高脂高熱量飲食對中國健康受試者口服氟康唑片藥動學的影響

郭彩會，李穎，孫雪，劉亞麗，宋浩靜，王祁民，董占軍

(1.河北省人民醫(yī)院藥學部，石家莊 050051；2.石家莊四藥有限公司，石家莊 052100)

氟康唑是一種新型三唑類抗真菌藥物，具有廣譜抗真菌作用、吸收快且完全、耐受性好、不良反應少等特點，在體內(nèi)通過抑制真菌細胞色素P450(CYP)介導的14α-甾醇的去甲基作用，從而抑制麥角甾醇的合成，導致真菌細胞膜合成不足。廣泛用于各種深部真菌感染性疾病及淺表、黏膜真菌感染的治療[1]。國內(nèi)外研究氟康唑人體藥動學和生物等效性的相關文獻報道較多[2-3]，但筆者未見飲食對中國健康人體內(nèi)的氟康唑藥動學參數(shù)影響的相關報道，本研究以中國健康成年人為研究對象，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS) 法測定血漿氟康唑濃度，在空腹和餐后給藥條件下，研究氟康唑片在健康人群中吸收程度和速度的差異，評價高脂高熱量飲食對單次口服氟康唑片藥動學的影響，同時評價空腹和餐后條件下氟康唑片的安全性，旨在為臨床用藥安全提供科學依據(jù)。

1 材料、對象與方法

1.1材料

1.1.1藥品 氟康唑片(輝瑞制藥有限責任公司，批號：H79933，規(guī)格：每片150 mg)；待測物信息：氟康唑?qū)φ掌?中國食品藥品檢定研究院，批號：100314-201605，含量：99.7%) 、內(nèi)標：氟康唑-d4對照品(TLC Pharmaceutical Standards公司，批號：1132-051A1，含量：98.7%)。空白人血漿來自健康受試者。

1.1.2儀器 LC-30AD 型 UPLC 系統(tǒng)(日本 Shimadzu 公司，配有 LC-30AD 型二元高壓梯度泵、CTO-20A 型柱溫箱、SIL-30AC 型自動進樣器)；LCMS-8050質(zhì)譜儀(日本 Shimadzu 公司)。BP211D 型分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司，感量：0.1/0.01 mg)；Elmasonic S150 實驗室應用型超聲波清洗器(德國 Elma公司)；Sorvall ST16R 型高速冷凍離心機(美國 Thermo Scientific 公司)；MIULAB MIX-25P 型渦旋儀(杭州米歐儀器有限公司)。

1.2受試者選擇 本文研究高脂高熱量飲食對氟康唑片藥動學影響，數(shù)據(jù)來源是研究項目“氟康唑片(150 mg)在健康受試者中隨機、開放、兩制劑、單次給藥、雙周期、交叉空腹/餐后狀態(tài)下的生物等效性試驗”的統(tǒng)計分析報告，本文僅對原試驗方案中參比藥物氟康唑片結(jié)果進行二次統(tǒng)計分析，試驗方案經(jīng)河北省人民醫(yī)院倫理委員會批準。共入組健康成年受試者45例，所有受試者均知曉本試驗的目的和要求，并簽署知情同意書。其中24例完成空腹試驗，男15例(62.5%)，女9例(37.5%)，年齡(30.2±6.09)歲，體質(zhì)量(64.29±8.52) kg，身高(168.50±9.10) cm，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(22.59±1.85) kg·(m2)-1；21例完成高脂餐后試驗，男12例(57.1%)，女9例(42.9%)，年齡(29.0±7.76)歲，體質(zhì)量(62.33±8.56) kg，身高(166.48±6.78) cm，BMI為(22.42±1.96) kg·(m2)-1。兩組年齡、身高、體質(zhì)量、BMI、男女比例等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2.1入選標準 ①年齡為≥18歲的男性和女性受試者；②男性體質(zhì)量≥50.0 kg，女性體質(zhì)量≥45.0 kg，BMI 19.0～26.0 kg·(m2)-1；③無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；④生命體征、體格檢查、臨床實驗室檢查、12導聯(lián)心電圖、胸部X線片，結(jié)果顯示正常或異常無臨床意義者；⑤受試者自篩選之日起未來6個月內(nèi)無妊娠計劃且自愿采取有效避孕措施。

