消除脂血對臨床生化檢驗常用指標干擾的方法比較

王天義

（大連康復療養中心，遼寧 大連 116013）

在過去的20年里，檢驗醫學的重點已經逐漸轉移至分析前階段，這是整個測試過程中最容易出錯的階段。因此應特別注意標本采集、運輸、樣品質量、儲存和處理，以獲得準確的檢測結果[1]。目前已經發布了許多指南，包括由臨床臨床生化檢驗標準協會（CLSI）制定的指南，以幫助臨床生化檢驗管理測試周期中提到的每個方面[2]。在實踐中，內源性干擾可能是臨床生化測試的重要錯誤來源[3]。其中脂血癥是最常見的分析前干擾之一，可能是脂蛋白顆粒積聚引起的樣品渾濁，會導致光吸收增加，影響使用分光光度法的測試。血脂還可能通過體積置換引起干擾，尤其影響電解質分析[4]。此外，脂血樣本的其他可能問題包括樣本不均勻性（破壞分析儀檢測和移液器樣本的方式）和血清蛋白電泳圖譜的改變。雖然低水平的脂血癥通常不會顯著影響臨床實驗室檢測，但嚴重脂血癥的存在可能會影響分析。脂血雖然不像溶血和黃疸樣本那樣常見，但仍然會引起相當大的問題[5]。根據CLSI C56-A文件，真空超速離心是去除脂血的推薦方法，其他方法雖也被用于去除脂血的常規實踐，如高速離心、PEG沉淀或乙醚處理等方法來消除脂血對常規生化項目的干擾，但各有優缺點[6]。鑒于此，本文以所在醫院2020年1月至2021年12月，采集到的100例健康體檢人員的血液樣本為例，重點探究高速離心法和LipoClear脂質清除劑對臨床生化檢驗中消除脂血對常用指標干擾的效果，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 人口統計 本次研究經所在醫院的倫理委員會批準，征得研究對象本人及其家屬的同意并簽署《知情同意書》后方可進行。具體以所在醫院2020年1月至2021年12月，采集到的100例健康體檢人員的血液樣本為例，隨機分為對照組和觀察組。對照組50例中，男性24例，女性26例；患者年齡24～37歲，平均年齡（31±2.45）歲；患者身高151～181 cm，平均身高（172±1.34）cm；患者平均體質量指數21.1 kg/m2；患者平均VO2max 41.2 mL/（min·kg）；平均最大心率192次/分。觀察組50例中，男性27例，女性23例；患者年齡25～41歲，平均年齡（32±2.65）歲；患者身高152～183 cm，平均身高（173±1.54）cm；患者平均體質量指數22.2 kg/m2；患者平均VO2max 42.1 mL/（min·kg）；平均最大心率193次/分。所選患者均為身體健康體檢人群，且排除懷孕期患者、精神疾病患者或其他不適宜參與研究的患者。兩組統計學數據對比，P＞0.05，可進行對比研究。

1.1.2 試劑與器材 研究使用日立7600C全自動生化分析儀，各種常規生化試劑為四川邁克科技有限公司提供，cfas標準品、質控血清為美國郎道產品；Lipoclear脂質清除劑為StatSpin公司提供，30 mL裝，批號11131；脂肪乳注射液為西安力邦制藥有限公司提供，批號1l0817。TGl6-W微量高速離心機。

1.2 研究方法 本次研究主要檢測包括K、Na、Cl、Ca、P、Urea、Cr、UA、TBIL、GLU、ALT、AST、GGT、LDH、AMY、TP、ALB和TG在內的18項臨床常用生化檢測項目。其中，對照組禁食8～12 h后，由護士和醫療技術人員使用無菌技術采集靜脈血，樣本在-20 °C下冷凍24 h。24 h后，解凍并通過濾紙過濾。過濾后，測定18項生化項目，再取血清0.5 mL于小型離心管中，加入脂肪乳注射液10 μL，充分混勻，形成中高濃度脂血，震蕩混勻后靜置5 min，采用6 000 r/min離心5 min，使用加樣槍吸取表層凝固物下的清亮液體約0.3 mL，再次測定樣本的上述項生化項目。其中，檢測數據根據稀釋倍數進行校正。

觀察組禁食8～12 h后，由護士和醫療技術人員使用無菌技術采集靜脈血，樣本在-20 °C下冷凍24 h。24 h后，解凍并通過濾紙過濾。過濾后，測定18項生化項目，再取血清0.5 mL于小型離心管中，加入脂肪乳注射液10 μL，充分混勻，形成中高濃度脂血，震蕩混勻后靜置5 min，再按試劑說明書加入0.1 mL LipoClear試劑，震蕩混勻后靜置5 min，再次測定上述各生化項目。其中，檢測數據根據稀釋倍數進行校正。

1.3 統計學方法 使用梯形法計算AUC和dAUC TAG，使用SAS統計軟件（Windows版本8.2，SAS Institute Inc）進行統計分析。數據表示為（±s），P＜0.05為差異有統計學意義，并根據公式計算兩組樣本處理前后生化檢查結果的偏差。

2 結果

對照組中，經過干擾后樣本生化檢測結果中的P、TP和TG發生明顯偏差，其余項目結果在偏差允許范圍內，推測偏差是由隨機誤差引起，能夠在一定程度上反映患者的血液生化水平；觀察組中，經過干擾后樣本生化檢測結果均未發生偏差，能夠有效地反映患者的血液生化水平。見表1。

