新型冠狀病毒流行期間某三級(jí)兒童專科醫(yī)院患兒呼吸道病原學(xué)檢測結(jié)果分析

劉麗莎，高 嶺

(南京醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院 檢驗(yàn)科，江蘇 南京210008)

呼吸道感染是由多種病原微生物引起的感染性疾病，是兒童常見的疾病類型，病毒是引起兒童呼吸道感染的常見原因，大多數(shù)患兒在發(fā)病1周后血液中可以檢測到相應(yīng)特異性IgM 抗體，對(duì)呼吸道感染患兒進(jìn)行病原體和抗體篩查可為臨床疾病診斷提供直觀依據(jù)[1]。本研究對(duì)2020年1月至3月期間于南京市兒童醫(yī)院就診的呼吸道疾病患兒痰呼吸道病毒7項(xiàng)和血清中病原體IgM抗體9項(xiàng)檢測結(jié)果進(jìn)行回顧性分析，并與2019年同期進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 臨床資料選擇2020年1-3月以及2019年1-3月就診的呼吸道感染患兒，其納入標(biāo)準(zhǔn)符合人民衛(wèi)生出版社《諸福棠實(shí)用兒科學(xué)》(第8版) 中呼吸道感染診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，患兒年齡0-14歲。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患兒家長知情同意。

1.2 試劑儀器7項(xiàng)呼吸道有關(guān)病毒的檢測試劑購于美國的Diagnostic Hybrids,Inc公司,嚴(yán)格依說明書操作。以直接免疫熒光法對(duì)以下7類常見性呼吸道病毒：副流感病毒(PIV1/2/3)、呼吸道合胞病毒(RSV)、A 型流感病毒(Flu A)、B 型流感病毒(Flu B)以及腺病毒(ADV)進(jìn)行檢測。呼吸道病原體9項(xiàng)IgM抗體檢測試劑盒購自西班牙VIRCELL公司呼吸道感染病原體IgM九聯(lián)檢項(xiàng)目，采用間接免疫熒光法檢測Q熱立克次體(COX-IgM)、肺炎衣原體(CPa-IgM)、甲型流感病毒(INFA-IgM)、乙型流感病毒(INFB-IgM)、嗜肺軍團(tuán)菌血清1型(LP1-IgM)、肺炎支原體(MP-IgM)、副流感Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型病毒(PIV1PIV2PIV3-IgM)、呼吸道合胞病毒(RSV-IgM)和腺病毒(ADV-IgM)等9項(xiàng)呼吸道病原體IgM。

1.3 檢測方法及結(jié)果判讀痰標(biāo)本呼吸道病毒7項(xiàng)檢測方法為：在每份痰標(biāo)本中加入5 ml生理鹽水，洗脫后，630 g速度離心10 min，去除上清液及粘液，留下底部洗脫液和脫落細(xì)胞沉淀1-2 ml，嚴(yán)格按照說明書操作步驟，結(jié)果在100-400倍顯微鏡下觀察熒光顯色情況，當(dāng)觀察到被感染細(xì)胞中的明亮的蘋果綠熒光時(shí)為陽性反應(yīng)，未感染的陰性細(xì)胞則被熒光試劑中所包含的伊文斯藍(lán)負(fù)染為暗紅色。外周血標(biāo)本呼吸道病原體9項(xiàng)IgM抗體檢測方法為：患者空腹采集靜脈血3-5 ml，待血液自行凝固后經(jīng)離心分離血清檢測，采用間接免疫熒光法(IFA)對(duì)其進(jìn)行呼吸道病原譜檢測，嚴(yán)格按照試劑盒說明書，同時(shí)檢測肺炎衣原體(CPa)、肺炎支原體(MP)、RSV、FluA、FluB、PIV1、PIV2、PIV3、嗜肺軍團(tuán)菌(LP1)、Q熱立克次體(COX)和ADV等9種呼吸道病原體Ig M抗體，在免疫熒光顯微鏡下觀察,陽性為在200倍視野見細(xì)胞內(nèi)明亮蘋果綠色熒光。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，分類資料用比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 呼吸道感染患兒痰標(biāo)本病原體檢出情況

2.1.12020年1月-3月呼吸道感染患兒痰標(biāo)本呼吸道病原體抗原陽性率分析 1053例痰標(biāo)本呼吸道病原體抗原檢測結(jié)果顯示，陽性例數(shù)為241例，以RSV感染為主，見表1。

表1 1053例患兒痰標(biāo)本呼吸道病原體抗原檢出情況

2.1.22020年1月-3月呼吸道感染患兒13例痰標(biāo)本呼吸道病原體多重感染陽性率分析 241例陽性標(biāo)本中，13例為二重感染，以RSV合并其他病原體感染為主，見表2。