1.2.2排除標準 ①過敏體質(zhì)，或有食物、藥物過敏史者，對氟康唑或?qū)ζ渌量╊愃幬?如酮康唑、伊曲康唑等)過敏者；易發(fā)生皮疹、蕁麻疹等過敏癥狀體質(zhì)者；②篩選前6個月內(nèi)有藥物濫用史或篩選前3個月內(nèi)使用過毒品；③篩選前3個月內(nèi)獻血包括成分血或大量失血(>400 mL)，接受輸血或使用血制品者；④體格檢查及血液分析、尿液分析、血生化、胸部X線片、心電圖檢查異常且具有臨床意義者。

1.3方法 本研究共開展空腹、餐后2個試驗。空腹試驗篩選60例，合格24例，隨機入組24例；餐后試驗篩選64例，合格21例，隨機入組21例(餐后試驗受試者篩選困難，合格21例，雖未滿足方案規(guī)定的24例，但病例數(shù)符合相關法規(guī)要求，故以21例受試者開展餐后試驗)。兩組資料見表1。分別服用氟康唑片150 mg，比較空腹條件下和高脂餐后氟康唑藥動學參數(shù)的變化。

根據(jù)《以藥動學參數(shù)為終點評價指標的化學藥物仿制藥人體生物等效性研究技術指導原則》[4]推薦餐后生物等效性研究采用高脂(提供食物中約50%的熱量)高熱量餐(3352～4190 kJ)(1 cal=4.19 J)。其中蛋白質(zhì)提供熱量約628.5 kJ，碳水化合物提供熱量約1047.5 kJ，脂肪提供熱量2095～2514 kJ。試驗中提供的食物可由含類似量的蛋白質(zhì)、碳水化合物、脂肪的食物替代。高脂高熱量餐如未吃完，需稱重，保證吃掉的食物熱量>3352 kJ。

空腹試驗24例受試者空腹過夜 >10 h，口服氟康唑片150 mg，溫水240 mL送服，給藥前1 h以及給藥后0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00，6.00，12.00，24.00，36.00，48.00，72.00，96.00，120.00 h采集前臂靜脈血4 mL，至EDTA-K2真空采血管中，輕柔顛倒混勻。餐后試驗于第 2 天早上服藥前 30 min 開始進食高脂(提供食物中的熱量約50%)高熱量餐(3352～4190 kJ)(高脂餐成分見表2)( 30 min 內(nèi)結(jié)束進餐)，進食高脂餐后30 min時服用氟康唑片150 mg，溫水 240 mL送服，在高脂餐后至給藥前以及給藥后0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50，3.00，6.00，12.00，24.00，36.00，48.00，72.00，96.00，120.00 h時采集前臂靜脈血4 mL至EDTA-K2真空采血管中，輕柔顛倒混勻。

空腹組和餐后組所采集的血樣在1 h內(nèi)4 ℃條件下離心(1700×g，10 min)，所有離心后血漿樣品將被分成2份，2 h內(nèi)存放于-60 ℃以下冰箱中，以供藥動學分析。

1.4測定方法

1.4.1色譜條件 色譜柱：GL Sciences Inc.，InertSustain C18(2.1 mm×50 mm，3 μm)；流動相A：0.1%甲酸，流動相B：100%乙腈，梯度洗脫，0.50～1.30 min，15.0%→50.0%B；>1.30～1.60 min，50.0%→95.0%B ；>1.60～2.50 min，95.0%B；>2.50～2.60 min，95.0%→15.0%B；>2.60～3.50 min，15.0%B，流速：0.400 mL·min-1；柱溫：40 ℃；分析時間為3.5 min；進樣量：5 μL。

