高效液相色譜法測定瓜子中糖精鈉譜峰判定研究

郁蕉竹，張宏宏，周長民，崔明雪，張天實

高效液相色譜法測定瓜子中糖精鈉譜峰判定研究

郁蕉竹，張宏宏，周長民，崔明雪，張天實

（沈陽市食品藥品檢驗所，遼寧 沈陽 110000）

針對在瓜子中糖精鈉的液相色譜法測試過程中，容易出現的糖精鈉假陽性問題，通過調整流動相比例，使樣品中糖精鈉譜峰和干擾譜峰分離，從而對樣品中糖精鈉進行準確的定性和定量。測試結果表明，采用GB 5009.28—2016 第一法，（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5時，瓜子樣品的譜圖中出現糖精鈉干擾峰；調整流動相比例為（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11后，糖精鈉譜峰與干擾峰分離完全。對樣品進行回收率和精密度實驗，糖精鈉的回收率分別為99%，102.3%和102.2%，RSD分別為3.1%，2.3%和2.5%，能夠滿足檢驗要求。

液相色譜法；糖精鈉；假陽性；流動相比例

瓜子是日常生活中常見的休閑炒貨食品。糖精鈉以其價格低廉、甜度高的特點被廣泛地添加到食品中，用來增加食品的甜味，提高口感度，提高人們的食欲。并且糖精鈉滲透力強，能完全進入瓜子殼內，不易吸潮，因此被廣泛地用作加工瓜子的甜味劑。糖精鈉的甜度是蔗糖的200～500倍，不參與人體代謝，對人體無營養價值，過量添加食用有害人體健康[1-3]。我國在GB 2760—2014《食品添加劑衛生標準》中，規定了糖精鈉的適用范圍和使用量，其中帶殼熟制堅果與籽類限量≤1.2 g·kg-1。

目前檢測糖精鈉的方法有液相色譜法[4-6]、液相色譜串聯質譜法[7]、非水滴定法[8]、分光光度計法[9]、拉曼光譜法[10]等。國家標準規定的糖精鈉的檢測方法為 GB 5009.28—2016第一法液相色譜法。由于食品中成分較復雜，有些樣品采用國標的前處理往往并不能除去所有的干擾因素。筆者在食品檢驗過程中發現，采用GB 5009.28第一法[11]對瓜子中糖精鈉進行測定時，很容易出現干擾峰，導致糖精鈉假陽性或定量偏差的情況發生，影響最終結果的判定，在平時工作中需要引起重視。因此，瓜子中糖精鈉的測試需進一步調整測試條件重新測定，避免造成誤判。

一般解決液相色譜干擾峰的方法有調整流動相體系，包括改變緩沖鹽、調整流動相比例、改變體系pH、等度調整為梯度洗脫、調整流速等；更換色譜柱，采用不同碳裁量、不同色譜柱填料粒度或者不同長度的色譜柱，來提高譜峰的分離度[12]；對于一些特殊樣品，則需要在樣品前處理階段將雜質去除。本文提供一種解決高效液相色譜法測定瓜子中糖精鈉過程中干擾峰問題的簡單有效的手段。通過調整流動相比例優化色譜條件，筆者嘗試了多個流動相比例，調整范圍從（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5 調至87∶13，每次調整2份，經測試發現，在流動相比例為89∶11時，標準樣品中各個譜峰能夠得到有效的分離。且在該比例下，瓜子中待測物質糖精鈉譜峰與干擾峰分離，采用該種色譜條件，可以對瓜子中的糖精鈉進行準確定量，得到滿意的結果。

1 實驗部分

1.1 實驗原理

糖精鈉是一種水溶性食品添加劑。用水充分提取后，用配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器的高效液相色譜對其含量進行測定。

1.2 試劑試藥

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉混合標準液，1 000 mg·L-1；脫氫乙酸標準品1 g，99.90%，上海安譜實驗科技股份有限公司；乙酸銨色譜純。

1.3 標準溶液配制

脫氫乙酸儲備液（1 000 mg·L-1）：準確稱取脫氫乙酸標準品0.050 g于50 mL 容量瓶中，用5 mL 氫氧化鈉溶液（20 g·L-1）溶解，用水定容。

安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、脫氫乙酸混合標準系列工作溶液:準確吸取安賽蜜、苯甲酸、山梨酸和糖精鈉混合標準溶液及脫氫乙酸儲備液各0.01、0.05、0.10、0.20、0.50和0.80 mL, 用水定容至10 mL, 配制成質量濃度為1.00、5.00、10.0、20.0、50.0、80 mg·L-1混合標準工作溶液，臨用現配。

1.4 樣品中糖精鈉的提取

準確稱取約2 g (精確到0.001 g)試樣于50 mL具塞離心管中, 加水約30 mL, 渦旋混勻, 于50 ℃水浴超聲20 min, 于8 000 r·min-1離心2 min, 將水相轉移至50 mL容量瓶中, 于殘渣中加水20 mL, 渦旋混勻后超聲5 min, 于8 000 r·min-1離心2 min, 將水相轉移到同一50 mL容量瓶中, 并用水定容至刻度, 混勻。取適量上清液過0.22 μm濾膜, 待液相色譜測定。

