細菌培養與涂片鏡檢在微生物檢驗中的臨床價值分析

韓曉云

（大連市友誼醫院，遼寧 大連 116011）

隨著現代醫學技術的迅猛發展，診斷、檢測技術不斷更新，但微生物測試的細菌培養研究中，盡管已有可以自動細菌培養的儀器，但培養仍需要較長時間，并且操作不當可能影響細菌培養的結果，不能讓患者得到快速且準確地報告[1-2]。細菌培養耗時長以及結果的準確性低仍是微生物檢測中的兩個主要問題[3]。然而，在細菌培養之前注意直接涂片和染色顯微鏡檢查，提供快速診斷信息，評價標本質量，對加強質量控制具有重要意義，并指導藥物的使用和重獲某些重癥患者的生命，有效地提高細菌培養的速度和準確性[4-5]。現對細菌培養與涂片鏡檢進行研究比較，對比兩種方法的準確性，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以我院住院部和門診部送檢的300例樣品為研究標本，分別進行細菌培養和涂片鏡檢，對比兩種診斷方法的涂片鏡檢合格率與細菌培養的檢出率。

1.2 方法 涂片鏡檢，即將標本進行直接涂片和離心沉淀后涂片，隨后分別進行革蘭染色和抗酸染色，鏡下觀察，若發現存在涂片陽性則報告其形態，若未找到細菌或無法辨認則報告涂片陰性。

細菌培養，根據涂片結果為標本選擇不同的培養基，孵育18～24 h觀察結果，48 h無細菌生長則報告無菌生長。

1.3 觀察指標 標本直接涂片鏡檢標準分為三級：A級：低倍顯微鏡的白細胞不低于25，鱗狀上皮細胞不超過10；B級：低放大倍數的白細胞不低于25，鱗狀上皮細胞數在10～25，并且細菌不少于3種；C級：鱗狀上皮細胞不小于25，是不合格的標本。A、B級適合細菌培養，C級不適合細菌培養。

細菌培養后，直接涂抹革蘭染色鏡檢，觀察到針對主要病原體和致病細菌或顯性生長細菌的菌落特征。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0統計軟件進行數據處理及統計學分析，計數資料以率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 標本直接涂片鏡檢的合格率 根據標本涂片鏡檢的三級標準，得到研究結果如下：在300例標本中，涂片鏡檢合格的標本259例，合格率為86.33%，其中A類標本132例，占總數的44.00%，B類標本127例，占總數42.33%，涂片鏡檢不合格標本C類41例，占總數的13.67%。

2.2 標本涂片鏡檢ABC三類與細菌的檢出率的關系 300例標本中有205例標本檢出致病菌或優勢生長菌，陽性檢出率為68.33%，涂片鏡檢合格標本有259例，涂片鏡檢合格的標本檢出細菌數為192例，檢出率為74.13%，其中A級檢出細菌數107例，檢出率為55.72%；B級檢出細菌數85例，檢出率為44.27%。涂片不合格標本有41例，檢出細菌13例，檢出率為31.70%（13/41）。A級細菌檢出率明顯高于B級、C級，結果具有統計學意義（A與B相比較，χ2=6.740，P=0.007；A與C相比較，χ2=35.857，P＜0.001）；B級細菌檢出率明顯高于C級，結果具有統計學意義（χ2=15.820，P＜0.001）。

2.3 合格標本涂片鏡檢結果與細菌培養的符合率 259例合格標本共檢出致病菌214例，涂片鏡檢合格標本涂片與細菌培養結果總符合率為82.62%。在214株陽性標本中檢出革蘭陰性菌135例，檢出率為63.08%；革蘭陽性菌43例，檢出率為20.09%，檢出的革蘭陰性菌主要為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及流感嗜血桿菌；革蘭陽性菌主要為金黃色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎鏈球菌；真菌36例，檢出率為16.82%，包括白色念珠菌及熱帶念珠菌。涂片陰性而培養出致病菌11例，檢出率為26.82%；鏈球菌屬3例，檢出率為27.27%；腸桿菌屬細菌4例，檢出率為36.36%；白念珠菌3例，檢出率為27.27%；非發酵菌1例，檢出率為9.09%。涂片檢出細菌而細菌培養未培養出致病菌的45例，占比為17.38%，詳細結果見表1。

