微型化非水滴定法在普盧利沙星藥物含量中的檢測分析

劉秀清 任春曉

（黑龍江省藥品審核查驗(yàn)中心，黑龍江 哈爾濱 150090）

普盧利沙星是新型的抗菌類藥物，隸屬氟喹諾酮類，能夠?qū)δc球菌等淺表性皮膚感染進(jìn)行治療，當(dāng)前測定藥物含量的方式眾多，掃描、光度法等均包含其中。上述方式雖然比較準(zhǔn)確，但花費(fèi)時(shí)間較長，對(duì)儀器同樣具有較高精度，不利于生產(chǎn)期間的質(zhì)量測定。因?yàn)槠毡R利沙星為一類有機(jī)含氮化合物，水溶液以堿性展現(xiàn)出來，非水介質(zhì)堿性過強(qiáng)，能夠開展滴定剖析。微型定量對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析，能夠?qū)?shí)驗(yàn)裝置簡化，將試劑用量減少，節(jié)約更多的費(fèi)用與時(shí)間，將污染減少。鑒于此，研究借助微型化非水滴定法對(duì)普盧利沙星片藥物中的含量進(jìn)行測定，對(duì)實(shí)驗(yàn)的精密度與準(zhǔn)確度進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1 資料與方法

1.1 儀器試劑：電子分析天平（上海，型號(hào)：FA1004），磁力攪拌器（武漢，型號(hào)：DF-101S），電熱恒溫干燥箱（北京），超聲儀（上海，型號(hào)：SK2200H），玻璃電極（姜堰市）。飽和甘汞電極，冰乙酸、結(jié)晶紫，原料藥是分析純，實(shí)驗(yàn)用水是雙蒸水，指標(biāo)劑0.1mol/L高氯酸滴定液配制按對(duì)應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)實(shí)施[1]。

1.2 檢測方法：1組采用微型化滴定法檢測，取天平稱取需檢驗(yàn)的藥品0.1g，將其與0.1mol/L高氯酸滴定液滴定相溶，對(duì)對(duì)應(yīng)電位進(jìn)行記錄，滴定數(shù)據(jù)借助空白試驗(yàn)來校正。2組運(yùn)用常量滴定法測定，取天平對(duì)需檢驗(yàn)的藥品0.65g稱重，與250mL冰醋酸相溶，滴定用0.1mol/L高氯酸滴定液，統(tǒng)計(jì)電位數(shù)據(jù)，借助空白試驗(yàn)對(duì)滴定數(shù)值進(jìn)行矯正。

1.3 確定滴定終點(diǎn)：準(zhǔn)確取出0.3g待檢藥品，與50mL冰醋酸相溶，并加入1滴結(jié)晶紫指示液，滴加0.1mol/L高氯酸滴定液，指示可用玻璃電極，參比電極是飽和甘汞電極，經(jīng)對(duì)滴定體積與消耗的滴定能夠體現(xiàn)用藥的電位和顏色變化，滴定結(jié)束后，制出E-V曲線，能夠判斷是否出現(xiàn)突躍方面的問題。

2 藥品雜質(zhì)控制方法

2.1 薄層色譜法：薄層色譜是半定量方式，雖然這種方式精密度低于高效液相色譜法，但檢查物質(zhì)時(shí)跨度較大，顯斑時(shí)主要是紫外、顯色法，不同顯色劑能夠用在官能團(tuán)鑒別。一般雜志檢查法記載多種顯斑方式，無論是吸附加或是分配色譜，都容易實(shí)現(xiàn)。不同顏色雜質(zhì)比較清晰，方法比較簡單且方便實(shí)施，是一種良好的雜質(zhì)檢驗(yàn)方式[2]。但薄層色譜具有諸多影響因素，不管是方法還是日常檢驗(yàn)均需注意靈敏度、比移植、分離效能等。

2.2 高效液相色譜法：高效液相色譜法具有較高靈敏度，定量重現(xiàn)性與耐用性較好，特別是對(duì)同錫類物與降解產(chǎn)物具有良好的分離效果，但當(dāng)前多數(shù)反相柱器，于相同色譜柱上，眾多極性物質(zhì)不會(huì)保留在柱上，和溶峰保留時(shí)間一致，說明峰面積穩(wěn)定度不夠，數(shù)據(jù)容易出現(xiàn)錯(cuò)誤，極性物質(zhì)比主成分小的，柱上難以洗脫，保留時(shí)間較長。紫外吸收系數(shù)過小，吸收部位差值較大運(yùn)用主成分吸收峰波檢測時(shí)，容易致使數(shù)據(jù)錯(cuò)誤，甚至無法檢出，若運(yùn)用含量測定方式，容易產(chǎn)生物料不平衡，需考慮分離度、理論板數(shù)、準(zhǔn)確度。

2.3 氣相色譜法：要求和相同高度的相色譜法一致，但考察系統(tǒng)適用性，適當(dāng)對(duì)柱長進(jìn)行改變，對(duì)固體液的濃度進(jìn)行改變，改善載氣流速，重視柱溫。分離度不佳時(shí)，可借助程序升溫，應(yīng)用毛細(xì)管柱時(shí)，需對(duì)分流比進(jìn)行考察[3]。

2.4 熒光分光光度法：熒光雜質(zhì)較高，發(fā)射長處熒光強(qiáng)度的控制可借助激發(fā)波長下控制，可運(yùn)用熒光標(biāo)記法，鹽酸愛沙布托中熒光標(biāo)記試劑可用氨基丁醇來標(biāo)記，借助激發(fā)光，檢測發(fā)射光強(qiáng)度。