1.5 儀器條件

儀器：美國Waters2695高效液相色譜儀、配有PDA2998檢測器及Empower化學工作站。

色譜柱:賽默飛syncronis C18反相色譜柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)。

流動相: 乙酸銨緩沖液(20 mmol·L-1)+甲醇。

儀器條件：柱溫35 ℃ 檢測波長230 nm 流速1 mL·min-1進樣量10 μL。

2 結果與討論

2.1 標準曲線

以乙酸銨緩沖液(20 mmol·L-1)+甲醇=89+11的流動相對系列濃度的標準樣品進行液相色譜測定。以樣品峰面積為縱坐標、標準品濃度為橫坐標，繪制標準曲線，如圖1所示。計算線性回歸方程=2.52+004-9.41+002，2為0.999 858。說明在該色譜條件下，糖精鈉呈現出良好的線性，滿足GB/T 27404 F.2的要求。

圖1 糖精鈉標準曲線

2.2 流動相V（乙酸銨）∶V（甲醇）=95∶5標樣及樣品譜峰

采用GB 5009.28—2016第一法對樣品進行測試，流動相比例為（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5，糖精鈉標準品質量濃度為10 mg·L-1的液相色譜譜圖及對應的光譜圖如圖2，圖3所示。

圖2 糖精鈉標準品色譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5

圖3 糖精鈉標準品光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5

待測瓜子樣品的色譜圖及對應光譜圖如圖4所示。

圖4 瓜子中糖精鈉液相色譜圖及光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=95∶5

從圖4可以看出，在糖精鈉標樣出峰時間處，樣品譜圖中有譜峰出現，對照光譜圖，與標樣的光譜圖不一致。說明樣品中可能存在干擾峰與糖精鈉譜峰重疊，進一步說明在該色譜條件下不能對樣品中是否含有糖精鈉以及樣品中糖精鈉的含量進行正確判斷。

2.3 流動相V（乙酸銨）∶ V（甲醇）=89∶11標樣及樣品譜峰

圖5和圖6分別為調整流動相比例為（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11后，糖精鈉標準品質量濃度為10 mg·L-1的液相色譜譜圖及對應的光譜圖。

圖5 糖精鈉標準品色譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11

圖6 糖精鈉標準品光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11

圖7為該色譜條件下待測瓜子樣品的色譜圖及對應光譜圖。

圖7 瓜子中糖精鈉液相色譜圖及光譜圖

（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11

對照圖5，在糖精鈉標樣出峰時間處，樣品譜圖中有譜峰出現。對照圖6糖精鈉標品光譜圖，樣品和標品光譜圖一致。這說明在該流動相比例的條件下，樣品中存在干擾峰與糖精鈉譜峰分離。說明調整流動相比例是一種解決瓜子中糖精鈉假陽性報告的有效手段，調整流動相比例后，能夠對瓜子中的糖精鈉進行正確定性和準確定量。

2.4 回收率及精密度實驗

分別稱取4組瓜子樣品2.000 g（精確至3位小數），每組6份樣品，4組樣品中分別加入標準品1 000 mg·L-10，0.1，0.2，1 mL，混勻。加標樣品與試樣用1.4實驗方法提取。采用流動相（乙酸銨）∶（甲醇）=89∶11對樣品進行測定。如表1所示，糖精鈉加標回收率分別為99%，102.3%和102.2%，RSD分別為3.1%，2.3%和2.5%。糖精鈉回收率和精密度均能夠滿足GB/T 27404以及GB 5009.28的要求。

表1 糖精鈉回收率及精密度實驗結果（n=6）

3 結 論

本文分別采用乙酸銨+甲醇=95+5和乙酸銨+甲醇=89+11兩種流動相，對瓜子中糖精鈉的含量進行測定。研究發現當乙酸銨+甲醇=89+11時，樣品中糖精鈉與干擾峰重疊現象消失，糖精鈉與標準樣品的譜峰出峰時間及光譜圖一致，能夠對糖精鈉進行準確定性定量。標樣曲線的2為0.999 858，線性關系良好，滿足GB/T 27404要求，糖精鈉回收率和精密度均滿足檢驗要求。實驗結果表明調整流動相比例是一種解決采用國標方法進行瓜子中糖精鈉的液相色譜法測定過程中，干擾峰導致的糖精鈉難以定性定量問題的簡單有效的手段。

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Study on Determination of Saccharin Sodium in Melon Seeds by HPLC

Aiming at the false positive problem of saccharin sodium test in melon seeds by HPLC method, the spectrum peak of saccharin sodium and the interference spectrum peak were separated by adjusting the ratio of mobile phase, so that the saccharin sodium in the sample was accurately qualitatively and quantitatively determined. The results showed that using the first method of GB 5009.28—2016, saccharin sodium interference peak appeared in the spectrum of melon seed samplewhen the ratio of ammonium acetate to methanol was 95∶5. After adjusting the mobile phase ratio of ammonium acetate and methanol to 89∶11, the spectrum peak of saccharin sodium was completely separated from the interference peak. The recovery and precision experiments were carried out. The recoveries of saccharin sodium were 99%, 102.3% and 102.2%, RSD were 3.1%, 2.3% and 2.5% respectively, which met the test requirements.

HPLC; Saccharin sodium; False positive; Mobile phase ratio

TS207.3

A

1004-0935（2022）04-0573-04

2021-12-01

郁蕉竹（1989-），女，遼寧省沈陽市人，工程師，碩士，2013年畢業于大連理工大學化學工程專業，研究方向：食品檢測與分析。