表1 合格標本涂片鏡檢結果與細菌培養的符合情況

3 討論

涂片鏡檢和細菌培養是細菌學檢測的基本方法[6]。涂片顯微鏡操作簡單，細菌達到一定數量時，可以快速檢測樣本[7]。具有初步診斷但是源自正常菌群的位點的標本具有有限的臨床意義。細菌培養是最可靠的細菌學檢測方法，但細菌培養技術需要很長時間，培養過程容易產生污染，影響結果，實際工作中很難滿足臨床需求[8-9]。例如，腦脊液涂片，取腦脊液涂片鏡檢發現致病菌，其最初可以診斷為由腦膜炎奈瑟球菌引起的腦膜炎[10]。直接涂抹深層穿刺液以檢測革蘭陽性球菌，陰性桿菌，并在第一時間向診所提供此信息。最初在臨床中使用抗生素是有幫助的。實驗室需要進行細菌培養的分級報告（涂片后，藥物敏感后和鑒定后的順序報告），并強調直接涂片的重要性[11]。同時，細菌培養清楚地表明革蘭染色是細菌鑒定的前提。同時涂片觀察還可以糾正儀器報告的錯誤，例如細菌和酵母樣細菌，這些細菌很容易與形態學區分開來，并且可以完全避免誤報。耐酸染色鑒定出抗酸桿菌，改良金色游泳染色是諾卡氏菌和紅球菌的鑒定試驗之一，因此可以看出涂片染色的重要性[12-13]。涂片顯微鏡和細菌培養很重要。例如，涂片可以快速檢測到標本中的一定數量的死細菌和活菌，這不僅對非污染標本具有重要意義。此外，評估樣本質量和細菌分布在同樣十分重要[14]。細菌培養是黃金標準，陽性率也很高。臨床重點是細菌培養，因此實驗室工作人員應主動加強涂片的顯微鏡檢查。涂片顯微鏡對細菌培養結果具有重要的互補作用。另外，由于病原體的多樣性，生長特征是復雜的。特別是用于檢測一些生長緩慢的菌落，非常小或混合的細菌感染病原體[15]。

但二者同時進行診斷時，仍存在一定概率的誤差。細菌培養前涂片觀察到存在某細菌，但培養后其結果與培養前不一致，應及時從如下幾方面查找原因：①標本采集、運送等技術操作過程中存在不正確操作，細菌未能及時接種培養，造成細菌細胞死亡，產生假陰性結果，或外來細菌混入，產生假陽性結果[16-17]。②標本來自于已經接受抗菌藥物治療的患者，標本中存在殘余的抗生素抑制了細菌的生長，產生了假陰性結果。③不合適的培養基所提供的培養條件，如培養基成分比例、pH值、培養溫度、氣體環境等不能達到要求等，不利于細菌的繁殖，甚至使細菌發生形態、染色性質的變異。④實驗室內消毒不徹底，紫外燈照射時間過短，或操作不當，用過的培養物和培養基不及時處理，操作者無菌操作觀念淡薄，可造成實驗室內污染，使用培養結果與涂片結果不一致[18-19]。

文獻研究表明，涂片陽性和陰性細菌培養物中的一株G+桿菌培養48 h。在長時間培養至72 h后，G－細菌快速生長并且細胞量很大。抑制了G+球菌的生長。在不同培養基上生長或檢測相同屬是導致錯過診斷培養的因素之一[20]。本研究結果顯示，本研究結果表明，300例標本中，涂片鏡檢合格的標本259例，合格率為86.33%，其中A類標本132例，占總數的44.00%，B類標本127例，占總數42.33%，涂片鏡檢不合格標本C類41例，占總數的13.67%。300例標本中有205例標本檢出致病菌或優勢生長菌，陽性檢出率為68.33%，涂片鏡檢合格標本有259例，涂片鏡檢合格的標本檢出細菌數為192例，檢出率為74.13%，涂片不合格標本有41例，檢出細菌13例，檢出率為31.70%（13/41）。259例合格標本共檢出致病菌214例，涂片鏡檢合格標本涂片與細菌培養結果總符合率為82.62%。在214株陽性標本中檢出革蘭陰性菌135例，檢出率為63.08%；革蘭陽性菌43例，檢出率為20.09%，檢出的革蘭陰性菌主要為大腸埃希菌、肺炎克雷伯菌及流感嗜血桿菌；革蘭陽性菌主要為金黃色葡萄球菌、溶血葡萄球菌、肺炎鏈球菌；真菌36例，檢出率為16.82%，包括白色念珠菌及熱帶念珠菌。涂片陰性而培養出致病菌11例，檢出率為26.82%；鏈球菌屬3例，檢出率為27.27%；腸桿菌屬細菌4例，檢出率為36.36%；白念珠菌3例，檢出率為27.27%；非發酵菌1例，檢出率為9.09%。涂片檢出細菌而細菌培養未培養出致病菌的45例，占比為17.38%。

總之，涂片鏡檢可以提前做出預測報告，作為診斷的初步依據，指導臨床合理用藥，兩種診斷方法相互補充，可使臨床細菌學檢驗縮短報告時間，增加可靠性，為臨床正確分析細菌學檢驗結果提供參考。