HPLC-CAD同時測定復方醋酸鈉林格注射液中鈉、鉀、鎂、鈣的含量

楊 琴，袁 軍，劉 峰，錢廣生

(1. 四川大學華西藥學院，四川 成都 610041; 2. 四川省藥品檢驗研究院，四川 成都 611730)

0 引 言

復方醋酸鈉林格注射液中含有多種電解質(Na+、K+、Mg2+、Ca2+、Cl–、Acetate–、Gluconate–、Citrate3–)和葡萄糖，在臨床上用于循環血量及組織間液減少時的細胞外液的補充，代謝性酸中毒的糾正[1]，也應用于各類型手術中補液[2-3]。為了臨床上電解質輸入的準確性和科學性，需要對復方醋酸鈉林格注射液中的各電解質含量進行測定。目前其質量標準中測定各離子的方法為原子吸收光譜法，需對其中的每一種離子進行單獨分析，耗時長、成本高。除原子吸收光譜法外，離子色譜-電導檢測器也被用于樣品中鈉、鉀、鎂、鈣的測定[4]，但電導檢測器的響應受溫度影響較大。在其他領域，樣品中的鈉、鉀、鎂、鈣常采用電感耦合等離子體質譜法(ICPMS)[5]，但ICP-MS較昂貴，對氬氣消耗大，耗材更換頻率高。電霧式檢測器(charged aerosol detector ，CAD)作為一種新型的通用型質量型檢測器[6]，現已被2020年版《中國藥典》收載。CAD的響應值只與進樣質量有關，不依賴于化合物的結構與性質，具有檢測范圍寬、靈敏度高、重現性好的優勢[7-8]，可應用于中性、酸性、堿性及兩性物質等，特別是無紫外吸收、非揮發性或半揮發性物質的檢測[9]。有文獻報道，利用CAD檢測器同時測定葡萄糖氯化鈉注射液中葡萄糖、氯和鈉的含量[10]。為了縮短測定時間，本實驗采用陽離子分析柱與通用型檢測器——CAD，同時測定其中鈉、鉀、鎂、鈣離子的含量，能更加快速、簡便、準確地對復方醋酸鈉林格注射液進行定量分析。

1 實驗部分

1.1 儀器與試藥

Vanquish高效液相色譜儀（美國Thermo）；電霧式檢測器（美國Thermo）；Arium pro超純水儀（德國Sartorius）；復方醋酸鈉林格注射液，批號為D20122309（方法學驗證批）、T20082901、T20083001，四川科倫藥業股份有限公司；鈉元素標準溶液（批號208043-3）；鉀元素標準溶液（批號208042-2）；鎂元素標準溶液（批號194013-3）；鈣元素標準溶液（批號201007-4）；乙腈（新藍景，色譜純）；三氟乙酸（安譜，色譜純）。

1.2 方法與結果

1.2.1 HPLC-CAD條件

采用SiELC Primesep A(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，柱溫30 ℃，流動相A為0.1%三氟乙酸水溶液，流動相B為0.25%三氟乙酸乙腈溶液，按表1中的程序進行梯度洗脫，流量1 mL/min，進樣器溫度15 ℃，進樣量25 μL。采用CAD檢測器，數據采集頻率10 Hz，濾波5 s，霧化器溫度50 ℃，冪函數1。

表1 流動相洗脫程序

1.2.2 溶液的制備

精密量取樣品2 mL于10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液A，供測定鉀、鈣、鎂離子。精密量取1 mL樣品于100 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液B，供測定鈉離子。分別精密量取鈉、鉀、鎂、鈣單元素標準溶液（1 000 μg/mL）1 mL 于 10 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為鈉、鉀、鎂、鈣單元素對照品貯備液。分別精密量取鈉、鉀、鎂、鈣單元素對照品貯備液3 mL，3 mL，0.5 mL，1.2 mL于同一10 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為30 μg/mL，30 μg/mL，5 μg/mL，12 μg/mL 的對照品溶液。

1.2.3 專屬性

精密量取空白溶劑、對照品溶液、供試品溶液25 μL，分別進樣測定，記錄色譜圖，見圖1。結果表明：空白溶劑不干擾待測組份測定，鈉、鉀、鎂、鈣的保留時間分別為 7.046 min、9.256 min、17.190 min、19.077 min左右，峰形良好，供試品溶液中無其他雜質峰干擾。

