微柱凝膠法與凝聚胺法在臨床交叉配血中的比較

張璐璐

（沈陽市骨科醫院承基醫院，遼寧 沈陽 110000）

在對輸血患者進行治療前，交叉配血測定是一項十分重要的項目，科學準確的交叉配血能夠保證臨床輸血的安全性和有效性。凝聚胺法（manual polybrene test，MPT）操作簡便，可以在很短的時間里產生效果，會釋放出更多的正電荷和血紅胞的負電荷產生一定的中和作用，從而減少血紅胞之間的距離，使正常的血紅胞之間產生不特定的凝集，可以迅速檢測到血清中的IgG抗體。但是，在免疫或紅細胞抗原弱的情況下，用MPT進行血液檢測，容易出現漏診。微柱凝膠法（microcolumn gel test，MGT）[1]是一種改良的血清學技術，操作便捷、節省時間、敏感度高、陽性陰性結果顯著、結果容易記錄，具有標準特征、自動特征和重復性強特征[2]。所以MGT在外國國家應用較為普遍，在我國也多應用于不完全抗體篩查、抗體測定、交叉配血和血型鑒別[3]。MGT已廣泛用于臨床上的跨血液配型，它是離心技術、生物化學凝膠篩選技術和免疫化學抗原抗體作用三種技術的綜合產物，具有操作方便、容易判斷、影響因子低、敏感性高、特異性好等特點，而且可以進行大容量、多樣本的交叉配制。但是這種方法檢查費用較高，孵化和離心需要一定的過程，會延誤急救患者的救治，從而導致嚴重的結果。針對于此，本文將著重分析MGT與MPT在臨床交叉配血中的應用，選擇沈陽市骨科醫院承基醫院接診的192例維持性血液透析患者開展調研。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取沈陽市骨科醫院承基醫院于2016年2月至2019年3月收住的192例患者進行初次輸血不規則抗體測定，均為陰性的維持性血液透析患者，其中男性82例，女性110例，年齡13～77歲。每例輸血次數最多36次，最少1次。納入標準：①均需要輸血治療。②患者的資料完整，自愿入組研究，簽署知情同意書。③輸血前接受較差配血檢驗。排除標準：①中途退出研究者。②合并其他重大疾病的患者。

1.2 方法 MGT交叉配血操作流程：第一步在凝膠卡片上記錄供血人員的姓名、主側管、次側管。第二步制備供、受血人員0.50%RBC懸液，在主側加進50 μL供血人員的RBC懸液和受血人員的25 μL血漿；在次側加進50 μL受血人員RBC懸液及供血人員25 μL血漿。放置在37 ℃孵育15 min，1000 r/min，離心10 min。最后分析結果，RBC均勻沉浸在管底患者判定為陰性，懸浮在凝膠表面或者膠中判定為陽性。

MPT交叉配血試驗依據試劑盒的說明書進行。對MGT交叉配血陽性標本處理：主側陽性標本、次側陽性標本分別應用MPT予以交叉配血，凡是次側陽性標本用患者RBC進行直接抗人球蛋白測定。

1.3 觀察指標 ①對比MGT和MPT法交叉配血結果，包含交叉配血聯合、主側凝集、次側凝集、主次側均凝集。②輸血次數和不規則抗體陽性的關系。③對比MGT和MPT測定結果。④對比MGT和MPT測定時間。

1.4 統計學方法 應用SPSS 18.0軟件記錄本次研究數據，計數資料用[n（%）]形式表達，行卡方檢驗。MGT和MPT的檢測時間采用（±s）表示，行t檢驗。P＜0.05提示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MGT和MPT交叉配血結果對比 MPT中8例主側凝集患者和26例次凝集中均測定出不完全抗體，12例主次測均呈現為凝集狀態，經過37 ℃水浴10 min后，鏡檢紅細胞不凝集，數據顯示為冷凝集，124例次MGT次凝集患者，紅細胞直接抗人球蛋白測定全部呈現為陽性。8例主側凝集患者均測定出不完全抗體，經過配型后行O型洗滌紅細胞懸液輸注，26例MPT次側凝集患者改為輸入同型洗滌紅細胞，12例冷凝級和其余90例MPT配血聯合患者輸入用RBC懸液，30日后隨訪，輸血未存在不良反應。見表1。

表1 MGT和MPT法交叉配血結果對比

2.2 輸血次數和不規則抗體陽性的關系 在輸血次數不斷增加中，不規則抗體陽性也隨之提升，陽性率均有所提升，二者之間具有相關性。本次研究中輸血次數為1～、6～、11～、15～、20～，例次分別為384、186、154、130、70，共計924例次；不規則抗體陽性分別為18例（4.69%）、20例（10.75%）、26例（16.88%）、30例（23.08%）、30例（42.86%），共計124例（13.42%）。

