白花蛇舌草脂質體凝膠的制備工藝研究

李雪梅，楊 丹，周 雪

（牡丹江醫學院 黑龍江 牡丹江 157011）

0 引言

雖然近10 年來已經發現了大量具有多種治療潛力的新藥分子，但其中大多數仍處于研發過程中。白花蛇舌草（hedyotis diffusa）為一年生披散草本，別名：蛇舌草、蛇舌癀、蛇針草、蛇總管，根細長，從基部發出多分枝，白花，花期春季。其成藥味苦、淡，性寒，主要功效是清熱解毒、消痛散結、利尿除濕。現代藥理表明該藥具有抗菌、消炎、抗腫瘤、增強免疫功能，臨床上廣泛用于各類腫瘤，如肺癌、直腸癌、肝癌、胃癌等[1]。脂質體（liposomes，Lip）作為藥用中間載體成為了一大熱點，其類脂雙分子層結構具有良好的生物相容性以及藥物包載能力[2-4]，但是脂質體溶液的流動性，不宜長時間滯留在皮膚表面。而將脂質體均勻混合在凝膠基質中制備的脂質體凝膠劑，能解決流動性問題[5]，同時也具備提高藥物滯留時間、穩定性、緩釋性以及減少藥物本身的刺激性等優點[6]。本研究制備白花蛇舌草脂質體凝膠，為未來開發新的藥物提供參考。

1 實驗材料

白花蛇舌草藥材，單硬脂酸甘油酯（GMS，德國 BASF公司）；辛癸酸甘油酯（MCT，法國 Gattefosse 公司）；吐溫 80（Tween-80，國藥集團化學試劑有限公司）；聚氧乙烯（35）蓖麻油（EL-35，德國 BASF 公司）；安捷倫LC1260 高效液相色譜儀。

2 實驗方法

2.1 提取工藝

取白花蛇舌草藥材，晾干。將干燥藥材放入粉碎機粉碎，粉末過篩備用。精密稱取白花蛇舌草粉末1.0 g，放置于具塞錐形瓶，加入石油醚50 mL，超聲提取60 min，棄去石油醚，濾渣揮干。加入提取溶劑，超聲提取，濾過，合并濾液，置80 ℃水浴上濃縮，放冷，裝柱，純化水淋洗至洗脫液無色，棄去洗脫液。自黃色色帶流出，開始收集洗脫液溶劑定容，搖勻，即得。

2.2 脂質體的制備

采用熱熔-超聲乳化法制備，取處方量的單硬脂酸甘油酯、辛癸酸甘油酯、吐溫80 置于水浴上加熱75 ℃至脂質熔融，將提取物加入熔融脂質液中，攪拌溶解形成有機相，取處方量的聚氧乙烯蓖麻油加入蒸餾水中形成水相。攪拌下，將水相滴加入油相中形成初乳。5 min 后，將溶液混合物超聲15 min，然后在冰浴中快速冷卻。樣品以15 000 rpm 離心5 min，然后用0.22 μm 微孔濾膜過濾，以去除未封裝的藥物。

2.3 含量測定

色譜條件：色譜柱Aglient HC-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫：35℃；檢測波長：354 nm[7-8]；流動相：乙腈-磷酸二氫鉀水溶液（0.01 mol·L-1，NaOH 溶液調至pH=5.0）（40 ∶60，V/V）；流速：1.0 mL·min-1；進樣量20 μL。

方法學考察：按規定方法操作，得線性方程y=1.365 8x-1 263（r=0.999 9），在該色譜條件下本品在0.01～0.20 mg·mL-1濃度范圍內線性關系良好；穩定性：0.2 h、4 h 內穩定性良好，RSD=0.56%；精密度實驗RSD=0.18%（n=6）；重復性實驗RSD=0.23%（n=6）；加樣回收率實驗，高中低濃度平均回收率分別為99.75%、100.48%、99.46%，方法學考察均符合要求。

2.4 載藥量與包封率的測定方法

精密吸取樣品混懸液2.0 mL 置于超速離心管中，高速離心40 min，取濾液，進HPLC 測定游離達沙替尼的量（C）。另取脂質體混懸液2.0 mL，轉移至50 mL 的容量瓶中，再加入30 mL 乙腈超聲8 min，用流動相定容至刻度，高效液相色譜法測定藥物總含量。按下式計算白花蛇舌草脂質體的載藥量與包封率。