表2 13例痰標(biāo)本呼吸道病原體多重感染陽性率分析

2.1.32019年1月-3月呼吸道感染患兒痰標(biāo)本呼吸道病原體抗原陽性率分析 1888例痰標(biāo)本中566例為陽性，以RSV和ADV感染為主，其次為FluA，見表3。

表3 1888例呼吸道感染患兒痰標(biāo)本呼吸道病原體抗原檢出情況

2.1.42019年1月-3月呼吸道感染患兒18例痰標(biāo)本呼吸道病原體多重感染陽性率分析 566例陽性標(biāo)本中18例為二重感染，仍以RSV和ADV感染為主，見表4。

表4 18例痰標(biāo)本呼吸道病原體多重感染陽性率分析

2.2 呼吸道感染患兒外周血9種病原體 IgM檢出情況分析

2.2.12020年1月-3月呼吸道感染患兒外周血9種病原體 IgM陽性率 1099例呼吸道感染患兒中，陽性病例數(shù)為 232例，陽性率為21.1%，MP-IgM陽性率最高，為14.6%，見表5。

表5 2020年1月-3月呼吸道感染患兒外周血病原體IgM陽性率分析

2.2.22020年1月-3月呼吸道感染患兒外周血9種病原體 IgM兩種及以上抗體檢出情況分析 232例陽性病例中有39例為二重感染陽性，占16.8%；3例為多重感染，占1.3%。二重及多重感染陽性中以MP合并其他病原體感染較多見，見表6。

表6 232例陽性病例中兩種病原體IgM檢出率分析

2.2.32019年1月-3月我院就診的3609例呼吸道感染患兒中，外周血9種病原體 Ig M總陽性病例數(shù)為1058例，陽性率為29.3%，以MP-IgM陽性率最高，為23.3%，INFB(4.9%)和ADV(4.5%)次之，見表7。

表7 2019年1月-3月呼吸道感染患兒外周血病原體IgM陽性率分析

2.2.42019年1月-3月呼吸道感染患兒外周血9種病原體 IgM兩種及以上抗體檢出情況分析 1058例陽性病例中有228例為二重感染陽性，占21.6%；6例為多重感染，占0.6%。二重及多重感染陽性中MP合并其他病原體感染較多見，見表8。

表8 1058例陽性病例中兩種及以上病原體IgM檢出率分析

2.3 2020年1-3月與2019年同期呼吸道病原體陽性率差異分析

2.3.1兩年度同期7項(xiàng)呼吸道病原體陽性率差異分析 結(jié)果顯示2020年1-3月呼吸道感染患兒病原體檢出陽性率明顯低于2019年同期，兩年度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表9。

表9 兩年度同期7項(xiàng)呼吸道病原體陽性率差異分析

2.3.2兩年度同期9項(xiàng)呼吸道病毒IgM陽性率差異分析 結(jié)果顯示2020年1-3月呼吸道感染患兒病毒IgM檢出陽性率明顯低于2019年同期，兩年度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表10。

表10 兩年度同期9項(xiàng)呼吸道病毒IgM陽性率差異分析

3 討論

呼吸系統(tǒng)感染性疾病是兒童疾病中的常見病和多發(fā)病，可由多種病原體引起，一般無特異性臨床特征，臨床表現(xiàn)錯(cuò)綜復(fù)雜，針對(duì)性治療較困難，易造成臨床誤判延誤治療[3]。近年來，由于抗生素的廣泛使用，兒童細(xì)菌性感染的比例有所下降，而由病毒、支原體等其他病原體引起的兒童呼吸道感染病例日趨增加，其中以呼吸道病毒最常見[4]。兒童免疫功能尚未健全，加之其呼吸道解剖特點(diǎn)異于成人，呼吸道感染患兒早期臨床表現(xiàn)并不典型，癥狀輕重不一，臨床難以區(qū)分，在不能及時(shí)識(shí)別致病原的情況下，可能因?yàn)榕R床治療的無效而延誤疾病的治療，嚴(yán)重者會(huì)對(duì)患者機(jī)體造成嚴(yán)重?fù)p傷，甚至危及生命。因此，及時(shí)、準(zhǔn)確地識(shí)別病原體對(duì)呼吸道感染患者的治療至關(guān)重要[5,6]。目前有多種方法可用于檢測病毒，病毒分離培養(yǎng)、核酸檢測、抗原抗體的檢測等是常見方法，其中病毒細(xì)胞培養(yǎng)法是最經(jīng)典的方法，過去常作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，其特異性強(qiáng)，結(jié)果直觀，但成本較高且費(fèi)時(shí)費(fèi)力不利于及時(shí)指導(dǎo)臨床治療，當(dāng)標(biāo)本內(nèi)所含病毒載量較少時(shí)易出現(xiàn)假陰性。病毒核酸檢測靈敏度高，但實(shí)驗(yàn)條件及檢測人員要求相對(duì)嚴(yán)格，不利于常規(guī)檢測。病毒特異性抗體是臨床常見的檢測病毒感染的指標(biāo)，IgM抗體作為機(jī)體受到抗原刺激后最先產(chǎn)生的抗體，對(duì)疾病的早期診斷有重要意義，及早確定感染病原體類型并進(jìn)行干預(yù)治療顯得尤為重要。目前，免疫標(biāo)記技術(shù)廣泛應(yīng)用，檢測方便、快速且成本低，臨床實(shí)驗(yàn)室多使用間接免疫熒光法，可同時(shí)檢測患者血清中多種病原體IgM類抗體，及時(shí)準(zhǔn)確的為臨床提供參考依據(jù)。但是嬰幼兒可因免疫反應(yīng)較弱而出現(xiàn)假陰性，因此，抗原檢測亦十分重要，可采用直接免疫熒光法技術(shù)針對(duì)呼吸道病毒的特異性單克隆抗體，對(duì)呼吸道病毒進(jìn)行快速篩查與鑒定[7-9]。

