miR-106a、miR-124表達水平與分化型甲狀腺癌發生發展及遠期生存率的關系

何巧靈　劉德偉　何美男　張佳露　龍娟　鄒夢晨

【摘要】 目的：分析miR-106a、miR-124表達水平與分化型甲狀腺癌發生發展及遠期生存率的關系。方法：選取2016年1-6月廣州市增城區中心醫院收治的62例分化型甲狀腺癌患者，行頸淋巴結穿刺和甲狀腺癌根治手術，檢測癌組織及癌旁組織的miR-106a、miR-124表達水平，分析miR-106a、miR-124表達水平與臨床病理特征的相關性和臨床預后的關系。結果：癌組織中miR-106a表達量高于癌旁正常組織，miR-124表達量顯著低于癌旁正常組織（P<0.05）;miR-106a在TNM分期Ⅲ期、淋巴轉移、腫瘤直徑>1 cm及被膜侵犯患者中呈較高表達，而miR-124在TNM分期Ⅲ期、淋巴轉移、腫瘤直徑>1 cm及被膜侵犯患者中呈較低表達（P<0.05）;miR-106a高表達患者5年生存率顯著低于低表達者，miR-124高表達患者5年生存率顯著高于高表達者（P<0.05）。結論：miR-106a、miR-124表達水平與分化型甲狀腺癌患者臨床分期和淋巴轉移有關，其水平表達與患者5年內生存率密切相關。

【關鍵詞】 miR-106a miR-124 甲狀腺癌

The Relationship between the Expression Levels of miR-106a and miR-124 and the Development and Long-term Survival Rate of Differentiated Thyroid Cancer/HE Qiaoling， LIU Dewei， HE Meinan， ZHANG Jialu， LONG Juan， ZOU Mengchen. //Medical Innovation of China， 2022， 19（11）： -116

[Abstract] Objective： To analyze the relationship between the expression levels of miR-106a and miR-124 and the occurrence， development and long-term survival rate of differentiated thyroid cancer. Method： Selected 62 patients with differentiated thyroid cancer admitted to Central Hospital of Zengcheng District from January 2016 to June 2016， underwent cervical lymph node puncture and radical thyroid cancer surgery to detect the expression levels of miR-106a and miR-124 in cancerous tissues and adjacent tissues， the correlation between the expression levels of miR-106a and miR-124 and clinicopathological characteristics， and the relationship between their expression and clinical prognosis were analyzed. Result： The expression level of miR-106a in cancer tissues was higher than that in adjacent normal tissues， and the expression level of miR-124 was significantly lower than that in adjacent normal tissues （P<0.05）; miR-106a was highly expressed in patients with TNM stage Ⅲ， lymphatic metastasis， tumor diameter >1 cm and membranous invasion， while miR-124 was low expressed in patients with TNM stage Ⅲ， lymphatic metastasis， tumor diameter >1 cm and membranous invasion （P<0.05）. The 5-year survival rate of patients with high expression of miR-106a was significantly lower than that of patients with low expression of miR-124， and the 5-year survival rate of patients with high expression of miR-124 was significantly higher than that of patients with high expression of miR-124 （P<0.05）. Conclusion： The expression levels of miR-106a and miR-124 are related to clinical stage and lymphatic metastasis in patients with differentiated thyroid cancer， and the level of miR-106A and miR-124 is closely related to 5-year survival rate of patients.

[Key words] miR-106a miR-124 Thyroid cancer

First-author’s address： Central Hospital of Zengcheng District， Guangzhou City， Guangzhou 511300， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2022.11.028

