四倍體白掌新品種‘綠萌’的選育

周輝明　林輝鋒　莫智龍　陳昌銘　曹奕鴦　熊君

摘??要：白掌又名白鶴芋，原產于美洲和亞洲的熱帶地區，為天南星科白鶴芋屬多年生草本植物，是重要的觀花觀葉盆栽植物，當前市場主栽品種基本源于國外，多為人工雜交產生的后代。利用人工誘變技術對植物體細胞染色體組進行加倍的多倍體育種方法已應用于觀賞花卉新品種的選育，多倍體植株具有葉片增大、葉色加深、花朵變大、花色艷麗等優良性狀，與二倍體比較，目標性狀的觀賞價值更高。利用化學誘變產生多倍體是目前人工多倍體育種中常用的誘導方法，其具有操作簡易、突變率高、專一性強和適用性廣等特點。秋水仙素是目前主要采用的多倍體化學誘變劑，其誘導的效果與誘導時間、使用的濃度、處理的植物種類和器官等因素有關。本研究以白掌‘美酒’的組培苗愈傷組織為材料，優化四倍體白掌誘導方法，經秋水仙素浸泡處理后，開展試管苗形態學初篩、田間種植優選及株系比較試驗，同時進行染色體計數、氣孔大小和基因組大小比較、四倍體白掌新品種選育。結果表明：最佳誘導四倍體白掌的方式為0.10%秋水仙素浸泡處理7?d，其四倍體誘導率最高;選育出的四倍體白掌新品種‘綠萌’在設施大棚種植時自然花期為4—6月，與對照‘美酒’相比，葉片長和寬、葉柄長和直徑、葉鞘長、佛焰苞苞片長和寬、花梗長和直徑、肉穗花序長和直徑、氣孔長度和寬度、氣孔密度均差異極顯著，根尖染色體數為2=4X=60，是對照（2=2X=30）的2倍。流式細胞儀測定DNA顯示，‘綠萌’基因組大小為10.87?Gb，對照‘美酒’基因組大小為5.73?Gb，鑒定為四倍體白掌新品種。本研究利用人工化學誘變方法選育的四倍體白掌新品種‘綠萌’，具有葉片增厚、葉色加深、莖桿變粗、葉柄變粗、花梗變粗、肉穗花序變粗等特點，大大提高了白掌的觀賞價值。

關鍵詞：白掌;化學誘變;選育

中圖分類號：S682??????????文獻標識碼：A

?is an important ornamental foliage and?flower plant and is an perennial herb native to the tropics of America and Asia. At present， most of the main varieties in China are from abroad， and the offspring of artificial hybridization. The polyploid breeding method of doubling the chromosome sets of plant somatic cells by artificial mutation technology is often applied to ornamental flowers. The variety of selected polyploid plants showed excellent traits such as leaf enlargement， leaf color deepening， flower enlargement and gorgeous flower color， which could greatly improve the ornamental value of the target traits. Using chemical mutagens to induce polyploids is a common induction method in artificial mutagenesis technology because of its simple operation， high mutation rate， strong specificity and wide applicability.?Colchicine is a polyploid chemical mutagen mainly used in polyploid induction at present. The effect of colchicine on inducing polyploidy is related to induction time， concentration， plant species and organs. The callus of Meijiu was used as the material. The induction method of tetraploid was optimized. Morphological screening of seedlings ， field selection and comparison of plants regeneratrd were carried out. Furthermore， the number of chromosomes， stomatal size andgenome size identification were used for breeding and identified new varieties of . The results showed that the best way to induce tetraploid ?was soaking with 0.10% colchicine for 7 days. The flowering duration of the newly selected ‘Lvmeng’ was from April to June when it was planted in the greenhouse. Compared with the control ‘Meijiu’， there were significant differences in leaf length， leaf width， petiole length， petiole diameter， leaf sheath length， bracts length， bracts width， bracts stalk length， bracts stalk diameter， spadix length， spadix diameter， stomatal length， stomatal width and stomatal density at the flowering stage. The number of chromosomes was 2=4X=60， which was twice that of the control 2=2X=30. Flow cytometry DNA analysis showed that the genome size of ‘Lvmeng’ was 10.87 Gb， and that of the control ‘Meijiu’ was 5.73 Gb. It was identified as a new tetraploid species of . The new polyploid variety ‘Lvmeng’ was induced by artificial chemistry， with thickened leaves， deepened leaf color， thickened?stem， petiole， bracts stalk and spadix， which greatly improves?the ornamental value of .