1.4.2質(zhì)譜條件 離子源：大氣壓化學電離(APCI)源，正離子模式；監(jiān)測方式：MRM 模式；接口溫度：300 ℃；脫溶劑管溫度：250 ℃；加熱塊溫度：400 ℃；霧化器流量：3.00 L·min-1；加熱器流量：10.00 L·min-1；干燥器流量：10.00 L·min-1。氟康唑定量離子對為m/z307.10→220.10，駐留時間為100 ms，預四級桿偏轉(zhuǎn)電壓偏差Q1 Pre偏差-15.0 V，碰撞能量(CE)為17.0 eV，預四級桿偏轉(zhuǎn)電壓偏差Q3 Pre偏差-23.0 V；氟康唑-d4離子對為m/z311.10→223.10，駐留時間為 100 ms，Q1 Pre偏差-16.0 V，CE為18.0 eV，Q3 Pre偏差為-23.0 V。

1.4.3血漿樣品處理 樣品室溫下融化后，渦旋混勻；吸取樣品(校正標樣、質(zhì)控樣品或測試樣品)30.0 μL至96孔板中，對于雙空白樣品或QC0樣品，加入空白基質(zhì)30.0 μL；加入內(nèi)標溶液30.0 μL，對于雙空白樣品加入50%乙腈溶液30.0 μL；加入100%乙腈溶液180.0 μL，然后渦旋約10 min，在約4 ℃條件下1700×g離心10 min；轉(zhuǎn)移上清液30.0 μL至已加入30%乙腈溶液270.0 μL的96孔板中，渦旋5 min，待進樣。

表1 空腹試驗與餐后試驗健康受試者一般資料比較

表2 高脂餐成分

1.5統(tǒng)計學方法 用Phoenix WinNonlin 7.0版軟件的非房室分析方法計算空腹和高脂飲食后單次服用氟康唑片150 mg后藥動學參數(shù)，并對其做描述性統(tǒng)計分析。采用獨立樣本t檢驗和非參數(shù)檢驗比較空腹組和高脂餐組之間藥動學參數(shù)。

2 結(jié)果

2.1方法學考察 LC-MS/MS的方法學驗證由蘇州國辰生物科技股份有限公司的質(zhì)量保證部門根據(jù)實驗室標準化操作規(guī)程對方案、原始數(shù)據(jù)及報告進行監(jiān)督及審核，并且檢查或者審核實驗的實施與相應的標準化操作規(guī)程的符合性。

血漿中內(nèi)源性物質(zhì)不干擾氟康唑的測定。氟康唑的標準曲線線性范圍為 10～5000 ng·mL-1，氟康唑線性關系好，準確度及精密度結(jié)果見表3。血漿樣品中氟康唑提取回收率為95.0%～99.9%，內(nèi)標氟康唑-d4 的回收率為 91.7%。氟康唑在 3750～25 000 ng·mL-1濃度范圍內(nèi)，稀釋因子為 1：10時具有良好的稀釋可靠性。血漿樣本在-20 ℃條件下儲存28 d的穩(wěn)定性良好，-60 ℃條件下儲存28，90 d的穩(wěn)定性良好；血漿樣本在-60 ℃條件下經(jīng)歷5次冷凍-解凍循環(huán)的穩(wěn)定性良好；全血樣本于冰浴白光下放置2 h的穩(wěn)定性良好；基質(zhì)效應( 包括溶血基質(zhì)效應與高脂基質(zhì)效應) 、殘留均不影響血漿中氟康唑的準確定量。方法學驗證結(jié)果表明本方法可用于臨床試驗血漿樣品的分析。

