晚期糖基化終末產物在幽門螺桿菌感染所致胃癌患者中的情況及其與患者預后的相關性

褚云香 王東盛 賈志偉 金 麟 劉曉川

(應急總醫(yī)院消化內科，北京市 100028，電子郵箱：xwt998112@163.com)

胃癌是一種起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，好發(fā)于50歲以上人群，能發(fā)生在胃的任何部位，多數患者發(fā)生在胃竇部、胃大彎、胃小彎等[1]。胃癌病因復雜，目前普遍認為與幽門螺桿菌(Helicobacterpylori，H.pylori)感染、地域環(huán)境及飲食因素等有關，而在上述原因中H.pylori感染占比較高[2]。研究表明，我國胃癌高發(fā)地區(qū)成人H.pylori感染率在60.0%以上，主要是由于持續(xù)的H.pylori感染能促使體內的硝酸鹽轉化成具有致癌作用的亞硝酸鹽和亞硝胺等[3]。同時，H.pylori感染還能引起胃黏膜慢性炎癥，加劇黏膜上皮細胞過度增殖[4]；此外，H.pylori的毒性產物CagA、VacA等也具有明顯的促癌作用[5]。晚期糖基化終末產物(advanced glycation end products，AGE)是蛋白質、氨基酸、脂類、核酸等物質的游離氨基，與還原糖的羰基經過縮合、重排、裂解等一系列反應后產生的小骨窗的終末產物，能與氨基酸集團形成穩(wěn)定的交聯(lián)結構，不易被酶降解[6]。臨床研究表明，AGE與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關，能直接參與腫瘤的發(fā)生和生物學行為[7]，但關于其對患者預后影響的研究較少。本研究探討AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中的表達水平及其與患者預后的相關性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2015年1月至2019年1月我院收治的87例H.pylori感染所致胃癌患者作為研究對象。納入標準：(1)均符合H.pylori感染所致胃癌診斷標準[8]，均經過手術病理組織檢查確診；(2)均行手術治療，手術過程中取病灶組織及癌旁組織；(3)均完成AGE測定。排除標準：(1)合并精神異常、血液系統(tǒng)疾病、器質性疾病者；(2)凝血異常或伴有自身免疫系統(tǒng)疾病者；(3)合并其他部位惡性腫瘤、嚴重損傷患者。其中男性45例，女性42例；年齡35～78(53.26±6.78)歲；病灶直徑4～9(6.15±1.12)cm；腫瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期47例，Ⅲ～Ⅳ期40例；Lauren分型：腸型33例，彌漫型54例；分化類型：低分化31例，中分化30例，高分化26例；淋巴結轉移：轉移37例，未轉移50例；浸潤深度：T1～T2期48例，T3～T4期39例。本研究獲得本院醫(yī)學倫理委員會批準實施，所有患者及家屬均對本研究知情并簽署同意書。

1.2 標本采集及檢測方法

1.2.1 標本的處理及AGE測定：所有患者均在術中分別取病灶組織、癌旁組織(距離病灶≥3 cm)3～5 g，采用免疫組織化學法檢測病灶組織及癌旁組織中AGE蛋白表達陽性率。向制備好的切片中加入濃度為3%的甲醇雙氧水，持續(xù)處理10 min，封閉內源性過氧化物酶，磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffered saline，PBS)連續(xù)洗滌3次，5 min/次；加入PBS調整溶液pH值為6.0，加入檸檬酸鹽緩沖液5 mL，緩慢加熱至80℃，完成缺損蛋白修復;向標本中加入山羊血清(南京生航生物技術有限公司，生產批號：20175715)3 mL封閉20 min，加入AGE蛋白一抗(北京中杉金橋生物技術有限公司，生產批號：20197535；抗體稀釋倍數1 ∶8)5 mL孵育20 min，PBS洗滌后緩慢加熱至100℃，并加入AGE蛋白二抗(北京中杉金橋生物技術有限公司，生產批號：20194715；抗體稀釋倍數1 ∶10)，在濕盒內孵育30 min，37℃下加入PBS洗滌3次，2 min/次，利用二氨基聯(lián)苯胺顯色后在顯微鏡(Olympus公司)下拍照[9]。

1.2.2 陽性細胞判斷標準：將切片置于倒置顯微鏡下，觀察結構完整、清晰且定位較為明確的細胞。細胞漿內呈棕黃色，且顏色明顯高于背景為陽性細胞[10]。

1.3 觀察指標 (1)AGE的表達陽性率。查閱患者病例資料，記錄不同性別、年齡、腫瘤大小、分化類型、腫瘤分期、淋巴結轉移、浸潤深度、Lauren分型的患者的病灶組織AGE表達陽性率。(2)AGE與患者預后的相關性。術后對患者進行12個月的隨訪，隨訪方式包括門診隨訪、電話隨訪及上門隨訪，每1～3個月隨訪1次，計算病灶組織AGE表達陽性患者與病灶組織AGE表達陰性患者的生存期，分析AGE與患者生存期的相關性。