; chemical mutagenesis; breeding

： 10.3969/j.issn.1000-2561.2022.05.011

白鶴芋（）又名白掌，原產于美洲和亞洲的熱帶地區，為天南星科（Araceae）白鶴芋屬（）多年生草本植物。其植株葉色翠綠，花形似鶴翹首，色澤潔白無暇，被視為“清白之花”，是重要的觀花觀葉盆栽植物，極具觀賞價值和經濟價值。當前，國內關于白掌新品種選育的研究報道較少，市場主栽品種基本源于國外，多為人工雜交產生的后代。雜交育種存在育種周期長、效率低等問題。利用人工誘變技術對植物體細胞染色體組進行加倍的多倍體育種方法已常應用于觀賞花卉，選育的植株表現出葉片增大、葉色加深、花朵變大、花色艷麗等優良性狀，大大提高了目標性狀的觀賞價值。利用化學誘變劑誘變產生多倍體是目前人工多倍體育種常用的誘導方法，具有操作簡易、突變率高、專一性強和適用性廣等特點。秋水仙素是目前主要采用的誘變劑，誘導試驗材料通常選取種子、頂芽、側芽以及組織培養中的愈傷組織、原球莖等分裂旺盛的器官或組織，秋水仙素誘導的效果與誘導時間、使用的濃度、培養的溫度、處理的植物種類和器官等因素有關。本研究以主栽白掌‘美酒’愈傷組織為材料，通過秋水仙素化學誘變結合試管苗形態學初篩、田間種植優選及株系比較試驗后，進行了染色體計數、氣孔大小和基因組大小比較，選育出了四倍體白掌新品種，豐富了白掌種質資源，滿足市場需求。

??材料與方法

?材料

供試材料為三明市農業科學研究院花卉研究所白掌‘美酒’組培苗和成品苗。

??方法

1.2.1 ?多倍體白掌誘導方法優化??2012年4月以白掌‘美酒’健壯二代苗的莖尖誘導的愈傷組織為供試材料，設計不同濃度的秋水仙素（0、0.06%、0.08%、0.1%）、不同處理時間（7、14、21?d）來優化四倍體誘導方法。將秋水仙素處理后的愈傷組織接種于分化培養基中，45?d后統計生長狀況，計算成活率，成活率=成活愈傷組織數/處理愈傷組織數×100%。將分化的種苗進行生根培養，待長出根后，采用根尖壓片法進行多倍體鑒定，統計分化植株數、變異植株數和四倍體植株數，計算變異率和四倍體誘導率，變異率=變異植株數/分化植株數×100%，四倍體誘導率=四倍體植株數/變異植株數×100%。

1.2.2 ?選育白掌四倍體??以白掌‘美酒’健壯二代苗的莖尖誘導愈傷組織為供試材料，經添加0.1%化學誘變劑秋水仙素的液體誘導培養基7?d搖床振蕩處理，然后將處理的愈傷組織接種于分化培養基，待愈傷組織分化后，從41株分化苗中發現葉片寬大肥厚、色澤加深、莖稈粗壯的變異株23株，通過根尖染色體檢測，發現了其中的12株為四倍體植株，選取一個四倍體單株進行少量組培快繁和栽培。經農藝性狀觀察發現，其莖稈粗壯，葉片寬大肥厚、富有質感，佛焰苞厚實、白色且富有光澤，花高于葉，花梗直徑較粗，符合多倍體巨大性特征，命名為‘MJ-1’。2018年，將‘MJ-1’和對照‘美酒’的形態學特征進行比較、根尖染色體、氣孔大小和分子檢測，綜合評價判定為四倍體白掌新品種，定名為‘綠萌’。

1.2.3??形態學特征比較??分別隨機抽取10盆‘綠萌’和‘美酒’，測定植株盛花時的葉片長、葉片寬、葉柄長、葉柄直徑、葉鞘長、葉片數、佛焰苞苞片長、佛焰苞苞片寬、花梗長、花梗直徑、肉穗花序長、肉穗花序直徑、花色等形態學特征，統計重復3次，用Excel軟件進行數據統計和分析。