分化型甲狀腺癌是主要的甲狀腺癌類類型，患者在確診時多伴淋巴結轉移，是影響患者術后復發和預后的重要原因，因此，了解分化型甲狀腺癌淋巴結組織病理特征，對于早期診斷具有重要意義[1-2]。以往研究表明，微RNA（micro RNA，miR）是一類小分子RNA，能夠調控腫瘤的發生與發展，在多種惡性腫瘤的發生、發展過程中起到原癌基因或抑癌基因的作用。微小RNA-106a（miR-106a）和微小RNA-124（miR-124）可通過調節腫瘤細胞促凋亡基因或凋亡抑制基因的活性，參與腫瘤細胞的生物學過程，在乳腺癌、肝癌等多種惡性腫瘤中表達異常，但在分化型甲狀腺癌患者預后中的相關機制尚不清楚[3-4]。基于此，本次研究通過檢測miR-106a和miR-124表達與分化型甲狀腺癌臨床分期、淋巴結轉移、腫瘤大小、被膜浸潤等臨床病理特征，分析其在分化型甲狀腺癌發生與發展的作用，及預后的關系，旨在為臨床分化型甲狀腺癌早期診斷提供指導依據，以期改善患者預后。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取廣州市增城區中心醫院2016年1-6月收治62例分化型甲狀腺癌患者，其中乳頭狀甲狀腺癌35例、濾泡狀甲狀腺癌25例、乳頭狀甲狀腺癌合并濾泡狀癌2例，取患者癌組織標本62份和癌旁組織標本62份。其中男38例，女24例;年齡25～72歲，平均（39.47±5.26）歲。（1）納入標準：①符合WHO甲狀腺腫瘤分類及診斷標準[5];②術前未進行相關治療;③患者臨床資料完整。（2）排除標準：①合并炎癥肝腎功能障礙者;②合并內分泌系統、血液系統或代謝性相關疾病者;③合并其他惡性腫瘤者;④拒絕或不配合研究患者。患者或家屬知情且簽署知情同意書。本研究獲得醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 miR-106a檢測 取甲狀腺癌組織、癌旁組織常規切片組織15 μm兩張，置于離心管中，以二甲苯脫蠟、無水乙醇洗滌、干燥、蛋白酶K進行消化，按照EASYspin1131試劑盒說明書進行操作提取RNA。mircoRNA提取后使用50 μL DEPC水進行稀釋，于-80 ℃凍存待用。以0.15 μL 100 mm dNTPs，1 μL LMultiscribeTM逆轉錄酶，1.5 μL×10逆轉錄Buffer，0.19 μL RNase抑制劑，3 μL反轉錄引物5 μL RNA模板，4.16 μL無RNA酶水逆轉錄體系將RNA逆轉錄為cDNA。反應條件為16 ℃，30 min;42 ℃，30 min;85 ℃，5 min，反應產物cDNA置于-20 ℃凍存待用。然后采用qRT-PCR檢測miR-106a，使用miR-106a的探針采用Taqman MicroRNA assays，檢測儀器為ABI實時定量PCR儀7500，以6B作為內參。PCR條件為：50 ℃，2 min;95 ℃，10 min;95 ℃，15 min;60 ℃，1 min;35個循環。做3個復孔，取平均值作為Ct值。miR-106a的表達采用2-ΔΔCt表示，Ct=CtmiR-106a-CtU6B。

1.2.2 miR-124檢測 取甲狀腺癌組織、癌旁組織及轉染后細胞，按體積比1︰5加入RIPA裂解液，按照miRNA分離提取試劑盒所提供的步驟提取miRNA，測定所提取RNA的濃度及純度，使用PCR儀將其反轉錄為cDNA，反應條件為：25 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。以cDNA為模板，采用RT-qPCR檢測miR-124，根據Bi-Rad公司RT-qPCR試劑盒操作說明書加入相關試劑及引物，以U6為內參，在ABI-7300實時熒光定量儀上進行PCR擴增。反應條件為：95 ℃ 3 min，變性95 ℃ 12 s，退火62 ℃ 40 s，共40個循環。實驗結果采用2-ΔΔCt法進行表達量相對定量分析。

1.3 觀察指標 （1）檢測癌組織及癌旁組織中miR-106a、miR-124表達情況;（2）以癌組織中平均表達量為分界值，將miR-106a、miR-124分為高表達和低表達，比較不同病理分期和淋巴轉移患者miR-106a、miR-124表達分布情況，探究其表達水平與臨床病理分期和淋巴結轉移的關系;（3）隨訪5年內分化型甲狀腺癌患者生存情況，比較不同miR-106a、miR-124表達患者生存率情況。

1.4 統計學處理 采用SPSS 19.0分析數據，計數資料采用字2檢驗，以率（%）來表示;計量資料采取t檢驗，以（x±s）表示;繪制Kaplan-Meier生存曲線評估預后。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同病理組織中miR-106a、miR-124表達水平比較 分化型甲狀腺癌組織中miR-106a表達量高于癌旁正常組織，miR-124表達量顯著低于癌旁正常組織，差異均有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 miR-106a、miR-124表達與臨床病理分期和淋巴結轉移的關系 癌組織中miR-106a<0.73為正常表達，0.73～1.15為低表達，>1.15為高表達;miR-124

>3.21為正常表達，1.95～3.21為高表達，<1.95為低表達。miR-106a在TNM分期Ⅲ期、淋巴轉移、腫瘤直徑>1 cm及被膜侵犯患者中呈較高表達，而miR-124在TNM分期Ⅲ期、淋巴轉移、腫瘤直徑>1 cm及被膜侵犯患者中呈較低表達（P<0.05），見表2。

