BDNF、miR-381-3p、TXA2在抑郁癥中的表達及在烏靈膠囊干預效果評估中的價值

張 茹,李 萍,趙艷茹,楊 柳

(秦皇島市第一醫院 1.中醫科；2.營養科；3.心理科,河北 秦皇島066000)

抑郁癥為常見的慢性精神性疾病，臨床癥狀主要表現為情緒低落、行為缺乏主動和思維遲緩等，影響患者的生活質量[1-2]。西藥是目前抑郁癥的主要治療手段，有些患者對西藥治療的耐受性和依從性較差，且治療后仍然有很多患者殘留認知損害等[3]。烏靈膠囊是國家新發現的一種純中藥制劑，該藥多用于治療腦卒中等器質性疾病伴發的抑郁狀態，關于抑郁癥的治療效果少有研究證實[4]。BDNF是神經生長因子的家族成員之一，影響神經元的生長、存活及誘導分化[5]。已有研究表明，miR-381-3p沉默可以保護神經元，減輕抑郁癥對神經元的損傷，很有可能成為治療抑郁的潛在靶點[6]。抑郁癥是一種與精神-神經-免疫失調相關的疾病，而TXA2可以收縮血管和呼吸道平滑肌、刺激血小板活化，進而影響抑郁癥[7]。基于此，本文旨在研究，BDNF、miR-381-3p、TXA2在抑郁癥中的表達及在烏靈膠囊干預效果評估中的價值。

1 對象與方法

1.1 研究對象

本文選取于2020年3月-2021年3月在秦皇島第一醫院就診的50例抑郁癥患者為抑郁組，同時期在我院體檢的50例健康人為健康組，兩組患者年齡、性別、體質量、收縮壓、舒張壓、空腹血糖均無統計學差異(P>0.05)，見表1。

表1 兩組患者一般資料比較

納入標準：(1)符合美國精神病協會《精神障礙診斷與統計手冊(第4版)》[8]的診斷標準；(2)能夠理解和遵守研究要求；(3)漢密爾頓抑郁量表(Hamilton Depression Rating Scale，HAMD)評分≥17分；(4)近2周未患感染性、傳染性及過敏性疾病；(5)本文研究患者及其家屬均知情，簽署知情同意書，經過我院倫理委員會批準。

排除標準：(1)腦器質性精神障礙；(2)患有嚴重的軀體疾病或神經系統疾病，近期外傷或近1周內有感染或發熱者；(3)近3個月服用過影響認知功能的藥物或激素類藥物；(4)處于哺乳期或妊娠期的女性患者。

1.2 治療方法

根據治療方式將抑郁組又分為對照治療組(23例)，烏靈膠囊治療組(27例)；對照治療組患者口服草酸艾司西酞普蘭(生產廠家山東京衛制藥有限公司生產，批號：1308205，規格：5 mg/片) 10 mg/d，根據治療需要逐步調整劑量至10-20 mg/d。烏靈膠囊治療組在此基礎上加用烏靈膠囊(浙江佐力藥業股份有限公司，生產批號20120521，規格：0.33 g/粒)每次0.99 g，每天3次，兩組均治療8周。

1.3 指標檢測

1.3.1實時熒光定量PCR檢測miR-381-3p、BDNF 采集所有研究對象入院第二天清晨空腹靜脈血5 ml，以2 000 r/min離心15 min分離血清，提取miR-381-3p、BDNF總RNA，對提取總RNA的純度、含量進行檢測，隨后逆轉，逆轉錄處理后獲得cDNA，獲得cDNA后使用Primer5.0軟件設計引物，內參U6。miR-381-3p引物序列：正義鏈：5’-TAATCTGACTACAAGGGCAAGCT-3’，反義鏈：5’-TATGGTTGTTCTGCTCTCTCTCTC-3’；BDNF引物序列：正義鏈：5’-CGTCGGATCCATGACCATCCTTACTATG-3’，反義鏈：5’-CGTCGATCCACTAGTACGCGTGATCCC-3’；內參基因U6引物序列：正義鏈：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反義鏈：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’,其余步驟按說明書嚴格進行。采用2-△△Ct方法計算出需要檢測的miR-381-3p、BDNF相對表達量。

1.3.2放射免疫分析法檢測TXA2 抽取所有入選者的空腹靜脈血5 ml，取上清，采用放射免疫分析試劑盒(廠家：上海滬震實業有限公司，貨號：hz-10047)檢測TXA2表達，具體步驟嚴格按照說明書進行。

1.3.3檢測5-HIAA、NE、DA 兩組患者均采集入選第二天和治療后第二天清晨空腹靜脈血5 ml，以3 000 r/min離心10 min，半徑5 cm分離血清，置-25℃冰箱保存待測，5-HIAA、NE、DA的含量使用美國ESA公司生產的5600A型高效液相色譜-4通道庫侖化學檢測器測定，所需試劑盒購自上海西唐生物公司，嚴格按照說明書進行。