2.2血藥濃度-時間曲線 健康受試者空腹和高脂飲食后口服氟康唑片150 mg后的平均血藥濃度-時間曲線，見圖1。

2.3藥動學參數(shù) 空腹和高脂飲食后氟康唑片150 mg后主要藥動學參數(shù)見表4。

表3 血漿中氟康唑的精密度和準確度

圖1 空腹或高脂飲食后健康受試者口服氟康唑后藥-時曲線圖

2.4飲食影響分析 空腹與高脂飲食后藥物動力學見表3。與空腹給藥比較，高脂飲食后氟康唑平均最大血藥濃度Cmax降低16.77%(P<0.01)，tmax推遲約2 h(P<0.01)，但AUC并未明顯改變(P>0.05)。說明食物對氟康唑的吸收速度有顯著影響，對吸收程度無影響。

2.6安全性評價 本研究45例受試者在空腹或高脂飲食條件下口服氟康唑片150 mg后，空腹組3例受試者發(fā)生不良事件3例次，其中尿上皮細胞增高1例次，轉(zhuǎn)歸為消失，上呼吸道感染1例次，轉(zhuǎn)歸為緩解，轉(zhuǎn)氨酶升高1例次，轉(zhuǎn)歸為穩(wěn)定。 餐后組2例受試者發(fā)生不良事件2例次，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高1例，轉(zhuǎn)歸為消失，尿白細胞陽性1例，轉(zhuǎn)歸為消失，所有不良事件嚴重程度均為1級，均未發(fā)生嚴重不良事件和導致退出試驗的不良事件。氟康唑可能對患者的肝功能有影響，服用藥物時需定期檢查肝功能。

表4 空腹和高脂飲食口服氟康唑片后藥動學參數(shù)

3 討論

LC-MS/MS適用于復雜基質(zhì)中微量藥物及代謝物的定量分析，在靈敏度、選擇性以及對藥物分析的適用性等方面有突出的優(yōu)勢，具有很高的精密度和準確性，是非常成熟的生物分析技術[5]。本研究采用 LC-MS/MS 方法對氟康唑血藥濃度進行定量分析，可實現(xiàn)氟康唑血漿分析的重現(xiàn)性和高靈敏度[6]。

氟康唑相關的常見不良事件為胃腸道癥狀包括惡心、腹痛、腹瀉，其次為皮疹、肝腎功能異常[7]，本研究出現(xiàn)的不良反應均為輕度，與文獻[8]報道一致，安全性較好。

食物可能改變藥物的生物利用度，F(xiàn)DA認為應采用高熱量、高脂肪的食物作為標準餐來考查飲食對藥動學的作用，以使食物的影響達到最大[9]。目前筆者未見國內(nèi)食物對氟康唑藥動學影響的相關報道，本研究分析顯示高脂高熱量飲食會使氟康唑的吸收延遲，峰濃度降低，但不影響藥物的吸收程度，分析原因可能是進食后，食物降低胃排空速率，使藥物到達小腸的時間延長，因此導致tmax延長，Cmax降低。此外，本研究與國外報道的氟康唑在高脂飲食后的藥動學參數(shù)變化稍有不同，國外報道餐后給藥與空腹給藥相比，Cmax、 AUC0-t和 AUC0-∞差別不大[10-11]，可能與種族差異有關；另外，本研究因是二次分析，非交叉設計，也可能是與國外報道數(shù)據(jù)有差異的原因之一。

氟康唑?qū)儆谶量╊愃幬铮鶕?jù)抗菌藥物藥動學/藥效學(PK/PD)特點其為時間依賴型長抗菌后效應藥物，評估其PK/PD指數(shù)主要是AUC0～24/最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration MIC)，高脂高熱量飲食后其體內(nèi)藥物暴露量并未改變，但吸收延遲，峰濃度降低，因此建議中國人群空腹服用氟康唑片。本研究結(jié)果可為氟康唑片在中國人群的安全合理用藥提供重要參考依據(jù)。