柳茶提取物對大鼠血壓影響的研究

趙小芳，徐明麗 ，馮翠娟 ，段博文 ，李 運

（1.甘肅衛生職業學院，甘肅 蘭州 730000；2.甘肅省人民醫院，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州市食品藥品檢驗檢測研究院，甘肅 蘭州 730000）

柳茶為薔薇科鮮卑花屬植物鮮卑花和窄葉鮮卑花的葉及嫩枝，甘肅省有豐富的野生資源，主要產于甘南藏族自治州，生長在海拔3 000～3 600 m的草地或灌木叢中[1]。藥理研究表明，柳茶具有調節脂代謝、提高機體免疫力、抗氧化、抗腫瘤、保護肝損傷[2-4]等作用。為進一步摸清柳茶的其他藥理作用，合理開發利用我省的藥材資源，課題組開展了柳茶在調節血糖、抗疲勞、抗缺氧、對血壓的影響等方面的實驗研究，本項目主要承擔柳茶提取物對血壓影響的實驗研究。

肥胖是血壓升高的危險因素，控制體重有助于降低血壓[5]。另外，大量流行病學研究顯示，高脂血癥是高血壓的可調性間接危險因素之一，調節血脂有利于控制血壓[6]。鑒于柳茶有降低血脂、減肥的功效，課題組根據以往研究推測：柳茶是否也能降壓？如果有降壓作用，那么是由于降血脂而導致的間接作用還是有直接降壓作用？降壓作用是否顯著？高密度脂蛋白（HDL）能刺激動脈內膜細胞前列環素的形成，降低內皮損傷導致的血管收縮反應。而柳茶提取物可明顯降低大鼠血中總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）含量，增加 HDL含量[7]，說明其可以增強HDL對動脈內膜的保護作用。以上研究為本課題的推測提供了理論依據。

1 實驗對象與方法

1.1 實驗材料

柳茶采自甘肅省甘南藏族自治州，經蘭州大學藥學院楊永建教授鑒定為薔薇科鮮卑花屬植物窄葉鮮卑花的葉。羅布麻購于蘭州惠仁堂藥店，由蘭州旭康藥業有限公司生產（批號20181023），經楊永建教授鑒定為夾竹桃科羅布麻屬植物羅布麻的葉。實驗動物為 Wistar大鼠，雄性，6 周齡，體重（200±10）g，由蘭州大學醫學實驗動物中心提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 制備供試品 柳茶浸膏的制法：稱取窄葉鮮卑花葉300 g，粉碎后用95%乙醇1 600 W超聲提取3次，每次20 min。用旋轉蒸發儀濃縮乙醇提取液，得102 g浸膏備用。按參考文獻給藥[8]。羅布麻浸膏的制法：稱取羅布麻300 g，粉碎后用60%乙醇回流2 h。用旋轉蒸發儀濃縮乙醇提取液，得80.7 g浸膏備用。按臨床等效劑量給藥。

1.2.2 實驗動物分組 雄性Wistar大鼠30只，購入后飼養觀察3天，隨機分為5組，每組6只，分別編號（見表1）。

表1 實驗動物分組及處理方法

1.2.3 高血壓大鼠模型的建立 用動物無創測壓儀連續測定血壓3天后，對B、C、D、E組大鼠每日皮下注射丙酸睪丸素2 mg/100 g[9]，同時給予5%鹽水，常規飼料喂養，14天后，測得大鼠血壓明顯升高（與造模前比較，收縮壓P<0.001，舒張壓P<0.01），此時進行實驗治療。

丙酸睪丸素溶液的配制方法：將花生油于165℃干熱空氣滅菌2 h，作為溶劑。將460 mg丙酸睪丸素加入34.5 mL滅菌花生油中，超聲振蕩40 min，完全溶解。每只大鼠的給藥量為2 mg/100 g ，即 0.15 mL/100 g。

1.2.4 實驗性治療方法 治療開始后，大鼠給藥量為2 g生藥/200 g·d，給藥方法為灌胃。連續14天，每7天測一次血壓。空白對照組和模型對照組給蒸餾水。

柳茶治療組給藥量：每只大鼠給藥量為2 g生藥/200 g·d，即0.68 g浸膏。將浸膏配成0.34 g/mL的水溶液，則每只大鼠的給藥量是 2 mL/200 g·d。

羅布麻治療組給藥量：每只大鼠給藥量為2 g生藥/200 g·d，即0.538 g浸膏。將浸膏配成0.269 g/mL的水溶液，則每只大鼠的給藥量是2 mL/200 g·d。

復方治療組給藥量：柳茶和羅布麻按1︰1的比例混合，每只大鼠給予柳茶1 g/200 g·d、羅布麻1 g/200 g·d，即將配好的柳茶水溶液和羅布麻水溶液各1 mL/200 g·d混合后給予。