2.3 miR-106a、miR-124高表達和低表達患者5年生存率的比較 miR-106a高表達患者5年生存率顯著低于低表達，miR-124高表達患者5年生存率顯著高于高表達（P<0.05），見表3。

3 討論

近年來，隨著基因檢測技術在各疾病領域應用的發展，miRNAs在惡性腫瘤診斷中的價值被逐漸關注。mircoRNA是一類內源性非編碼RNA，可通過與其目的mRNA結合，降解mRNA，還可抑制mRNA轉錄、翻譯，從而抑制靶基因的表達[6-7]。miRNAs與多種原癌基因的激活或抑癌基因的抑制有關，在細胞的增殖、分化、凋亡和腫瘤發生過程中起著重要的作用。另外，組織中miRNAs結構穩定、易獲取，其作為惡性腫瘤潛在生物標志物應用于臨床診斷和治療的想法應運而生[8-9]。本次研究發現miR-106a和miR-124在分化型甲狀腺癌不同病理組織中呈差異性表達，且其水平表達與臨床分期、淋巴轉移密切相關，是影響預后生存的重要影響因素。

在甲狀腺癌相關機制研究中miRNA所發揮的作用的研究發現，甲狀腺癌的發生與多個基因的異常突變或重排有關，可通過激活不同的信號通路從而促進癌癥的發生發展及侵襲轉移[10-11]。miR-106a具有典型的原癌基因活性，可抑制很多下游靶基因的轉錄和翻譯，進而促進腫瘤細胞增殖、侵襲、遷移等惡性生物學行為，可通過抑制轉換生長因子受β-1和抗轉移因子TGF-BR2的表達，從而促進癌細胞的轉移和浸潤，上調的miR-106a可促進甲狀腺癌細胞的增殖[12]。本研究結果顯示，miR-106a與淋巴結的轉移相關，發生淋巴結轉移患者miR-106a的表達較高，其臨床分期越高，miR-106a的表達也越高，這提示miR-106a與分化型甲狀腺癌發病和轉移有關，因此，認為miR-106a可能影響腫瘤的預后[13-14]。因此，miR-106a水平表達與分化型甲狀腺癌患者發生、發展密切相關。隨訪5年結果顯示，miR-106a高表達組患者5年生存率顯著低于低表達者，說明其水平表達對于分化型甲狀腺癌患者預后具有重要參考意義。

miR-124是最新發現的抑癌基因，在哺乳動物的神經系統發育過程中，其堿基序列具有重要的生物學功能。進一步深入研究發現，其在多種腫瘤組織中（肝癌、乳腺癌、宮頸癌）存在不同程度的表達降低，但當抑癌基因功能，可見miR-124作為一種腫瘤抑制性miRNA，在腫瘤發生、發展及侵襲轉移中發揮重要作用[15-16]。研究通過檢測miR-124在甲狀腺癌組織及癌旁組織的表達情況，結果發現，甲狀腺癌組織中miR-124表達水平明顯低于癌旁組織，且隨著臨床分期、腫瘤直徑增加及淋巴結轉移患者miR-124表達下調，miR-124在甲狀腺癌不同病理中呈差異性表達，且隨訪5年發現，miR-124高表達組患者5年生存率顯著高于低表達者，這提示下調的miR-124可能參與甲狀腺瘤變、侵襲轉移的過程，與分化型甲狀腺癌的發生、發展密切相關[17-18]。以往文獻[19-20]研究也證實，miR-124作為抑癌基因可參與抑制乳頭狀甲狀腺癌的惡性生物學活性，上調的miR-124可以抑制K1細胞的增殖、侵襲轉移，并可通過與靶基因作用，抑制靶基因mRNA的翻譯表達，降低蛋白產物，參與惡性腫瘤病變過程。由此可知，miRNA基因改變導致MAPK、Wnt/J3.Catenin等信號通路被異常激活，從而導致抑癌基因的表達下調，進而促腫瘤形成、侵襲、轉移及復發。這與相關研究中分化型甲狀腺癌分化與Wnt/p-Catenin信號通路的激活有關的報道一致[21-22]。但由于本次研究樣本量較小，且僅統計了5年內分化型甲狀腺癌患者生存情況，對于其遠期生存的影響方面的作用存在一定缺陷，需擴大樣本進行更深入、更長遠的研究，但miRNAs在檢驗醫學方面具有巨大的潛力值得肯定。

綜上所述，組織中miR-106a、miR-124表達水平與分化型甲狀腺癌發生發展密切相關，miR-106a、miR-124表達水平與患者5年內生存率密切相關，可通過檢測其水平指導臨床治療，對臨床分化型甲狀腺癌患者預后改善具有重要意義。

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（收稿日期：2021-10-27） （本文編輯：張爽）