載藥量（%）=[(C0-C)/ C 總]×100%

包封率（%）=[(C0-C)/C0]×100%

式中C 表示溶液中游離白花蛇舌草的量，C0表示溶液中總白花蛇舌草的量，C 總表示脂質載體和白花蛇舌草的量。

2.5 正交試驗

脂質體的制備過程中，在單因素考察的基礎之上，以包封率為評價指標，以包封率影響較大的因素，固液脂質比（A，單硬脂酸甘油酯/辛癸酸甘油酯）、乳化劑用量（B）、藥脂比（C）、超聲時間（D）為考察因素，進行4 因素3水平L9(34)正交試驗，篩選最佳處方，因素水平表見表1。

表1 因素水平表

2.6 脂質體凝膠的制備

稱取卡波姆0.5 g 置于燒杯中，加入15.0 g 純化水使其在攪拌器攪拌溶脹，待溶脹充分，形成透明、細膩、無顆粒感的凝膠后加入適量5% NaOH 溶液調節pH 值，使pH值在6.5 ～7.5，即得空白凝膠基質。取新制備的脂質體溶液、白花蛇舌草混懸液各30 mL 加入至空白凝膠中，抽真空緩慢攪拌形成混懸凝膠，考察其釋放度。

2.7 初步穩定性考察

通過高溫、高濕、強光照射、穩定性、離心穩定性實驗等對制備的脂質體凝膠外觀進行考察，考察其外觀性狀，黏度、pH 等。

3 實驗結果

3.1 正交試驗結果

方差分析結果表明，由極差R 結果可知，各因素影響順序為A ＞B ＞D ＞C。最佳組合為A2B3C3D2，即單硬脂酸甘油酯與辛癸酸甘油酯比為8 ∶2，乳化劑用量為6%，藥脂比為1 ∶30，超聲時間為4 min，結果見表2。

表2 正交試驗結果

表2（續）

3.2 釋放度考察

白花蛇舌草脂質體的釋放速度相對較快，12 h 內釋放速率較高，且在12 h 時，其釋放率已經超過了90%；在16 h 之后，釋放趨于穩定。而對于脂質體凝膠，藥物釋放在前2 h 釋放較快，2 h 后釋放速率開始變緩慢，表現出緩釋的效果，24 h 內釋放70.26%，結果見圖1。

3.3 初步穩定性考察

白花蛇舌草脂質體凝膠在密封后置于25 ℃，相對濕度為75%（飽和氯化鈉）的高濕條件下，分別在5 d 和10 d 取樣，與0 d 比較，其外觀無明顯變化，pH 值變化小，指標變化幅度不大，可見該凝膠在高濕條件下保持穩定，結果見表3。

表3 高濕實驗結果

白花蛇舌草脂質體凝膠在密封后置于（40±2）℃恒溫的高溫條件下，在10 d 后取樣，與0 d 比較，其外觀無明顯變化，pH 值變化小，指標變化幅度不大，可見該凝膠在高溫條件下保持穩定，結果見表4。

表4 高溫實驗結果

白花蛇舌草脂質體凝膠在密封后置于4500LX±500LX 的光照下，連續照射10 d高溫條件下，分別在5 d和10 d取樣，與0 d 比較，其外觀無明顯變化，pH 值變化小，指標變化幅度不大，可見該凝膠在強光條件下保持穩定，結果見表5。

表5 強光照射實驗結果

白花蛇舌草脂質體凝膠在轉速為3 000 rpm 和12 000 rpm離心30 min后，其外觀無明顯變化，均勻性良好，指標變化幅度不大，可見該凝膠在離心條件后基本保持穩定，結果見表6。

表6 離心實驗結果

4 討論與結論

作為傳統中藥材，白花蛇舌草具有很高的藥用價值。近年來，脂質載體藥物的潛力逐漸實現，成為一種很有前景的藥物傳遞系統[9-10]。本實驗采用熱熔-超聲乳化法制備白花蛇舌草脂質體，方法簡單可行，穩定性好。將其制成脂質體，可利用脂質體良好的吸收特性，促進藥物的吸收[11-14]。由于脂質體通常為液體劑型，在皮膚上的保留時間較短，為了使藥物長時間與皮膚接觸，便可采用凝膠基質對其進行賦形[15-17]。

本研究通過考察白花蛇舌草脂質體凝膠的制備工藝，運用正交分析法尋找最佳反應條件，通過釋放度、高溫、高濕、強光照射及離心實驗考察凝膠的穩定性，在研究中的工藝條件制備凝膠外觀、穩定性等均良好，為中藥白花蛇舌草的脂質體凝膠的制備工藝研發奠定了一定基礎。