1.3 檢測指標

1.3.1 血壓 用多通道動物無創測壓儀測大鼠的尾動脈壓，比較治療后大鼠血壓的變化。

1.3.2 血清中生化指標NO、NOS 治療結束后，將大鼠4.5 mL/kg腹腔注射10%水合氯醛，待進入麻醉狀態后，心臟采血，離心 10 min（3 000轉/min），分出血清，于-20 ℃保存。

用試劑盒法測定血清中NO含量和NOS活力，操作步驟按試劑盒說明書進行。

1.4 統計學處理

大鼠的血壓、NO含量和NOS活力采用SPSS 16.0軟件進行統計分析，計量資料采用（±s）表示，組間比較采用t檢驗。

2 結果

2.1 治療結束后各組大鼠的血壓

各組大鼠血壓變化顯示：造模成功后至治療結束，模型對照組大鼠的血壓維持在較高水平；柳茶治療組大鼠的血壓明顯下降（P<0.001），說明柳茶對實驗性高血壓大鼠具有降壓作用，且與羅布麻療效相當。

復方治療組大鼠血壓下降顯著（P<0.001），但與單方比較，療效并無差異，初步提示治療高血壓時，柳茶與羅布麻還是單用為好（見表2）。

表2 柳茶對實驗性高血壓大鼠血壓的影響（±s，mmHg）

表2 柳茶對實驗性高血壓大鼠血壓的影響（±s，mmHg）

注：與空白對照組比較，***P<0.001，**P<0.01；與模型對照組比較，▲▲▲P<0.001

組別治療結束后的血壓SBP DBP空白對照組（2 mL/200 g·d）模型對照組（2 mL/200 g·d）柳茶治療組（2 mL/200 g·d）羅布麻治療組（2 mL/200 g·d）復方治療組（2 mL/200 g·d）110.67±8.17 133.32±5.912***113.57±5.66▲▲▲116.27±8.83▲▲▲111.95±9.06▲▲▲85.0172±10.70 99.43±4.29**89.33±3.12▲▲▲89.20±1.99▲▲▲88.37±2.94▲▲▲

2.2 NO試劑盒測試結果

紫外分光光度計用蒸餾水調零，于550 nm處，0.5 cm光徑，測各管吸光度，計算各樣品中NO含量，見表3。

表3 柳茶對高血壓大鼠血清中NO含量的影響（±s，μ mol/L）

表3 柳茶對高血壓大鼠血清中NO含量的影響（±s，μ mol/L）

注：大鼠血清中的 NO含量參考值為（38.0±23.4）μmol/L。與空白對照組比較，**P<0.01；與模型對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01，▲▲▲P<0.001；與復方治療組比較，★★P<0.01，★P<0.05

組別NO含量空白對照組（2 mL/200 g·d）模型對照組（2 mL/200 g·d）柳茶治療組（2 mL/200 g·d）羅布麻治療組（2 mL/200 g·d）復方治療組（2 mL/200 g·d）48.15±12.15 33.70±11.94**45.74±11.01▲★★56.11±9.05▲▲★65.18±19.19▲▲▲

2.3 NOS試劑盒測試結果

紫外分光光度計用蒸餾水調零，于530 nm處，1 cm光徑，測各管吸光度，每毫升血清每分鐘生成1 nmol NO為一個酶活力單位。

計算TNOS（總一氧化氮合酶）空白管吸光度為0.083，iNOS（誘導型一氧化氮合酶）空白管吸光度為0.046。各組大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力見表4。

表4 各組大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力（±s，U/mL）

表4 各組大鼠血清中TNOS活力和iNOS活力（±s，U/mL）

注：與模型對照組比較，▲P<0.05

組別TNOS iNOS空白對照組（2 mL/d）模型對照組（2 mL/d）柳茶治療組（2 mL/d）羅布麻治療組（2 mL/d）復方治療組（2 mL/d）22.205±1.454 28.640±4.476 29.652±2.294 30.713±4.303 29.328±1.689 8.843±1.737▲12.822±3.664▲16.798±2.449▲15.427±3.894▲17.064±2.639▲

3 討論

3.1 柳茶提取物對高血壓大鼠有降壓作用

通過實驗觀察，發現柳茶提取物對實驗性高血壓大鼠的血壓有顯著降低作用（P<0.001），療效與羅布麻相當。

與羅布麻合用后，與單方相比，降壓效果并無增強，提示治療高血壓時，柳茶與羅布麻還是單用為好。

3.2 柳茶提取物能改善高血壓大鼠的生化指標

柳茶提取物能升高高血壓大鼠血清中擴血管物質NO的含量，并提高iNOS活力（P<0.05），使其催化NO合成的能力增強，說明對動脈內皮有保護作用。

3.3 展望

本實驗研究證明柳茶提取物對高血壓大鼠有降壓作用，并對考察的生化指標（NO、NOS）有所改善。在今后的研究中，將觀察柳茶治療高血壓的長期療效以及內皮素（ET）、硫化氫（H2S）等與高血壓有關的其他生化指標的變化，論證將其進一步開發為有降壓功效的保健茶飲，作為高血壓治療的輔助產品的可行性。