1.2.4??葉片氣孔大小測定??早上9：00—11：00，用指甲油（思姿戀環保護甲亮油）涂抹白掌植株成熟葉片的背部，2?min后，用鑷子輕輕地撕取葉片的下表面組織，置于載玻片上，蓋上蓋玻片（注意保證組織的平整放置），在20×10倍鏡下隨機觀察10個視野，重復3次，統計各視野的氣孔數，用標準的顯微鏡測微尺測量氣孔長度。氣孔密度計算為：氣孔密度（個/mm）=各視野中氣孔數（個）/視野的面積（mm）。

1.2.5??根尖染色體檢測??切取白掌根尖0.4～?0.8?cm，置于2?mL試管中，加入1.5?mL已配制好的0.002?mol/L濃度的8-羥基喹啉，16℃黑暗處理6?h，期間每隔2?h換1次0.002?mol/L的8-羥基喹啉處理液。將預處理后的根尖用清水洗凈，加入新鮮配制的卡諾固定液（95%乙醇∶冰醋酸=?3∶1），于4℃冰箱放置18～24?h;次日，棄除卡諾固定液，用蒸餾水漂洗根系5～10?min，用刀片切取根尖生長點，浸泡于含2%纖維素酶和1%果膠酶的液體中，37℃溫浴1～2?h后緩慢加入75%乙醇，輕輕吸出液體，緩慢加入醋酸少許，之后將根尖生長點取出并置于載玻片上，用玻棒搗碎根尖使根尖緊壓載玻片，蘸取已過濾的0.025%甲基紫1～2滴于根尖搗碎區，染色2～3?min，蓋上蓋玻片，用濾紙吸取多余的染色液，用普通光學顯微鏡進行鏡檢和拍照，每個品種選取3株作根尖取樣，每株觀察清晰可辨的細胞10個及以上，以確定染色體數目。

1.2.6??流式細胞儀測定基因組大小??取白掌新鮮葉片1?g，置于0.8?mL預冷的細胞核解離液（45?mmol/L MgCl·6HO，20?mmol/L MOPS，30?mmol/L檸檬酸鈉，1%（/）?PVP40，0.2% （/）Tritonx-100，10?mmol/L NaEDTA，20?μL/mL β-巰基乙醇，pH?7.5）中，用鋒利的刀片將組織迅速切碎，冰上靜置10?min，用400目濾網過濾，濾液為細胞核懸浮液。向細胞核懸液中加入預冷的含50?μg/mL RNAase的碘化丙啶（propidium iodide，PI）（50?μg/mL）染液100?μL，置于冰上避光染色0.5～1?h。以番茄為內參，利用BD FACScalibur流式細胞儀對染色后的細胞核懸浮液樣品上機檢測，采用488?nm藍光激發，檢測碘化丙啶的發射光熒光強度，每次檢測收集10?000個顆粒。變異系數（）控制在5%以內。使用Modifit?3.0分析軟件作圖分析，試驗重復3次。

本試驗所用培養基配方如下：

液體誘導多倍體培養基：MS+6-BA 1.0?mg/L+?NAA 0.1?mg/L+白糖30?;g/L+秋水仙素，pH 5.6。

組培分化培養基：MS+6-BA 1.0?mg/L+NAA 0.1?mg/L+白糖30?g/L+瓊脂4.5?g/L，pH 5.6。

組培生根培養基：1/2 MS+NAA 0.3?mg/L+?0.5?g/L活性炭+白糖20g/L+瓊脂4.5?g/L，pH 5.6。

??結果與分析

?不同濃度秋水仙素和不同處理時間對‘美酒’多倍體誘導的影響

從表1可見，相同濃度秋水仙素下，處理時間越長對愈傷組織毒害作用越大，愈傷組織成活率越低;0.06%～0.10%范圍內，秋水仙素濃度越高，變異率和四倍體誘導率越高，對愈傷組織毒害作用也越大;0.10%秋水仙素處理7?d，變異率達60%，四倍體誘導率為50%，變異率和四倍體誘導率均比其他濃度和處理時間高。