表1 兩組樣本干擾前后各生化項目檢測結果表對比（±s）

表1 兩組樣本干擾前后各生化項目檢測結果表對比（±s）

3 討論

眾所周知，臨床生化檢測分析是評估人體內分泌功能的重要方法[7]。隨著可以消除特定基因產物功能技術的出現，如RNA干擾或鋅指核酸酶誘變，隨著越來越多的小分子抑制劑的發展，臨床生化檢測比以往任何時候都更為重要，可以使用已有的生化方法為分泌途徑提供可能性[8]。因此，臨床生化檢測分析對于全面剖析哺乳動物細胞分泌運輸的機制非常重要。如生化檢測中的丙氨酸氨基轉移酶（ALT）通常是識別肝細胞損傷存在的最有用的酶。ALT存在于許多組織中，但其最大活性是在肝臟中。該酶主要存在于細胞溶質中，在線粒體中也發現了同工酶（ALT2），并且主要存在于肝臟的門靜脈區，其肝細胞濃度高達血清中的10 000倍[9-13]。ALT在糖異生和氨基酸代謝中起主要作用。血清活性升高的幅度與受影響的肝細胞數量成正比，其顯著升高將反映不可逆的細胞損傷和壞死，而輕度升高可能主要表明膜起泡和可逆的細胞損傷。

在實踐中，溶血、黃疸和脂血等都可能對生化檢測結果的正確性造成影響，進而影響生化檢測對患者真實情況的反映[14]。尤其是脂血，多種因素可導致樣品脂血癥。脂血癥最常見的干擾原因是在采血前沒有禁食。另一個主要原因是高三酰甘油血癥，由原發性疾病（如Fredrickson Ⅰ、Ⅳ或Ⅴ型高脂血癥）或繼發原因引起。高三酰甘油血癥的常見繼發性原因包括糖尿病、酗酒、腎病、非酒精性脂肪肝、艾滋病毒感染和藥物治療。一些靜脈輸液通過含有脂質乳劑可直接引起脂血癥，或者用于腸外營養。作為某些藥物中毒的解毒劑（如局部麻醉劑），或作為水溶性差藥物的稀釋劑（如懸浮在Intralipid中的丙泊酚注射液），最近接受靜脈內脂質乳劑治療患者的血液采集可能會導致血脂異常高的樣本。而在臨床生化檢測中，脂血造成光散射和吸收、體積消耗（水相減少）和物理化學干擾，因此務必要在血液樣本中去除脂血，以便于確保生活檢測結果的準確性[15-16]。

實際上，有多種方法可以評估實驗室樣本中的脂血癥。最簡單的是對試樣進行目視檢查；然而，這種類型的評估存在顯著不準確性和個體差異[17]。血清或血漿中三酰甘油的測量也可以粗略評估脂血癥的程度，但渾濁程度與三酰甘油濃度的相關性并不好，具有復雜的非線性關系。許多臨床化學平臺能夠確定血脂指數，對于血脂指數的自動檢測，患者樣本在鹽水或緩沖液中進行稀釋，然后測量特定波長。如Roche Diagnostics cobas分析儀使用660/700 nm，Beckman Coulter化學分析儀使用660/800 nm。此外，真空超速離心、高速離心、PEG沉淀、乙醚處理等方法，都能夠有效去除脂血。如使用離心分析儀（Cobas-Mira，Roche，Basel，Switzerland）通過酶比色法分析血樣的TAG、FA、甘油和葡萄糖等。通過減去甘油值來校正TAG值。然而這些方法或操作復雜、或成本較高、或準確率較低，或多或少都存在著一定缺點，如脂血指數方面缺乏標準化，以及由于樣品渾濁而不是由脂質積累引起的假陽性等[18]。

目前國外報道中，一種市售的非離子聚合物LipoClear?已廣泛用于世界各地的臨床生化檢驗，用于消除脂血對常規生化項目的干擾。根據制造商的聲明，LipoClear?不能用于測定單克隆丙種球蛋白病免疫球蛋白、蛋白質、磷或電解質。由于制造商的數據可能與在臨床生化檢驗獲得的數據不同，正如Nikolac及其同事最近的一項研究所示，因此在臨床生化檢驗環境中使用用于特定的臨床生化檢驗。令人驚訝的是，對當前文獻的回顧顯示，只有少數研究評估了不同去脂方法對臨床生化檢驗結果的影響。

鑒于此，本次研究重點在于評估和比較高速離心法和LipoClear脂質清除劑對臨床生化檢驗中消除脂血對常用指標干擾的效果。本次研究采用受試者內設計，每個參與者都作為自己的對照。研究以隨機順序安排，并以至少1周的清除期分開。隔夜禁食8～12 h后，早上將特氟龍導管插入肘前靜脈，并要求受試者在試驗期間保持半臥位。結果顯示，對照組中經過干擾后樣本生化檢測結果中的P、TP和TG發生明顯偏差，其余項目結果在偏差允許范圍內，推測偏差是由隨機誤差引起，能夠在一定程度上反映患者的血液生化水平；觀察組中，經過干擾后樣本生化檢測結果全未發生偏差，能夠有效地反映患者的血液生化水平。

綜上所述，本次研究在一定程度上表明LipoClear脂質清除劑對臨床生化檢驗中消除脂血對常用指標干擾的效果更好，臨床接受更高，且操作更為簡單，值得臨床推廣。