2.3 MGT和MPT測定結果對比 MGT測定總陽性率＞MPT，MGT和MPT配血不相合，組間差異有統計學意義，P＜0.05。見表2。

表2 MGT和MPT測定結果對比

2.4 MGT和MPT測定時間對比 MGT的平均檢測時間為（11.51±2.31）min，MPT的平均檢測時間為（29.63±3.63）min，組間差異有統計學意義（t=58.3539，P=0.0000＜0.05）。

3 討論

近幾年，血液中的不良反應發生率呈上升趨勢，這與其他血液系統不合、免疫性疾病、溶血性疾病等因素密切相關。因此，在進行血液輸入之前，應與患者進行交流，以掌握患者的病情和使用狀況，選擇更精確、更敏感的血液配型，以保證患者的安全。維持性血液透析是慢性腎功能衰竭尿毒癥患者生命的基本治療形式，血液透析患者中常出現程度不同的重度貧血和中度貧血[4]。本文分析中，MPT中8例主側凝集患者和26例次凝集中均測定出不完全抗體，12例主次測均呈現為凝集狀態，124例次MGT次凝集患者，紅細胞直接抗人球蛋白測定全部呈現為陽性。8例主側凝集患者均測定出不完全抗體，經過配型后行O型洗滌紅細胞懸液輸注，26例MPT次側凝集患者改為輸入同型洗滌紅細胞，12例冷凝級和其余90例MPT配血聯合患者輸入用RBC懸液，30日后隨訪輸血未存在不良反應。在透析進行中輸注血液和血液制品，是保證患者安全透析的關鍵舉措，維持性血液透析患者需要經過多次且反復輸血，造成血漿中蛋白質，包含IgG及補體等，非特異性吸附于紅細胞表面中，以此讓患者的紅細胞致敏。在MGT法中，微柱凝膠內含有抗體IgG、C3d溶液[5]，其可以和人紅細胞中的IgG和補體結合，在人體外產生凝集[6]。

通過本次數據分析，隨輸血次數不斷增加，不規則抗體陽性及陽性率也有所提升，二者之間具有相關性。本次研究中輸血次數為1～、6～、11～、15～、20～，例次分別為384、186、154、130、70，共計924例次；不規則抗體陽性分別為4.69%、10.75%、16.88%、23.08%、42.86%，共計13.42%。這一數據說明，對于需要輸血的維持性血液透析患者來說，容易出現配血結果無法判定的問題。在124例次MGT交叉配血試驗次側凝集中，直接抗人球蛋白測定均呈現為陽性，這也給臨床輸血帶來難度，在這一狀態下聯合MPT予以交叉配血就顯得十分關鍵[7]。

在臨床上，輸血主要是通過補充失血量、維持血容量、調節血壓、補充氧或補充凝血成分等多種方式來進行，特別是對重癥患者的救治，可以迅速補充血容量，改善休克狀態。交叉配型為臨床上的一個先決條件，即要密切注意患者與供血人的血液（紅細胞、血清/血漿）的配型，如果在主側處出現了凝集，就不允許進行輸血；如果出現一側紅細胞，就應盡量少輸入。目前，在血液中進行交叉配制的有微柱凝膠法、聚凝胺法等，都有各自的優點和不足之處，微柱凝膠法由于靈敏度高、操作方便、重復性好，已逐步發展為跨界輸注的一種重要方法。

當前臨床多采用MPT，是通過中和細胞表面的負電荷，以此縮短紅細胞之間距離，導致RBC非特異性凝集狀態，促進RBC抗原和IgG、IgM抗體聯合，當加進重懸液后，如出現和RBC抗原有關的IgG或者IgM抗體，凝集不消失，如果沒有和RBC抗原有關的IgG或IgM抗體，凝聚胺引發的凝集現象消失[8]。MGT法的基本原理為，RBC和血清在含有葡聚糖凝膠的小試管中孵育，經過離心處理。如果抗原抗體無法適應，則RBC沉浸在管底，也就是陰性狀態。如果抗原抗體相互適應，則抗體吸附于凝膠中，從而讓RBC不易下沉，被固定于凝膠之間，也就是陽性反應[9]。聯合上述結果和不完全抗體篩查數據，臨床對不完全抗體陰性、冷凝集、MPT交叉配血陰性的90例血液透析患者，輸注RBC懸液，在輸注后的30日內隨訪未出現不良反應。