3 觀察指標(biāo)

①檢測精密度進(jìn)行比較；②穩(wěn)定性試驗(yàn)比較。

4 結(jié)果

4.1 精密度測定：精密取出相同批次的普盧利沙星原料藥，分別運(yùn)用常量和微型化方式重復(fù)測定6次，常量法測定數(shù)據(jù)平均值95.8%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.8%。微型化方式精密度和常量法數(shù)據(jù)平均值99.4%，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），詳見表1。

表1 精密度測定

4.2 穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密選相同批次的普盧利沙星原料藥0.3g，置放在100mL容量瓶，并添加合理的冰乙酸，經(jīng)超聲溶解達(dá)刻度稀釋，于不同時(shí)間段間隔取出溶液，運(yùn)用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)液測定，對(duì)間隔時(shí)間的測定數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，0~5h內(nèi)眾多數(shù)據(jù)均差異不明顯（P>0.05）。

5 討論

喹諾酮類用藥是最近幾年發(fā)展迅速的抗菌藥物，抗菌作用較強(qiáng)，結(jié)構(gòu)簡單，且用藥方便，其與常用抗菌藥物沒有較差耐藥性，合成工藝穩(wěn)定，療效價(jià)格高，受世界各國重視與關(guān)注，發(fā)展為開發(fā)與應(yīng)用廣泛的品種[4]。當(dāng)前，世界上市的藥物品種已有幾十個(gè)，為抗感染用藥中開發(fā)最活躍的領(lǐng)域。藥物化學(xué)發(fā)展下，人們經(jīng)計(jì)算機(jī)輔助用藥設(shè)計(jì)與對(duì)用藥的靶向作用，能夠?qū)⑺幬锏纳疃扰c廣度延伸，發(fā)展前景良好。普盧利沙星隸屬生物堿鹽類，水溶液會(huì)以弱堿性展現(xiàn)出來，很難運(yùn)用水滴定法測定，非水介質(zhì)中冰乙酸酸性，堿性會(huì)增強(qiáng)[5]。建立在這基礎(chǔ)上，有必要運(yùn)用高氯酸充當(dāng)?shù)味▌Y(jié)晶紫指示劑情況下滴定，終端物是酸性高氯酸鹽。結(jié)晶紫于較強(qiáng)酸性溶液中顯示為綠色，pH顯示為藍(lán)色，pH＞3顯紫色，能夠?qū)Φ味ńK點(diǎn)反應(yīng)進(jìn)行判定。微型滴定應(yīng)用的裝置能夠在酸堿滴定中應(yīng)用，應(yīng)用范圍廣泛，常量遞進(jìn)的滴定管攜帶轉(zhuǎn)移不夠方便，僅供實(shí)驗(yàn)操作使用，不能在現(xiàn)場進(jìn)行測定。加上常量遞進(jìn)法使用的原料過大，不夠環(huán)保，會(huì)增加成本，終點(diǎn)判定可遵循電位法，并結(jié)合指示劑顏色演變進(jìn)行觀察，熟悉掌握顏色變化，能夠按照指示劑顏色發(fā)展來測定滴定終點(diǎn)。

本項(xiàng)研究中，兩種方法所測定的準(zhǔn)確度、精密度較高，偏差小，表示沒有精密測量儀的情況下，藥品含量的測定用微型化非水滴定法實(shí)施，不僅操作簡單，也是比較實(shí)用的控制質(zhì)量的方式。氟喹諾酮類用藥中，普盧利沙星為一類水溶液，呈弱堿性生物堿鹽，水滴定法很難發(fā)揮良好的測定效果，但此用藥于冰乙酸酸性非水物中堿性較高。按照上述實(shí)施，能夠?qū)⒏呗人岢洚?dāng)?shù)味▌谥谱鹘Y(jié)晶紫指示劑基礎(chǔ)上滴定，獲取重點(diǎn)產(chǎn)物，酸性高氯酸鹽，結(jié)晶紫添加強(qiáng)酸性溶劑呈綠色，pH=2時(shí)呈藍(lán)色，pH＞3時(shí)，呈紫色，所以，可將結(jié)晶紫充當(dāng)判定反應(yīng)的滴定終點(diǎn)。研究運(yùn)用的微型滴定裝置對(duì)酸堿滴定比較適合，應(yīng)用范圍甚廣，常量滴定裝置過多，滴定管等諸多儀器，但不容易攜帶，比較適合實(shí)驗(yàn)室操作，不方便現(xiàn)場檢驗(yàn)，加上常量滴定法需過多劑量的原料用藥，存在污染較大，成本過大。非水滴定法重點(diǎn)顏色比較復(fù)雜且容易多變，不同實(shí)驗(yàn)人需用不同厭惡感受和描述，重點(diǎn)判定數(shù)據(jù)需以電位法充當(dāng)判定指標(biāo)。熟練掌握指示劑顏色變化的同時(shí)將其和指示劑顏色變化聯(lián)合，經(jīng)觀察指示劑顏色變化對(duì)滴定終點(diǎn)進(jìn)行評(píng)估，表示無精密測量儀器能夠運(yùn)用微型化非水滴定法測定了解的藥品含量。

綜上所述，微型化非水滴定法是比較安全、可行的質(zhì)量控制方式，應(yīng)用效果好。