2020年初，國內(nèi)面臨新型冠狀病毒肺炎巨大的防治壓力[10]，南京地區(qū)亦有包括兒童患者在內(nèi)的多數(shù)病例出現(xiàn)，冬春交季亦是呼吸道病毒感染性疾病的高發(fā)期。兒童常見呼吸道病原體的大樣本研究屢見報(bào)道[11-14]，但2020年初這一特殊時(shí)期兒童呼吸道病原體感染情況尚未見報(bào)道，本研究綜合分析了COVID-19流行期間我院就診呼吸道感染患兒感染病原體抗原以及產(chǎn)生抗體的情況，對(duì)這一特殊時(shí)期常見呼吸道病體有了總體的認(rèn)識(shí)。本文回顧性分析了2020年1月-3月期間在南京市兒童醫(yī)院就診的呼吸道感染患兒痰標(biāo)本病原體7項(xiàng)抗原和血清標(biāo)本呼吸道9項(xiàng)病毒IgM的檢測結(jié)果，并與2019年同期檢測結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)，兩年度呼吸道感染患兒呼吸道病原體抗原均以RSV感染為主，血清病原體抗體均以MP-IgM為主，病原體抗原和病原體抗體的構(gòu)成基本一致，這與國內(nèi)其他地區(qū)非同一時(shí)間段的研究結(jié)果基本一致，如李冬秀等人[15]研究了廣東省中山地區(qū)兒童常見的呼吸道疾病感染情況，結(jié)果顯示，兒童病毒感染陽性率為23.25%，其中以RSV感染為主，其次依次為ADV、PIV3、FluB、FluA、PIV1和PIV2，混合感染占0.84%。本研究中其余病毒抗原或IgM抗體檢出情況與現(xiàn)有報(bào)道中不同地區(qū)不同時(shí)期的結(jié)果略有差異，考慮與地域、氣候和生活習(xí)慣等差異有關(guān)[16-18]。本研究結(jié)果顯示，2020年1-3月呼吸道感染患兒就診例數(shù)和陽性率明顯低于2019年同期，2020年初與2019年初患兒主要感染病原體并無明顯差別，這與疫情期間嚴(yán)格執(zhí)行居家隔離政策，減少外出聚集以及良好的衛(wèi)生習(xí)慣密切相關(guān)，說明通過個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣的改善以及避免人群密切接觸可以降低呼吸道感染性疾病的患病率。

本文的不足之處在于，鑒于醫(yī)囑差異，呼吸道病毒7項(xiàng)抗原和呼吸道病原體9項(xiàng)IgM抗體檢測結(jié)果所來自病例并非完全一致，對(duì)結(jié)果判讀有一定影響。此外，本文重點(diǎn)關(guān)注了2020年初這一特殊時(shí)期兒童總體常見的呼吸道病原體感染情況，旨在與去年同期進(jìn)行比較，并未分性別分年齡段進(jìn)行具體探討。但是，本文對(duì)我院呼吸道患兒常見病原體感染情況做出了分析，對(duì)本地區(qū)臨床及時(shí)有效做出病因判斷提供了有力的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，亦可指導(dǎo)臨床診療，合理使用抗菌藥物，大大減少了接受抗菌藥物治療的時(shí)間，減少了抗菌藥物的使用，保障患兒健康，同時(shí)，可提高人群健康意識(shí)，在疾病高發(fā)季節(jié)做好預(yù)防保健，避免感染相關(guān)病原體。此外，本研究結(jié)果顯示，本地區(qū)兒童COX感染基本未見，9項(xiàng)IgM可考慮去除此模塊降低患兒家長經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。