??形態學特征比較

白掌‘綠萌’與對照‘美酒’相比，具多倍體的植株變壯（圖1A～圖1C）、葉片變大（圖1D）、肉穗花序變粗（圖1E）等特征。從表2可見，‘綠萌’葉片長度、葉柄長度、葉鞘長、佛焰苞苞片長度、佛焰苞苞片寬度、花梗長度均小于對照‘美酒’，方差分析顯示差異極顯著;‘綠萌’葉片寬度、葉柄直徑、葉片數、花梗直徑、肉穗花序長度、肉穗花序直徑均大于對照‘美酒’，方差分析顯示，除葉片數之外，其他特征差異極顯著。‘綠萌’在植株形態學上具多倍體的葉片增厚、葉色加深、莖桿變粗、葉柄變粗、苞梗變粗、肉穗花序變粗等特征。

?氣孔大小和密度比較

白掌新品種‘綠萌’與對照‘美酒’的氣孔大小和密度比較見表3和圖2，‘綠萌’的氣孔長度為41.72?μm、氣孔寬度為25.93?μm，大于對照‘美酒’的氣孔長度和寬度，方差分析顯示差異極顯著;‘綠萌’的氣孔密度為15.50個/mm，比對照‘美酒’的氣孔密度少，方差分析顯示差異極顯著。

??細胞學水平比較

本研究觀測了10個清晰視野下的染色體狀態，重復3次，結果顯示對照‘美酒’的二倍體染色體數為2=2X=30（圖3A），‘綠萌’的染色體數為2=4X=60（圖3B）。‘綠萌’的染色體數為對照‘美酒’的2倍，是‘美酒’的四倍體白掌。

?基因組大小比較

通過流式細胞儀對細胞DNA含量測定和分析（圖4），‘綠萌’的DNA含量為10.87?Gb，‘美酒’的DNA含量為5.73?Gb，‘綠萌’基因組大小約為‘美酒’的2倍，表明白掌‘綠萌’為純四倍體。

??討論

利用人工化學誘導劑秋水仙素結合組織培養誘導植物多倍體的應用已十分廣泛，在紅掌、大花蕙蘭、非洲菊、萱草、百合、杜鵑等園藝花卉中已有成功報道，誘導材料的類型包括愈傷組織、原球莖、莖尖、芽體、種子等，不同植物種類對誘導材料的類型選擇不同，且處理濃度也存在差異。在白掌的化學誘變選育上，鄭云飛利用秋水仙素處理多個品種白掌的葉片、愈傷組織、組培苗的莖尖誘導多倍體，并通過流式細胞儀進行多倍體的鑒定，結果僅有以組培苗的莖尖成功誘導獲得、‘Coddy color’、?‘Bright’、‘Parrish’等4個品種的多倍體植株，這可能與葉片誘導的愈傷組織在分化過程中易褐變和秋水仙素對愈傷組織的毒害作用有關。本研究優化了多倍體白掌誘導的方法，帶芽的愈傷組織（來源于健壯二代試管苗的莖尖誘導），分化能力強，試驗重復性較高，是誘導四倍體的好材料;高濃度秋水仙素可提高的四倍體誘導率，但隨著處理時間的延長，愈傷組織成活率越低。因此，最佳誘導四倍體白掌處理為0.10%秋水仙素浸泡處理7?d，其四倍體誘導率最高，應用于白掌四倍體新品種的選育。

利用染色體計數結合形態學和細胞學水平的差異是植物倍性鑒定的可靠方法。形態學的差異是最簡單直觀的鑒定方法，可通過莖稈粗度、葉片厚度、植株形態等特征的初篩提高倍性鑒定的效率。根尖染色壓片的好壞直接影響染色體鑒定的結果，本研究參考了張志勝等的壓片方法加以改進，通過混合纖維素酶和果膠酶進行細胞壁的溶解和應用低毒、低成本的甲基紫進行染色，建立了適合的白掌染色體分析的改良壓片法。應用此方法具重復性好、分辨率高、效率高等優點，為白掌的倍性育種提供了可靠的鑒定方法。

流式細胞術作為一項高效的檢測技術，廣泛應用于檢測植物細胞的核DNA含量及染色體倍性。本研究參考了田新民等方法，采用生長中的白掌新鮮葉片，選取PI染料為檢測細胞核DNA含量的探針，以番茄為內參，利用BD FACScalibur流式細胞儀對染色后的細胞核懸浮液樣品上機檢測，采用488?nm藍光激發，檢測碘化丙啶的發射光熒光強度，試驗結果可靠穩定。

