學處理

采用SPSS 20.0軟件行數據分析，分別以常數(百分比)、均數±標準差表示計數、計量資料，分別行χ2、獨立樣本t檢驗。繪制受試者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲線分析miR- 183- 5p診斷PCa的曲線下面積(area under the curve，AUC)，利用Kappa檢驗分析miR- 183- 5p與病理診斷PCa的一致性，Kappa值范圍-1～1，越接近-1或1表明一致性越高，通常在0～1間，該值范圍0.1～0.20、0.21～0.40、0.41～0.60、0.61～0.80、≥0.81分別表示一致性極低、輕度一致性、中度一致性、高度一致性、完全一致。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 兩組樣本組織內miR- 183- 5p表達比較

miR- 183- 5p表達量PCa組為3.96±1.03，BPH組為1.86±0.76，PCa組表達量高于BPH組(t=14.397，P<0.001)。根據PCa組miR- 183- 5p表達量均值將PCa組分成高表達組(表達量>3.96，65例)與低表達組(表達量≤3.96， 52例)。

2.2 miR- 183- 5p表達與PCa病理特征的關系

miR- 183- 5p高表達組血清PSA水平≥20 ng·ml-1、Gleason評分≥7分、腫瘤低分化、腫瘤分期Ⅲ期、腫瘤直徑≥3 cm、血管間隙浸潤、腫瘤轉移者占比均高于miR- 183- 5p低表達組(P<0.05)，見表2。

表2 miR- 183- 5p表達與PCa病理特征的關系 例

2.3 miR- 183- 5p表達量對PCa的診斷價值分析

miR- 183- 5p表達量診斷PCa的AUC為0.898(標準誤=0.024，P<0.001，95%CI為0.851～0.945)，最佳界值為2.490，敏感度為86.32%，特異度為86.15%，見圖1。

圖1 miR- 183- 5p表達量診斷PCa的ROC曲線

2.4 miR- 183- 5p表達量與病理診斷PCa的一致性分析

納入的182例研究對象中，病理診斷為PCa 117例，BPH 65例，而miR- 183- 5p診斷提示PCa 110例，BPH 72例。以病理診斷為金標準，經miR- 183- 5p檢出的110例PCa患者中有101例與病理診斷相符，72例BPH患者中有56例與病理診斷相符。miR- 183- 5p表達水平診斷PCa的敏感度為86.32%(101/117)，特異度為86.15%(56/65)，準確率為86.26%(157/182)，陽性預測值為91.82%(101/110)，陰性預測值為77.78%(56/72)。Kappa檢驗提示miR- 183- 5p表達量與病理診斷PCa具有高度一致性(Kappa值=0.708，P<0.001)。

3 討 論

PCa是中老年男性的常見病，近年來我國PCa患病率逐年增高。由于早期癥狀比較隱匿，導致多數患者就診時病情已進展得比較嚴重，常伴有骨轉移，因而治療難度與死亡率較高[8]。研究表明，miRNA能與靶基因3′- URT結合，或者對靶基因miRNA進行降解，影響癌細胞的凋亡及增殖，發揮抑癌或促癌作用，miRNA對腫瘤細胞的調節已成為臨床研究熱門課題[9]。腫瘤的發生與進展過程涉及機制復雜，在腫瘤進展期間可見相關miRNA表達水平增高或下降，促進或抑制癌細胞分化、增殖與凋亡，通過分析相關miRNA在PCa組織中的表達，能為PCa的早期診斷提供依據。

miR- 183- 5p具有促癌作用，它能通過對α- 1- B糖蛋白進行靶向調控，促進癌細胞增殖與遷移[10]。另有研究指出miR- 183- 5p表達失調與PCa發生有關[11]。本研究發現與BPH組織相比，PCa組織中miR- 183- 5p表達量增高，提示miR- 183- 5p在PCa中發揮了促癌作用。miR- 183- 5p是miR- 183基因簇的重要成員，而miR- 183在腫瘤中可見異常表達[12]。miR- 183- 5p作為miR- 183基因簇中的一員，也與腫瘤疾病存在密切關系，它在膀胱癌組織中可見表達上調，其可能通過調節某些相關信號通路(例如上皮間質轉化通路)，促進膀胱癌進展[13]。miR- 183- 5p可能靶向程序性細胞死亡因子4抑制腫瘤細胞凋亡，促進腫瘤進展[14]。外泌體介導的miR- 183- 5p能夠從腫瘤細胞移至巨噬細胞，可對腫瘤相關巨噬細胞表型進行調節，加速腫瘤發展與轉移，這可能是miR- 183- 5p的促癌機制[15]。

PCa的病理特征比較復雜，在腫瘤進展過程中，相關癌基因的表達可能受不同病理特征影響，通過明確其表達與病理特征的關系，有利于進一步明確腫瘤進展機制[16]。本研究結果顯示，癌組織中miR- 183- 5p表達與PCa患者的血清PSA水平、Gleason評分、腫瘤分化程度、腫瘤分期、腫瘤直徑、血管間隙浸潤、腫瘤轉移相關。PSA是典型的PCa標志物，對這類腫瘤篩查有一定價值，其濃度與前列腺細胞數目存在關聯，當前列腺組織受損后可見血PSA水平增高，當PSA水平超過20 ng·ml-1時，提示極有可能為PCa[17]。但有研究認為單純采用血PSA水平診斷PCa時的特異度非常低[18]。腫瘤分化程度、臨床分期、腫瘤直徑、有無轉移與浸潤是評估腫瘤進展程度的常見病理特征，腫瘤進展越嚴重，臨床分期越高，分化程度越低，生長速度越快，轉移與浸潤風險越大。癌組織中miR- 183- 5p表達與上述病理特征有關，原因可能為miR- 183- 5p在PCa中有促癌作用，其表達增高能促進癌細胞增殖，致病灶惡性程度增強，加速病情發展。本研究結果顯示，癌組織中miR- 183- 5p表達對PCa有一定診斷價值，與病理診斷具有較高一致性。Pudova等[19]發現，miR- 183- 5p與PCa淋巴結播散有關，其參與了PCa進展。本研究則更深入闡述了癌組織中miR- 183- 5p表達對PCa的診斷價值，證實其與病理診斷一致性高，臨床有望將其作為預測或診斷PCa的靶標。

綜上所述，PCa組織中miR- 183- 5p表達增高，其表達變化與PCa患者多種病理特征有關，對PCa診斷有一定價值。此外，本研究也存在不足，僅分析了miR- 183- 5p在PCa組織中的表達水平，尚未進行體外實驗明確miR- 183- 5p的靶基因，日后有待對此深入探討。