羌白消痛膠囊有效成分的提取及鑒別

薛濤 田海 王吉東 岳勇銘 趙越超 黃浩宇 黃樂冉

摘 要：探索羌白消痛膠囊脂溶性成分的最佳提取工藝，鑒別制劑中羌活、白芷、三七 3味藥材.采用正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以總皂香豆素的含量為考核指標(biāo)，優(yōu)選羌活等藥材脂溶性成分的提取工藝;采用薄層色譜法（TLC）對(duì)制劑中羌活、白芷、三七進(jìn)行鑒別.研究結(jié)果表明，最佳醇提工藝為：8倍量70%乙醇提取一次，時(shí)間為1 h.醇提工藝設(shè)計(jì)合理，重現(xiàn)性好，適合于工業(yè)化生產(chǎn);鑒別方法專屬性強(qiáng)，可用于羌白消痛膠囊的質(zhì)量控制.

關(guān)鍵詞：總香豆素; 回流提取;含量測定;薄層鑒別

[中圖分類號(hào)]R284.1/R282.5 ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A

中藥復(fù)方制劑因?yàn)樗煞謴?fù)雜，各成分之間可能存在相互影響，給復(fù)方制劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)帶來一定困難，鑒別其有效成分是中藥質(zhì)量檢測的依據(jù).實(shí)驗(yàn)室中常用的提取脂溶性成分的方法有滲漉法、浸漬法、索氏提取法、加熱回流提取法等，合理的選用提取方法對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)有很重要的意義.羌白消痛方為一經(jīng)驗(yàn)處方，經(jīng)多年臨床驗(yàn)證，藥效明確.處方由八味中藥組成，其中羌活性溫，味辛、苦，具有散寒、祛風(fēng)、除濕、止痛之功效，具有明顯的消痛、抗炎、改善血液循環(huán)及保護(hù)肝臟的作用[1];白芷性溫，氣芳香，味辛，微苦，具有散風(fēng)除濕、通竅止痛、消腫排膿的作用，臨床廣泛應(yīng)用于感冒頭痛、眉棱骨痛、鼻塞、鼻淵、牙痛、白帶、瘡瘍腫痛等病癥，有較好的療效[1-2];兩藥共用，同為君藥.羌活、白芷中均含有香豆素類成分，為羌活、白芷發(fā)揮消痛作用的主要活性成分.[1-2]本實(shí)驗(yàn)采用紫外-可見分光光計(jì)法，以異歐前胡素為指標(biāo)物質(zhì)，測定藥材脂溶性提取物種中香豆素的含量，建立其含量分析方法，確定最佳提取工藝;選用乙醇加熱回流提取法提取，方便省時(shí).

1 材料與試劑

羌活、白芷、蛇床子、三七、白術(shù)（安徽滬譙中藥飲片廠）;三氯甲烷、乙酸乙酯、冰醋酸、正己烷、甲醇等均為分析純（北京化工廠）;異歐前胡素（國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心，100620）.

2 紫外-可見分光光度計(jì)法測定總香豆素含量

標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 取干燥至恒重的異歐前胡素對(duì)照品2 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得.

供試品溶液的制備 取干燥至恒重的干燥粉末約0.05 g，精密稱定，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得.[3-4]

最大吸收波長的測定 配制歐前胡素標(biāo)準(zhǔn)品溶液.按《中國藥典》2015年版四部“紫外-可見分光光度法”操作，以甲醇為空白，在200～500 nm波長進(jìn)行掃描.[4]對(duì)照品溶液在301 nm波長處有最大吸收峰，《中國藥典》2015版規(guī)定的檢測波長為300 nm，綜合掃描結(jié)果，確定測定波長為300 nm.

線性關(guān)系考察 分別精密量取對(duì)照品歐前胡素溶液0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 mL，置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，以相應(yīng)試劑作為空白溶液，在波長300 nm處測其吸光度，以總香豆素的含量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y=52.808X-0.017 6，r=0.999 8，表明總香豆素含量在0.040 6～0.121 8 mg范圍呈良好線性關(guān)系.

方法學(xué)考察 依次進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和加樣回收實(shí)驗(yàn)，各實(shí)驗(yàn)RSD值均小于2.0%，回收實(shí)驗(yàn)的平均回收率為101.2%，表明分析方法適用于提取物中總香豆素含量測定.制備好的供試品溶液在室溫條件下放置，75 min內(nèi)溶液中總香豆素的含量幾乎不變，表明供試品溶液至少在75 min以內(nèi)穩(wěn)定.