1.3.4療效評估[9]治療后所有患者填寫抑郁自評量表(Self-rating depression scale，SDS)，檢測5-HIAA、NE、DA水平，量表評分<53分、5-HIAA≥0.22 μmol/L，NE≥50 ng/L，DA≥424 nmol/24 h，則表示該藥有效，量表評分≥53分、5-HIAA<0.22 μmol/，NE<50 ng/L，DA<424 nmol/24 h則表示無效。

1.4 統計學處理

2 結果

2.1 BDNF、miR-381-3p相對表達及TXA2表達在兩組患者中的比較

如表2所示，健康組BDNF、miR-381-3p相對表達量高于抑郁組，TXA2表達低于抑郁組(P<0.05),烏靈膠囊治療組BDNF、miR-381-3p相對表達量高于對照治療組，TXA2表達低于對照治療組(P<0.05)。

表2 BDNF、miR-381-3p相對表達及TXA2表達在兩組患者中的比較

2.2 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達與抑郁自評量表及抑郁癥相關指標的分析

如表3所示，5-HIAA≥0.22，NE≥50，DA≥424，抑郁自評量表<53時BDNF、miR-381-3p相對表達量升高，TXA2表達降低(P<0.05)。5-HIAA<0.22，NE<50，DA<424，抑郁自評量表≥53時BDNF、miR-381-3p表達降低，TXA2表達升高(P<0.05)。

表3 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達與抑郁自評量表及抑郁癥相關指標的分析

2.3 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達對烏靈膠囊治療效果的預測價值

如表4，與BDNF、miR-381-3p、TXA2單一預測相比，聯合預測對烏靈膠囊效果預測效能較高(P<0.05)。三項聯合檢測靈敏度、準確度高于單一檢測(P<0.05)，見圖1。

圖1 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達對烏靈膠囊治療效果的預測價值

表4 BDNF、miR-381-3p、TXA2表達對烏靈膠囊治療效果的預測價值

3 討論

抑郁癥的病理機制復雜，嚴重危害人類的身心健康。國內外開展了許多關于抑郁癥發病機制的研究，研究方向主要涉及神經遞質、細胞信號轉導通路、神經-內分泌系統、神經元營養與調亡、神經突觸重塑等[10]。目前有研究表明，烏靈膠囊可改善抑郁癥患者抑郁癥狀及各種軀體疾病伴發的抑郁狀態，且安全性良好[11]。

BDNF表達與抑郁癥的發生、發展有著密切聯系，通過接受抗抑郁治療可以增加該指標的表達，同時BDNF受多種微小核糖核酸分子的調控[12]。本研究顯示，對于抑郁癥患者使用烏靈膠囊干預后，有效者BDNF表達量高于無效者，同時該因子對于抑郁癥具有一定的診斷價值，BDNF可以預測烏靈膠囊治療效果。究其原因，烏靈膠囊可增強谷氨酸酶活性，促進腦部攝取谷氨酸、γ-氨基丁酸，增強大腦皮質γ-氨基丁酸受體的活性，BDNF是突觸可塑性調節分子，其低表達可導致海馬神經元萎縮和喪失，它還可以誘導谷氯酸釋放和樹突棘密度増加[13-14]。

本文研究結果表明，烏靈膠囊治療的有效患者miR-381-3p表達高于無效患者，同時該因子對于抑郁癥具有一定的診斷價值。烏靈膠囊具有益氣養神、健脾養心、安神解郁的作用，烏靈膠囊藥用成分主要為烏靈菌粉，同時含有賴氨酸、谷氨酸、γ-基丁酸等19種氨基酸，以及腺苷、多糖和鈣、鐵、鋅等多種礦物元素[15]。miR-381-3p參與了多種腫瘤的發生、發展，同時調控神經干細胞增殖、分化，而BDNF作為miR-381-3p的靶向調控分子，其本身對神經損傷和修復具有重要作用[16-17]。有研究表明，過表達miR-381-3p可以促進BDNF相對表達，從而保護神經元，減輕皮質酮對神經元的損傷，并且抑郁程度越重指標表達越低[18]。

抑郁癥發病時大腦出現相應的變化[19]。本研究中，對于抑郁癥患者使用烏靈膠囊干預后，有效患者TXA2表達低于無效患者。TXA2是血栓素合成酶催化前列腺素環內過氧化物同分異構化的產物，主要是由血小板、白細胞所分泌合成，過表達時可促使機體大量釋放腎上腺素，激活血小板，從而形成惡性循環，參與多種疾病的發生、發展[20-21]。有研究結果顯示，TXA2在抑郁癥患者的外周血中表達較高，隨著疾病的加重表達逐漸升高，猜測其可能與抑郁癥的發生、發展有關，成為抗抑郁癥的潛在治療靶點[22]。

綜上所述，對于抑郁癥患者使用烏靈膠囊干預后，有效患者BDNF、miR-381-3p表達較高；TXA2表達較低，該變化與使用烏靈膠囊治療抑郁癥的療效有一定關系，三者聯合檢測對于抑郁癥具有診斷價值，對于烏靈膠囊治療效果有一定的預測價值，但是本文研究樣本較少，還需進一步的探究。