1.4 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計分析。計數資料以例數和百分比表示，組間比較采用χ2檢驗；計量資料以(x±s)表示，組間比較采用成組設計兩樣本t檢驗，組內比較采用配對t檢驗；采用Kaplan-Meier法進行生存分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 AGE蛋白在胃癌病灶組織及癌旁組織中表達陽性率的比較H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織的AGE蛋白表達陽性率為55.17%(48/87)，高于癌旁組織的4.60%(4/87)(χ2=53.100，P<0.001)。免疫組織化學結果顯示，AGE蛋白在H.pylori感染所致胃癌患者的病灶組織中呈棕黃色，顏色相對較深，而在癌旁組織中顏色較淺或不表達。見表1和圖1。

圖1 AGE蛋白在胃癌不同組織中的表達(免疫組化染色，×200)

2.2 不同臨床病理特征的H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中AGE表達陽性率的比較H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中，AGE蛋白表達陽性率與性別、年齡、浸潤深度、Lauren分型均無關(均P>0.05)，而與腫瘤大小、分化類型、腫瘤分期、淋巴結轉移有關(均P<0.05)，腫瘤直徑≥5 cm、低中分化型、腫瘤Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴轉移的患者病灶組織中AGE表達陽性率更高，見表1。

表1 不同臨床病理特征的H. pylori感染所致胃癌患者病灶組織中AGE表達陽性率的比較[n(%)]

2.3 AGE的表達情況與患者預后的相關性 術后隨訪12個月，病灶組織中AGE蛋白表達陽性的H.pylori感染所致胃癌患者的中位生存期為7個月，短于AGE蛋白表達陰性患者的中位生存期11個月(χ2=10.592，P=0.015)，生存曲線見圖2。

圖2 H. pylori感染所致胃癌患者的生存曲線

3 討 論

胃癌是臨床上常見的惡性腫瘤，具有發(fā)病率高、復發(fā)率高等特點[11]。目前，胃癌的病因尚未完全闡明，普遍認為與H.pylori感染有關。胃癌發(fā)病早期缺乏典型性臨床癥狀，隨著病情進展，患者會出現食欲下降、乏力及上腹疼痛加重等癥狀，腫瘤破壞血管可引起嘔血、黑便等消化道癥狀，嚴重影響患者的身體健康和生活質量[12]。因此，加強對H.pylori感染所致胃癌患者的治療和干預對改善患者預后具有重要意義。

本研究中，H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中的AGE蛋白表達陽性率為55.17%，高于癌旁組織的4.60%(P<0.05)，說明AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中的病灶組織呈高表達水平，或許直接參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展。有研究表明，AGE能積累在體內不同的器官及細胞中，如晶狀體、肝臟、血管內皮細胞及神經細胞等，當AGE積累過量時，會影響機體組織器官及細胞的正常功能，產生一系列病理反應[13]。還有研究表明，AGE直接參與糖尿病、尿毒癥、動脈粥樣硬化等疾病的發(fā)生，但其在胃癌中的研究較少[14]。本研究中，H.pylori感染所致胃癌患者病灶組織中AGE蛋白表達陽性率與腫瘤大小、分化類型、腫瘤分期、淋巴結轉移有關(均P<0.05)，其中腫瘤直徑≥5 cm、低中分化型、腫瘤Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴轉移的患者病灶組織中AGE表達陽性率更高，說明AGE在H.pylori感染所致胃癌患者中表達異常，其在病灶組織中的表達水平能反映患者疾病的嚴重程度。研究表明，AGE受體為清道夫受體，與炎性反應具有較大關聯(lián)，能直接參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[15]。還有研究表明，AGE能與高遷移率族蛋白B1相互結合，直接參與胃癌的發(fā)生和發(fā)展[16]，主要是由于AGE能通過高遷移率族蛋白B1-AGE通路，促進腫瘤細胞的生長和增殖，從而抑制腫瘤細胞凋亡[17]。本研究進一步分析AGE的表達情況與H.pylori感染所致胃癌患者預后的關系，結果顯示，病灶組織中AGE蛋白表達陽性患者的生存期短于AGE蛋白表達陰性患者(P<0.05)，這提示H.pylori感染所致胃癌患者的預后與病灶組織中AGE的表達情況相關。因此，H.pylori感染所致胃癌患者治療過程中應加強AGE蛋白水平的測定，并根據測定結果調整治療方案，使得患者的治療更具科學性。

綜上所述，AGE在H.pylori感染所致胃癌患者的病灶組織中呈高表達水平，其表達水平能反映患者的疾病嚴重程度，且與患者預后相關，臨床上應加強AGE的檢測以評估患者預后。