p53、增殖細胞核抗原在原發性肝癌中的表達情況及與超聲圖像特征的關系

徐珂珂，王軍梅，郭亞南#

鄭州市第六人民醫院（河南省傳染病醫院）1超聲醫學科，2中西醫肝病科，鄭州 450000

肝癌根據組織來源、生物學特性分為原發性肝癌和繼發性肝癌。原發性肝癌是常見惡性腫瘤之一，在中國發病率居第4位，已嚴重影響人們的生命安全[1]。在臨床中，B超檢查因可明確顯示原發性肝癌病變部位、大小、與膽道及血管的關系及有無瘤栓存在等優勢，是臨床早期診斷原發性肝癌的有效手段。由于其病因及發病機制尚未明確，且早期缺乏典型癥狀，為進一步提高原發性肝癌診斷準確率，有學者發現超聲圖像與免疫組化檢測技術相結合可發揮較好作用，因此，發現原發性肝癌與多生物學因子的相關性對提高診斷準確率具有一定幫助[2]。p53作為一種腫瘤抑制蛋白和轉錄因子，與腫瘤發生、增殖、凋亡具有密切聯系；增殖細胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）因其合成情況與細胞DNA關系密切，作用于細胞增殖啟動，是反映腫瘤細胞增殖狀況的重要指標[3]。基于此，本研究探討p53、PCNA在原發性肝癌中的表達情況及與超聲圖像特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年9月至2021年2月鄭州市第六人民醫院收治的原發性肝癌患者的病歷資料。納入標準：①臨床資料完整；②經病理證實為原發性肝癌；③凝血功能正常。排除標準：①合并其他部位腫瘤；②非首次手術治療；③妊娠期或哺乳期女性。根據納入、排除標準，共納入65例原發性肝癌患者，其中男48例，女17例；年齡32～74歲，平均（47.16±16.09）歲；Edmondson肝癌分級：Ⅰ級11例，Ⅱ級17例，Ⅲ級23例，Ⅳ級14例。取65例原發性肝癌患者的肝癌組織及癌旁組織（距腫瘤＞3 cm）。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化檢測采用免疫組化法檢測p53、PCNA，將石蠟包埋的組織進行常規切片操作。進行免疫組化染色，染色方法采用鏈霉素卵白素生物素過氧化酶復合物法，采用鼠抗PCNA（PC10）單克隆抗體、鼠抗人p53蛋白免疫組化單克隆抗體。PCNA以肝癌陽性石蠟切片為陽性對照，p53以肝癌組織準確結果為陽性對照；陰性對照為磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）。結果判定：PCNA，細胞呈清晰棕色為陽性細胞；p53，細胞核內有棕黃色顆粒為陽性細胞。參考標準：PCNA隨機選取50倍鏡視野，計數約1000個細胞，若陽性細胞比例≥30%判定為陽性，反之為陰性；p53隨機選取40倍鏡視野，計數約1000個細胞，若陽性細胞比例≥10%判定為陽性，反之為陰性。

1.2.2 超聲檢查首先叮囑患者側臥或仰臥后充分暴露腹部，檢查前排空膀胱。首先應用彩色超聲波診斷儀在探頭上涂抹耦合劑，凸陣探頭頻率3.8 MHz，觀察肝臟內腫塊大小、形狀、回聲強度等，利用常規模式顯示門靜脈，便于查看有無瘤栓存在或淋巴結是否轉移。其次應用彩色多普勒超聲（color Doppler flow imaging，CDFI）查看血流情況，最后使用三維彩色血管能量成像（three-dimensional color power angiography，3D-CPA）查看腫瘤區域血供情況（評定標準：CDFI分為0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ4型，3D-CPA分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3型[4]），超聲檢查完后，由2名具有中級職稱的影像科醫師對原發性肝癌圖像進行分析，另選取2名醫師詳細記錄并準確判斷其大小、位置、分型等。

1.3 觀察指標

對比不同組織中p53、PCNA表達情況，分析原發性肝癌超聲圖像特征與p53、PCNA的關系，分析原發性肝癌CDFI及3D-CPA圖像與p53、PCNA的關系。

1.4 統計學方法

采用SPSS 28.0軟件進行統計分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示；計數資料以例數及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗；以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 PCNA、 p53表達情況的比較

原發性肝癌組織中PCNA、p53陽性表達率均明顯高于癌旁組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 原發性肝癌組織及癌旁組織中 p53、PCNA表達情況的比較[ n（%）]

