果樹木屑對食用菌菌絲生長和原基分化的影響

任軍凱，周曉勇，曾智勇，姚祥坦，陳銀根

（1.新昌縣種植業技術推廣中心，浙江，312599；2.新昌縣農村經營管理站；3.嘉興市農業科學研究院）

傳統食用菌栽培以闊葉木屑為主要栽培基質，但菇木林資源不足，菌林矛盾突出，因此，新型培養料的探索是確保食用菌產業可持續發展的重要措施[1]。果樹木體積大且經濟價值低，傳統處理方式是用作廉價燃料或長期堆疊放置，而果樹木中含有大量的木質素、纖維素等營養成分，可用于栽培食用菌[2]。本研究利用桃樹、梨樹、葡萄和無花果木屑栽培玉木耳和灰樹花2種珍稀食用菌，探究4種果樹木屑對菌絲生長和原基形成的影響，初步篩選適合作為玉木耳和灰樹花的果樹木屑培養料，為進一步利用果樹木屑奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

①供試材料 果樹木屑包括桃樹、梨樹、葡萄、無花果，在新昌當地收集。木屑從安徽購入，為食用菌栽培常用的闊葉木屑。將當年采集的4個樹種木條曬干，經網孔為8 mm的粉碎機粉碎成木屑備用。

②供試菌種 玉木耳[3]，由麗水市農業科學院提供；灰樹花品種慶灰151，購于麗水慶元。

③母種和原種配方 將菌絲從菌種中分離，保存至試管中作為母種，母種培養基配方為馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂18 g，配制成1 L。將母種轉接為原種，原種培養基配方為木屑78%、麩皮21%、石膏1%，含水量60%。

④試驗設計 試驗于2019年10月至2020年4月在嘉興市農業科學研究院實驗室進行。

a.木屑浸出液試驗。木屑浸出液的制備：稱取20.0 g各類木屑，加入1 L水，煮沸20 min，用紗布過濾掉木屑，收集濾液并加熱濃縮至100 mL備用。

木屑浸出液培養基的制備：設置4個木屑浸出液梯度處理，125 mL PDA培養基中分別含有0（對照）、5、20、35 mL木屑浸出液。取12 mL培養基放入90 mm培養皿中備用。

菌齡一致的菌絲塊：從母種中取菌絲塊，接種至裝有PDA培養基的培養皿中央，培養至菌絲剛長滿培養皿，用打孔器在菌落最外圍取直徑8 mm的菌絲塊。

接種及菌絲培養：取菌齡一致的菌絲塊接種至裝有木屑浸出液培養基的培養皿中央。使用恒溫培養箱在25℃下培養菌絲，每個處理重復5次，1個培養皿作為1次重復，每個培養皿1塊菌絲塊。

b.培養料配方試驗。木屑培養料配方及菌包的制備：試驗設置5個處理，使用葡萄木屑、無花果木屑、梨樹木屑、桃樹木屑和闊葉木屑（對照）配制培養料，培養料配方為木屑78%、麩皮21%、石膏1%，含水量60%。使用15 cm×30 cm的菌袋裝培養料，每袋培養料質量600 g。

1.2 接種及菌絲培養

玉木耳于2019年10月9日接種，灰樹花于2019年12月4日接種，取玉木耳和灰樹花母種接至PDA培養基中活化菌絲，用打孔器取菌齡一致的菌絲塊5塊接種至菌棒中，放于25℃培養箱內培養，每個處理重復5次，1個菌棒作為1次重復。試驗方法如下。

①培養基菌絲生長速度測量 用打孔器取菌齡一致的菌絲塊接種至裝有木屑浸出液培養基的培養皿中央，接種后根據菌絲生長速度在相同時間點分2次測量菌絲直徑，2次間隔天數根據菌絲生長速度調節，間隔3～5 d，菌絲生長速度計算公式：菌絲生長速度（cm/d）=（第2次測量直徑－第1次測量直徑）/（生長天數×2）。

②培養料菌絲生長指標測定 菌棒接種后10 d開始測定菌絲生長速度，用油性筆在菌袋上標明菌絲邊緣，間隔10 d再用油性筆標明菌絲邊緣，用直尺測量10 d的菌絲生長量，菌絲生長速度計算公式：菌絲生長速度（cm/d）=（第2次劃線長度-與第1次劃線長度）/生長天數。

③菌絲長勢的測定 將不同處理的培養皿和菌棒放置在一起，菌絲長勢測定參考宋盼盼等[4]的方法。

④原基數量和現蕾率測定待菌絲長滿后將菌包移出恒溫培養箱，放置在常溫下，使其自然產生子實體原基，統計各處理原基數量，玉木耳于2019年11月29日開始統計原基數量和現蕾率，灰樹花菌絲長滿后溫度不適宜出菇，因此于2020年4月20日統計原基數量和現蕾率，現蕾率計算公式：現蕾率（%）=現蕾菌棒數/菌棒總數×100。

⑤化學指標測定 將供試木屑及麩皮烘干后經粉碎機粉碎，過100目篩，混合均勻，各培養料碳氮比按照配方比例計算獲得。

總碳含量用重鉻酸鉀氧化法測定[5]；總氮含量采用全自動凱氏定氮儀測定。

1.3 數據處理

試驗數據采用SPSS 20.0統計學軟件進行處理，各組間數據采用Duncan's新復極差法進行多重比較（P＜0.05）。采用Personal相關系數進行相關性分析。

