炎可寧片中黃柏浸膏的質量標準研究＊

遲江 杜成興,2 潘年瓊 李松,2 楊迺嘉

（1.貴州省生物技術研究開發基地有限公司，貴州貴陽 550002；2.貴州省科暉制藥有限公司，貴州清鎮 551400）

炎可寧片[1]是由中藥黃柏、大黃、黃芩、板藍根和黃連5味中藥組方，經加工制成的片劑，具有清熱瀉火、消炎止痢的作用。臨床用于急性扁桃腺炎、細菌性肺炎、急性結膜炎、中耳炎、癤癰瘰疬、急性乳腺炎、腸炎、細菌性痢疾及急性尿道感染。炎可寧片在部頒標準中沒有薄層鑒別和含量測定項，其制劑的質量無法有效地控制。我們前期進行了炎可寧片的質量標準[2-3]研究，制劑質量得到了控制。但在實際生產過程中發現黃柏浸膏的質量[4-7]直接影響了片劑的崩解時限。為了更好地控制炎可寧片的內在質量，我們對黃柏浸膏進行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜法對黃柏浸膏的鹽酸小檗堿進行了含量測定，所建立的方法操作簡便、分離效果好、專屬性強、重復性也好，可有效地控制炎可寧片中黃柏浸膏的質量。

1.儀器和材料

1.1 儀器

AUW120D型電子天平（島津儀器蘇州有限公司），AL204型電子天平（梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司），Ultimate 3000高效液相色譜儀（美國賽默飛公司）；島津手動高效液相色譜儀（日本島津公司，包含SHIMADZU Essentia LC-16型輸液泵、SHIMADZU SPD-16型紫外檢測器、SHIMADZU Essentia CTO-16等），依利特C18柱（250mm×4.6mm，5μm）。其他儀器均由貴州省生物技術研究開發基地有限公司提供。

1.2 材料

鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201212）購于中國食品藥品檢定研究院；鹽酸黃柏堿（批號：Y-O87-121129）購于成都瑞芬思生物科技有限公司。黃柏浸膏樣品、藥材及試劑由貴州省生物技術研究開發基地有限公司提供。

2.方法和結果

2.1 色譜適應性條件

依利特C18柱（250mm×4.60mm，5μm）；流動相為乙腈：0.05ml/L磷酸二氫鉀：三乙胺（35:65:0.1）；流速為1.0 ml·min-1；柱溫30℃；檢測波長為265nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 樣品溶液制備方法

精密稱取黃柏浸膏0.1g，加入25ml甲醇，超聲10min，取出，稱重，補足減少的重量，過濾，取續濾液2ml。用甲醇定容至10ml，過0.45μm微孔濾膜，作為樣品溶液。

2.2.2 對照品制備方法

精密稱取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得。

2.3 線性關系考察

精密量取鹽酸小檗堿對照品溶液，配制成6.28μg/ml，12.56μg/ml，25.12μg/ml，50.24μg/ml，100.48μg/ml，200.96μgml，401.92μg/ml溶液。分別進樣10uL，以鹽酸小檗堿濃度為X軸，峰面積為Y軸，得線性回歸方程。結果表明，鹽酸小檗堿在6.28μg/ml～401.92μg/ml范圍內呈現良好線性關系，回歸方程為Y=46558X+29207（r=0.9999）。

2.4 精密度實驗

取鹽酸小檗堿對照品溶液（50.24μg/ml）適量，按2.1項下色譜條件，進樣6次，每次10μL，測定鹽酸小檗堿的峰面積。結果顯示RSD=0.18%，表明儀器精密度良好。

2.5 中間精密度實驗

取鹽酸小檗堿對照品溶液（50.24μg/ml）適量，按2.1項下色譜條件，進樣6次，每次10μL，測定鹽酸小檗堿的峰面積。結果顯示RSD=0.94%，表明中間精密度良好。

2.6 穩定性實驗

精密稱取黃柏浸膏0.1g，按2.2.1項下制備方法，得樣品溶液。按2.1項下色譜條件，間隔1h進樣，進樣6h共7次，每次10μL，計算樣品中鹽酸小檗堿的含量。結果顯示RSD=0.53%，表明樣品中鹽酸小檗堿在6h內穩定。

2.7 重復性實驗

精密稱取0.1g黃柏浸膏6份，按2.2.1項下制備方法，得樣品溶液，按2.1項下色譜條件進樣，每次10μL，計算樣品中鹽酸小檗堿的含量。結果顯示RSD=0.58%，表明實驗重復性良好。

2.8 加樣回收率實驗

精密稱取黃柏浸膏樣品0.05g共9份，分為3組，編號。每組按樣品取樣量的50%、100%、150%分別加入鹽酸小檗堿對照品，按2.2.1項下制備方法，得樣品溶液。按2.1項下色譜條件，進樣9次，每次10μL，計算樣品中鹽酸小檗堿的含量，見表1。結果顯示，樣品中鹽酸小檗堿的平均加樣回收率為99.65%，RSD=1.51%，表明實驗可行性良好，該方法可用于黃柏浸膏的含量測定。

表1 加樣回收率實驗結果

2.9 含量測定

取10個不同批次的黃柏浸膏，每批稱取2份，每份0.1g，按2.2.1項下制備方法，得樣品溶液，按2.1項下色譜條件，進樣10μL，計算樣品中鹽酸小檗堿的含量，結果見表2。結果顯示：黃柏浸膏鹽酸小檗堿的平均含量為43.32mg/g，最低含量為32.69mg/g。

表2 十批黃柏浸膏含測結果

2.10 薄層色譜鑒別

2.10.1 黃柏浸膏和藥材薄層色譜鑒別

分別稱取黃柏浸膏和黃柏藥材細粉0.25g，加入25ml甲醇，超聲30min，過濾，濾液揮干后，加1%醋酸水溶解后過濾，濾液揮干后，加少量甲醇，作為供試品溶液。另取鹽酸小檗堿對照品和鹽酸黃柏堿對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述4種溶液3uL～5uL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷：甲醇：水（30:15:4）的下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開、取出、晾干、噴以稀碘化鉍鉀試液顯色。供試品色譜中，黃柏藥材和黃柏浸膏在與鹽酸小檗堿色譜相應的位置上顯相同顏色的斑點如圖1所示。

圖1 薄層色譜圖1

2.10.2 10批黃柏浸膏薄層色譜鑒別

分別稱取10批黃柏浸膏樣品0.25g，按2.10.1項下方法進行薄層色譜鑒定，如圖2所示。結果表明：在供試品色譜中，10批黃柏浸膏樣品在與鹽酸小檗堿色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。

圖2 10批黃柏浸膏薄層色譜圖

3.結語

在測定10批黃柏浸膏樣品的含量時發現，黃柏浸膏中鹽酸小檗堿的平均含量為43.32mg/g，最低含量為32.69mg/g，考慮到實際生產過程中含量會有所不同，因此我們暫將黃柏浸膏中的鹽酸小檗堿的限量定為：每克黃柏浸膏含鹽酸小檗堿不得少于30mg。經過方法學考察，黃柏浸膏中鹽酸小檗堿在6.28μg/ml～401.92μg/ml范圍內呈現良好線性關系，回歸方程為Y=46558X+29207（r=0.9999），平均回收率為99.65%（RSD=1.51%），說明本方法專屬性強，重現性好，可有效控制黃柏浸膏的質量，為炎可寧片的生產工藝控制提供了質量內控標準，也為炎可寧片的成品質量控制提供了保障。