本研究采用以白掌‘美酒’的組培愈傷組織為材料，用0.10%秋水仙素浸泡處理7?d后，經試管苗形態學、細胞學的初篩，染色體計數法及基因組大小的比較鑒定，選育出白掌四倍體新品種‘綠萌’，具多倍葉片增厚、葉色加深、莖桿變粗、葉柄變粗、花梗變粗、肉穗花序變粗等形態特征，大大提高了白掌的觀賞價值，豐富了白掌種質資源。

參考文獻

[1]?戴樺均， 徐維杰， 廖飛雄. 不同白鶴芋種/品種開花特性和形態的觀察[C]//中國園藝學會觀賞園藝專業委員會.?中國園藝學會觀賞園藝專業委員會2012年學術年會論文集. 廣州： 中國園藝學會， 2012： 148-153.DAI H J， XU W J， LIAO F X. An observation of flowering characteristics and spadix morphology of ?species/varieties[C]//Ornamental Horticulture Committee of Chinese Society for ?Horticultural Science. Proceedings of 2012 Academic Annual Meeting of Ornamental Horticulture Committee of Chinese Society for Horticultural Science. ?Guangzhou： Chinese Society for Horticultural Science， 2012： 148-153. （in Chinese）

[2]?周英彪， 彭卓倫， 蔣雄輝，?王 ?奎，?魏雪琴，?肖淑惠. 白掌花粉活力檢測及其超低溫保存研究[J]. 中國農學通報， 2013， 29（1）： 113-117.ZHOU Y?B， PENG Z?L，?JIANG?X?H，?WANG K， WEI X Q， XIAO S H. Study on vitality and cryopreservation of 20 ?pollen[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin， 2013， 29（1）：?113-117.?（in Chinese）

[3]?宋 ?平， 王學鳳， 蔡 ?明， 任翔翔，?潘會堂，?張其翔. 秋水仙素誘導觀賞植物多倍體研究進展[J]. 湖北農業科學， 2009， 48（6）： 1510-1513.SONG P， WANG X?F. CAI M，?REN X X， PAN H T， ZHANG Q X. Research progress of polyploidy induction by colchicine in ornamental plants[J]. Hubei?Agricultural Sciences， 2009， 48（6）：?1510-1513.?（in Chinese）

[4]?尹翠翠， 張 ?燕， 張景華， 陳瑤瑤，?王廣東. 秋水仙素誘導雜交蘭四倍體及倍性鑒定[J]. 核農學報， 2010， 24（3）： 518-521.YI C C， ZHANG Y， ZHANG J H， CHEN Y Y， WANG G D. Tetraploid induction by colchicine and identification in ?interspecific hybrids[J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences， 2010， 24（3）： 518-521. （in Chinese）

[5]?宋 ?蓮， 楊俊旭， 劉 ?丹， 李枝林，?王玉英. 墨蘭‘綠墨素’×大花蕙蘭‘世界和平’F代多倍體誘導初報[J]. 廣西植物， 2018， 38（2）： 188-194.SONG L， YANG J?X， LIU D，?LI Z L， WANG Y Y. Polyploid induction in ??‘Lvmosu’×?‘Shijieheping’ F?generation[J]. Guihaia， 2018， 38（2）：?188-194.?（in Chinese）

[6]?胡瑞陽， 段紅靜， 林華忠，?吳 ?博，?納 ?靜，?方祿明，?余小龍，?孫宇涵，?李 ?云. 杉木多倍體變異苗誘導及倍性鑒定[J]. 核農學報， 2016， 30（8）： 1491-1497.HU R Y， DUAN H J， LIN H Z， WU B， NA J， FANG L M， YU X L， SUN Y H， LI Y. Polyploid mutant seedlings induction and ploidy identification of Chinese?fir[J]. Journal of Nuclear Agricultural Sciences，?2016， 30（8）： 1491-1497. （in Chinese）

[7]?王艷英， 鄧傳遠， 趙曉明， 李海平. 秋水仙素處理對連翹生長的影響[J]. 蚌埠學院學報， 2014， 3（1）： 20-23.WANG Y Y， DENG C Y， ZHAO X M， LI H P. The effect of colchicines on the growth of [J]. Journal of Bengbu College， 2014， 3（1）： 20-23. （in Chinese）