3 ?藥材脂溶性成分提取工藝篩選

藥材吸醇量測定 按處方比例稱取藥材共100 g，加入濃度為70%的乙醇1 000 mL，浸泡過夜，濾過，稱量濾液體積，計(jì)算吸醇量.分別考察三批藥材吸醇量，藥材平均吸醇量為58 mL.

正交實(shí)驗(yàn) 設(shè)計(jì)因素水平見表1.以乙醇濃度、加醇量、提取時(shí)間、提取次數(shù)為考察因素，采用四因素三水平正交設(shè)計(jì)，以總香豆素含量為考核指標(biāo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn).按處方比例取醇提藥材100g，共9份，按因素水平表（表1）的設(shè)計(jì)條件進(jìn)行乙醇回流提取，濾過，濾液減壓回收乙醇，濃縮干燥成干膏[4-6]，正交實(shí)驗(yàn)表見表2，方差分析見表3.結(jié)果顯示，以歐前胡素含量為考核指標(biāo)，影響工藝因素大小的次序依次是B>A>D>C，B因素為主要影響因素，A，C，D因素影響較小;加醇量的影響具有顯著性差異（P<0.05），所以選擇最佳提取工藝為A1B2C1D1，即用8倍量70%乙醇提取一次，時(shí)間為1 h.

驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 取藥材1 000 g，共三份，按所確定的最佳提取工藝，加8倍量70%乙醇提取一次，時(shí)間為1 h，濾過，減壓濃縮，測定，總香豆素的含量為9.12 mg/g.驗(yàn)證結(jié)果表明，按該工藝提取，產(chǎn)物中香豆素含量較穩(wěn)定.

4 鑒別實(shí)驗(yàn)

4.1 膠囊劑中白芷的鑒別

取本品內(nèi)容物粉末適量，加甲醇30 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至2 mL作為供試品溶液.另取白芷對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液.再取處方中缺白芷的其他藥材，按“膠囊劑制法”制成陰性對(duì)照品及對(duì)照品溶液.[4-7]

按照《中國藥典》2015年版第四部“0502薄層色譜法”實(shí)驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿∶甲醇∶水（7∶3∶1）作為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254 nm）下檢視，結(jié)果見圖1.圖1結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性無干擾.

4.2 膠囊劑中羌活的鑒別

取本品內(nèi)容物粉末適量，加甲醇25 mL，加熱回流30 min，濾過，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状? mL溶解，作為供試品溶液.取羌活對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液.取處方中除羌活的其他藥材，按“膠囊劑制法”制成陰性對(duì)照品并制成陰性對(duì)照品溶液.[7-10]202721CF-2710-420B-86C7-1BA5BC2CE632

照《中國藥典》2015年版第四部“0502薄層色譜法”實(shí)驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷∶乙酸乙酯（4∶1）作為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，結(jié)果見圖2.圖2結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性無干擾.

4.3 膠囊劑中三七的鑒別

取本品內(nèi)容物粉末適量，加乙醇25 mL，超聲處理30 min，濾過，揮干溶劑，加水15 mL使溶解，加水飽和正丁醇萃取2次，每次15 mL，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液.取三七對(duì)照藥材，同法制成對(duì)照藥材溶液.取處方中除三七的其他藥材，按“膠囊劑制法”制成陰性對(duì)照品并制成陰性對(duì)照品溶液.[11-12]

照《中國藥典》2015年版第四部“0502薄層色譜法”實(shí)驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷∶乙酸乙酯∶甲酸（20∶4∶0.5）作為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，置日光燈下檢視，結(jié)果見圖3.圖3的結(jié)果表明，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上顯示相同顏色斑點(diǎn)，陰性無干擾.

5 結(jié)果與討論

羌白消痛膠囊有效成分提取的最佳醇提工藝為：藥材加8倍量70%乙醇提取一次，時(shí)間為1 h.該方法穩(wěn)定可行，適合工業(yè)生產(chǎn);TLC法鑒別出白芷、羌活、三七三味藥材，陰性無干擾，重現(xiàn)性好，可以列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)正文.

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編輯：琳莉202721CF-2710-420B-86C7-1BA5BC2CE632