2.2 超聲圖像表現

65例患者超聲圖像特征顯示，肝臟形態呈不規則，肝內光點密集且略粗，肝內邊緣欠光整，分布不均勻，血管走向不清晰；內部回聲增強，可見弱回聲和強回聲；CDFI檢查可顯示癌灶的光團周邊，光團內可見到豐富的動脈血流信號。

2.3 二維超聲圖像特征與 p53、PCNA表達的關系

不同p53、PCNA表達情況的原發性肝癌患者腫瘤數量、邊界、均勻性、壞死、轉移情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同 p53、PCNA表達情況原發性肝癌患者超聲圖像特征的比較

2.4 不同CDFI分型原發性肝癌患者肝癌組織中p 53、PCNA表達情況的比較

不同CDFI分型原發性肝癌患者p53、PCNA表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）；且Ⅲ型患者p53、PCNA陽性表達率均高于Ⅰ型，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表3）

表3 不同CDFI分型原發性肝癌患者肝癌組織中 p53、PCNA表達情況的比較[ n（%）]

2.5 不同 3D-CPA分型原發性肝癌患者肝癌組織中 p53、PCNA表達情況的比較

不同3D-CPA分型原發性肝癌患者p53、PCNA表達情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.01）；且Ⅱ、Ⅲ型患者p53、PCNA陽性表達率均高于Ⅰ型，差異均有統計學意義（P＜0.05）。（表4）

表4 不同 3D-CPA分型原發性肝癌患者肝癌組織中 p53、PCNA表達情況的比較[ n（%）]

3 討論

原發性肝癌主要臨床癥狀為肝區疼痛、惡心嘔吐、消瘦乏力等，為進一步提高患者診斷率和治療效果，了解病因機制是必要基礎，隨之探尋其與各種生物因子的關系是關鍵步驟[5]。在臨床中，影像學檢查一直是分析生物因子如p53、PCNA表達情況與原發性肝癌發生發展、預后關系等的有效方法之一。p53與原發性肝癌分化程度密切相關；而PCNA位于G1晚期、S期細胞核中，是評價腫瘤惡性程度的一項指標[6-7]。研究發現，重新生長的腫瘤血管分布、血供特點的特殊性可能是引起原發性肝癌轉移的主要因素，且可應用于該病診斷和治療[8]。本研究發現，原發性肝癌組織中PCNA、p53陽性表達率均明顯高于癌旁組織，說明p53、PCNA陽性表達率的高低可能與原發性肝癌的發生、發展息息相關。

p53是一種腫瘤抑制因子，具有阻止DNA突變、受損細胞分裂及通過轉錄調控細胞傳輸凋亡信息等作用，達到阻止腫瘤形成的目的[9]。臨床研究表明，惡性腫瘤中大部分患者出現p53基因突變，為腫瘤細胞選擇性提供優勢，使其逃避細胞周期檢查點，并能夠在正常細胞無法增殖的情況下為它提供增殖條件，說明p53表達高低與原發性肝癌存在較大關系[10]。腫瘤細胞具有較強的增殖活性，然而PCNA可作為評價腫瘤細胞增殖狀況的重要指標[11]。研究發現，PCNA是細胞增殖相關的核內因子，與肺癌分化程度密切相關，分化程度越低的肺癌其PCNA表達越高，為PCNA作為肺癌惡性程度、分化程度評估指標奠定基礎[12-13]。本研究中，不同p53、PCNA表達情況的原發性肝癌患者腫瘤數量、邊界、均勻性、壞死、轉移情況比較，差異均有統計學意義（P＜0.05），說明p53、PCNA在原發性肝癌的發展中具有一定推動作用，而p53表達出現明顯增高，可能與p53本身可刺激細胞增長的特點有關。

為進一步推斷p53、PCNA與超聲圖像特征的關系，本研究采用CDFI、3D-CPA進行深入探討。CDFI利用血流成像的特點，對判斷血流方向、速度、性質有重要意義；3D-CPA作為一種新型彩色多普勒成像技術，能在一定程度上加強反映腫瘤增殖情況，提高血流檢測的靈敏度等[14-15]。陳亮等[16]發現，p53、PCNA表達水平與CDFI、3D-CPA圖像特征有關。本研究中，不同CDFI、3D-CPA分型的患者p53、PCNA表達情況不同，其分型越高，p53、PCNA表達越高，說明p53、PCNA水平越高，原發性肝癌分型越高，病情越嚴重，其原因可能是腫瘤細胞不斷擴散、生長，血管也隨之生長，同時在此過程中，p53基因突變，PCNA被動激活。

綜上所述，p53、PCNA與原發性肝癌超聲圖像特征具有一定關系，有利于原發性肝癌的診斷及治療。