[8]?鄧 ?櫻， 周 ?曄， 陳繼敏. 秋水仙素誘導蘭屬‘素心黃’多倍體的方法研究[J]. 亞熱帶植物科學， 2008， 37（2）： 38-40.DENG Y， ZHOU H， CHEN J M. Methods of ployplois induction of ?with colchicine[J]. Subtropical Plant Science，?2008， 37（2）：?38-40. （in Chinese）

[9]?張志勝， 黎揚輝， 姜 ?蕾， 李 ?遠，?王朱瑩，?夏 ?晴，?易懋升. 紅掌四倍體的離體誘導及其鑒定[J]. 園藝學報， 2007， 34（3）： 729-734.ZHANG Z S， LI Y H， JIANG L， LI Y， WANG Z Y， XIA Q， YI M S. ?tetraplois induction and its identification in [J]. Acta Horticulturae Sinica，?2007， 34（3）：?729-734. （in Chinese）

[10]?王木桂， 曾瑞珍， 謝 ?利， 黎揚輝，?曾飛燕，?杜寶貴，?張志勝. 大花蕙蘭四倍體的離體誘導和鑒定[J]. 西北植物學報， 2010， 30（1）： 56-62.WANG M G， ZENG R Z， XIE L， LI Y H， ZENG F Y， DU B G， ZHANG Z S. ?induction and its identification of tetraploid [J]. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica， 2010， 30（1）：?56-62. （in Chinese）

[11]?李 ?涵， 鄢 ?波， 張 ?婷， 蔣亞蓮，?張 ?顥，?于麗霞，?李紳崇. 切花非洲菊多倍體誘變初報[J]. 園藝學報， 2009， 36（4）： 605-610.LI H， YAN B， ZHANG T， JIANG Y L， ZHANG H， YU L X， LI K C. Preliminary studies on polyploidy mutation of cut flower ?bolus[J]. Acta Horticulturae Sinica，?2009， 36（4）：?605-610. （in Chinese）

[12]?武 ?江， 李 ?麗， 曹冬梅， 左力翔，?王云山. 萱草多倍體誘導及其鑒定[J]. 山西農業科學， 2018， 46（5）： 687-691， 700.WU J， LI L， CAO D M， ZUO L X， WANG Y S. Polyploidy induction and identification in [J]. Journal of Shanxi Agricultural Sciences， 2018， 46（5）： 687-691， 700. （in Chinese）

[13]?張運峰， 胡 ?芬. 紅掌組培再生植株中表型突變體的ISSR分析[J]. 北方園藝， 2014， 38（21）： 101-104.ZHANG Y?F，?HU F. ISSR analysis of phenotypic variants in tissue culturing regeneration plants of [J].?Northern Horticulture， 2014， 38（21）： 101-104. （in Chinese）

[14]?彭綠春， 陶俊鋒， 段修安， 宋 ?杰，?解瑋佳，?關文靈，?李世峰. 腋花杜鵑多倍體誘導和鑒定[J]. 核農學報， 2018， 32（2）： 257-265.PENG L?C， TAO J?F， DUAN X?A，?SONG J， XIE W J， GUAN W L， LI S F. Polyploidy induction and identification of franch[J].?Journal of Nuclear Agricultural Sciences， 2018， 32（2）： 257-265.?（in Chinese）

[15]?鄭云飛.?秋水仙素誘導白掌多倍體及其鑒定[D]. 南昌： 江西農業大學， 2015.ZHENG Y F. Study on polyloid inducement of?Spathiphyllum?with colchicine[D]. Nanchang： Jiangxi Agricultural University， 2015. （in Chinese）

[16]?彭 ?靜， 魏岳榮， 熊興華. 植物多倍體育種研究進展[J]. 中國農學通報， 2010， 26（11）： 45-49.PENG J， WEI?Y?R，?XIONG?X?H. Polyploid induction of plant research summary[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin， 2010， 26（11）： 45-49.?（in Chinese）

[17]?田新民， 周香艷， 弓 ?娜. 流式細胞術在植物學研究中的應用——檢測植物核DNA含量和倍性水平[J]. 中國農學通報， 2011， 27（9）： 21-27.TIAN X M， ZHOU X Y， GONG N. Applications?of?flow cytometryin plant research-analysis of nuclear dna content and ploidy level in plant cells[J]. Chinese Agricultural Science Bulletin， 2011， 27（9）： 21-27. （in Chinese）