2 結果與分析

2.1 果樹木屑浸出液對菌絲生長速度的影響

如表1所示，隨著葡萄和無花果木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌絲生長速度逐漸提高，至含量到達35 mL時，玉木耳菌絲生長速度分別較對照（0 mL）提高35.3%和17.3%；玉木耳菌絲在桃樹木屑浸出液培養基中生長速度先加快后減弱，20 mL處理較35 mL處理菌絲生長速度減慢12.5%；不同含量的梨樹木屑和闊葉木屑浸出液對玉木耳菌絲生長速度沒有顯著影響。

表1 果樹木屑浸出液對菌絲生長速度的影響

不同含量的桃樹木屑浸出液會顯著降低灰樹花菌絲生長速度；高含量（20 mL和35 mL）的葡萄、梨樹木屑浸出液同樣顯著降低灰樹花菌絲生長速度；不同含量的無花果木屑浸出液和闊葉木屑浸出液處理下灰樹花菌絲生長速度與對照差異不顯著。

2.2 果樹木屑浸出液對菌絲長勢的影響

各類木屑浸出液對菌絲長勢有一定影響，由表2可見，隨著木屑浸出液含量的增加，玉木耳菌絲長勢在桃樹、梨樹和闊葉木屑浸出液的培養基中變強，在無花果木屑浸出液的培養基中變弱，在葡萄木屑浸出液中長勢無明顯變化。

表2 果樹木屑浸出液對菌絲長勢的影響

隨著木屑浸出液含量的增加，灰樹花菌絲在葡萄、無花果和闊葉木屑浸出液的培養基中長勢變強，在梨樹、桃樹木屑浸出液中無明顯變化。

2.3 果樹木屑培養料對菌絲生長和長勢的影響

如表3所示，將各類木屑配制成培養料，以闊葉木屑配方的碳氮比最高，達到40.88，梨樹木屑配方碳氮比最低，僅25.35。玉木耳在闊葉木屑培養料中生長速度最快，在無花果木屑培養料中不生長；灰樹花在闊葉木屑培養料中生長速度最快，在無花果木屑培養料中生長速度最慢。不同培養料對灰樹花菌絲長勢的影響較小，而葡萄木屑和桃樹木屑的會減弱玉木耳菌絲長勢。

表3 果樹木屑培養料對菌絲生長速度和長勢的影響

2.4 果樹木屑培養料對現蕾率原基發生的影響

由表4可知，梨樹木屑培養料和闊葉木屑培養料下的玉木耳現蕾率為100%，但梨樹木屑培養料下的原基數量較少；葡萄木屑培養料下的玉木耳現蕾率較低，為20%，原基數量較少；而無花果木屑培養料和桃樹木屑培養料下的玉木耳現蕾率為0。使用葡萄、桃樹和梨樹木屑培養料下的灰樹花現蕾率較高，分別是80%、80%和100%，較闊葉木屑培養料的現蕾率高，但梨樹木屑培養料中灰樹花原基顏色呈白色，桃樹木屑因為是從外地購入，成本相對較高，葡萄木屑相對更適宜作為灰樹花的培養料。

表4 果樹木屑培養料對現蕾率和原基發生的影響

3 討論與結論

研究表明，菌絲生長速度與菌絲呼吸消耗呈正相關[6]，而培養料的碳氮比也影響菌絲生長速度[7]，灰樹花菌絲生長最佳培養基碳氮比為30∶1[8]，而玉木耳菌絲生長的最佳碳氮比尚未有研究。葡萄木屑浸出液對灰樹花菌絲生長有抑制作用，但葡萄木屑制作成培養料后的碳氮比較合適灰樹花，這可能是灰樹花菌絲在葡萄木屑培養料中的生長速度稍快于其他木屑培養料的原因。

本試驗在菌絲培養過程中發現，使用闊葉木屑栽培的玉木耳菌絲最早出現原基分化，然后是梨樹木屑。葡萄和桃樹木屑培養的玉木耳菌絲僅在接種口附近出現原基，其原基出現位置還需進一步研究；灰樹花原基均出現在接種口，葡萄、桃樹和梨樹培養料的原基出現時間均早于闊葉木屑培養料，梨樹木屑培養料中灰樹花子實體原基為白色，無花果木屑培養料內菌絲顏色變黃，并且無原基出現，目前尚未有對子實體原基顏色進行研究的文獻，果樹木屑對灰樹花子實體原基顏色的影響還需進一步驗證。

玉木耳菌絲在無花果木屑浸出液中生長良好，但在無花果木屑培養料中無法生長，可能是由于無花果樹汁液中含有許多藥用成分，例如黃酮類物質[9]，它在植物抗菌防病等方面起著重要的作用[10]，而黃酮類物質難溶于水，導致菌絲在木屑浸出液培養基中生長良好，而將花果樹木屑制作為培養料后菌絲生長受到抑制。

本研究結果表明，葡萄、無花果木屑浸出液能加快玉木耳菌絲生長速度，梨樹和桃樹木屑浸出液能增強玉木耳菌絲長勢。葡萄、梨樹、桃樹木屑浸出液則會減慢灰樹花的菌絲生長速度，葡萄和無花果木屑浸出液對菌絲長勢有促進作用。果樹木屑作為培養料會減慢2種食用菌的菌絲生長速度，玉木耳菌絲在梨樹木屑培養料中生長速度較快，灰樹花菌絲在葡萄木屑培養料中生長速度較快。2種食用菌在梨樹木屑培養料中的現蕾率較高。

綜合多項因素，下一步研究可嘗試使用梨樹木屑栽培玉木耳，使用葡萄木屑栽培灰樹花。