當前MPT多應用于基層醫院中，在測定敏感度方面，有數據分析MGT相對于MPT高于2～6個滴度[10]。MGT已經成為當前輸血檢查的推薦形式，也是凝膠過濾方法和抗原抗體反應的聯合，和MPT對比，此種方式具有更高的靈敏度，結果更為精準。也有結果分析，交叉配血過程中靈敏度相比于MPT高出1～5個滴度，能夠捕捉到較小的抗原抗體反應，另外操作容易掌握，結果更加平穩，可以反復，不會過多的受人為因素影響。根據本文結果分析，MGT法測定總陽性率＞MPT，MGT法和MPT配血不相合，組間存在差異性（P＜0.05）。由此數據也進一步證實，MGT相比于MPT交叉配血，更能提升測定的靈敏度，不規則抗體測定的陽性率高于微柱凝膠，最主要是能夠排除冷凝集的干擾特征，為了確保輸血的安全，提供主要依據。應用MPT交叉配血雖然能夠快速測定出不完全抗體，但是對于冷凝集標本存在假陽性，也在一定程度上導致醫師判斷失誤，從而延長交叉配血試驗時間，給交叉配血帶來一定難度，導致搶救時間延誤。通過研究分析兩種方法，次側配血不合較多。這是由于患者紅細胞被本身的抗體致敏，直抗陽性是次側不合的關鍵因素，多發于淋巴細胞性白血病、多發性骨髓瘤（MM）、陣發性睡眠性血紅蛋白尿癥（PNH）中，藥物抗體引起免疫性溶血反應所致[11-12]。

MPT中的多胺是一種高價的季胺鹽聚合物，溶解后能產生一定量的正電荷，中和紅細胞表面的負電荷，縮短紅細胞之間的距離，產生可逆的非特異性凝集，但如果與抗體致敏的紅細胞凝集，則會不可逆的出現凝集，以此判斷接受血液者與獻血者的血液是否能夠結合。MPT是一種快速簡便的方法，但MPT不能檢測-k抗體。如果患者有反復輸血、懷孕或溶血性貧血、自身免疫性抗體、紅細胞抗原較弱，檢測過程不需要使用其他設備，適合在急診配血中使用，但是弊端在于使用該檢測方法可能會出現漏檢問題[13-14]。

MGT是近年來推廣的新技術，已逐步應用于臨床。MGT的操作簡便，結果易于判斷，特異性、靈敏度和重復性高。在測試過程中對操作人員的依賴性很小，結果可以保存很長時間，檢查結果可以在隨訪期間隨時復查。在抗球蛋白試劑中加入紅細胞鹽水懸液后，如果紅細胞表面抗體球蛋白與試劑中的抗體發生特異性反應，紅細胞就會凝集，離心后可觀察到紅細胞是聚集在凝膠上還是聚集在凝膠中部，以確定是否為陽性，如聚集在底部，則為陰性。MGT可以有效地降低人為失誤的概率，且結果更加精準。這種方法通常需要30 min左右的離心機輔助，能夠減少人工成本，但是弊端在于需要配血的時間較長，所以在急癥以及緊急血液配型中并不適用[15-16]。

MPT所用的凝聚胺為高價的陽離子型季胺鹽聚合物，其能在溶化后生成一定數量的正電，中和紅細胞的距離，減少其距離，形成可逆性的、不特定的凝集，但如果與抗體引起敏感的紅細胞，就會形成不可逆轉的凝集，以此來判定受血人與供血人的血能否融合。結果表明，MPT具有快速、簡便、快速的優點，而且具有較高的陽性檢出率。如果有輸血史、妊娠史、溶血性貧血、紅細胞上抗體、紅細胞上抗體等，容易出現漏檢。MGT是一種新技術，其在實際生產中正逐步被采用，這種檢測技術操作簡便，易于判斷，特異性高，靈敏度高，重復性好，對受試者的依賴程度低，可以長時間的保留結果，并可在以后的處理中對檢測結果進行復查。當將受試者的血球生理鹽水懸浮液注入到抗球蛋白試劑時，如果與血清中的抗原發生了特異的反應，那么可以進行凝集，然后開展離心處理。MGT可以減少人為錯誤發生的概率，從而使計算的精度得到提高。但由于需要使用離心和孵化設備，因此需要30 min的時間，不宜在緊急情況下進行血液調配[17-18]。

在常規意義上，MPT是一種最常應用的交叉配血方式，MGT在測定RBC吸附的免疫球蛋白和補體中，相比于MPT有更為顯著的優越性特征。所以臨床建議將MGT和MPT聯合應用，通過這兩種路徑記錄RBC凝聚情況，對非特異性凝集導致的配血結果判定困難，具有更為顯著的互補特征，有助于臨床更快速的提升輸血安全性和有效性。