圖1 溶液色譜圖

1.2.4 線性與范圍

分別精密量取鈉、鉀、鎂、鈣單元素標準溶液（1 000 μg/mL）3 mL、3 mL、0.5 mL、1.2 mL 于同一25 mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為線性儲備液。精密量取 1.25，2.5，2.5，2.5，3.75，5 mL 線性儲備液，分別置于 50，50，20，10，10，10 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，依次等體積按“1.2.1”項下方法進行測定，記錄色譜圖。以質量濃度的對數為橫坐標，峰面積的對數為縱坐標，繪制標準曲線。鈉、鉀、鎂、鈣的回歸方程與線性范圍見表2。

表2 鈉、鉀、鎂、鈣的回歸方程、線性范圍和相關系數

1.2.5 檢測限與定量限

精密量取各對照品儲備液適量，逐級稀釋后進樣測定，記錄色譜圖，以信噪比為3時的質量濃度作為檢測限，以信噪比為10時的質量濃度作為定量限。測得鈉的檢測限為0.154 μg/mL，定量限為0.330 μg/mL；鉀的檢測限為 0.286 μg/mL，定量限為 0.571 μg/mL；鎂的檢測限為 0.100 μg/mL，定量限為 0.200 μg/mL；鈣的檢測限為 0.100 μg/mL，定量限為 0.200μg/mL。

1.2.6 進樣精密度與重復性試驗

取對照品溶液，連續進樣6針，記錄峰面積，計算得鈉、鉀、鎂、鈣峰面積的RSD分別為0.45%、0.79%、0.69%、0.52%(n=6)，說明本方法進樣精密度良好，精密度結果見表3。按1.2.2項下方法分別平行制備6份供試品溶液A與供試品溶液B，按1.2.1項下方法進行測定，記錄峰面積，計算樣品中鈉、鉀、鎂、鈣的含量。重復性實驗結果見表4，本文方法重復性良好。

表3 鈉、鉀、鎂、鈣的精密度試驗結果

表4 鈉、鉀、鎂、鈣的重復性試驗結果

1.2.7 加樣回收試驗

精密量取同一樣品1 mL，共9份，至10 mL容量瓶中，分別精密加入不同體積的鈉對照品儲備液，照1.2.2項下方法制備，得80%、100%、120%濃度的加標溶液A。精密量取同一樣品0.5 mL，共9份，至100 mL容量瓶中，分別精密加入不同體積的鉀、鎂、鈣對照品儲備液，照1.2.2項下方法制備，得80%、100%、120%濃度的加標溶液B。以重復性測定結果為樣品本底值，按1.2.1項下方法測定，記錄峰面積。計算得鈉的回收率在101.0%～102.8%之間，平均回收率為101.7%，RSD為0.70%；鉀的回收率在97.19%～100.3%之間，平均回收率為98.41%，RSD為1.05%；鎂的回收率在97.38%～101.9%之間，平均回收率為99.28%，RSD為1.48%；鈣的回收率在 97.14%～102.2%之間，平均回收率為 99.73%，RSD為1.88%。加樣回收試驗結果見表5。

表5 鈉、鉀、鎂、鈣加樣回收率試驗

1.2.8 樣品測定

取復方醋酸鈉林格注射液3批，按1.2.1項下方法進行測定，計算樣品中鈉、鉀、鎂、鈣的含量，并與標準推薦的原子吸收光譜法進行對比，試驗結果見表6，兩種方法測定結果相當。

表6 樣品中鈉、鉀、鎂、鈣的測定結果

1.2.9 耐用性試驗

取復方醋酸鈉林格注射液（批號D20122309）以及對照品溶液，按表7中更改后的條件進行測定，記錄峰面積，計算樣品中鈉、鉀、鎂、鈣的含量。開發方法時已試驗過多根色譜柱，故不再更換色譜柱進行考察。試驗結果見表8。7種方法測得的供試品中鈉、的鉀、鎂、鈣含量RSD值分別為2.40%、1.60%、0.86%、1.84%，表明方法耐用性良好。

表7 耐用性試驗條件

表8 耐用性試驗結果

2 討 論

2.1 供試品溶液濃度的選擇

由于樣品中鈉離子與其他3種離子濃度相差甚大，若用同一份供試品測定4個離子，很難滿足鈉離子不出現平頭峰且其他3個離子達到定量限且峰型良好，所以設計兩份稀釋倍數不同的供試品溶液A和供試品溶液B；鈉離子的供試品溶液A由樣品稀釋100倍而得，鉀、鎂和鈣離子的供試品溶液B由樣品稀釋5倍而得，由此得到的色譜圖峰形良好。

2.2 色譜條件的優化

本實驗考察了多根色譜柱,包括SiELC PrimesepA(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Agilent HILIC-Z(3.0 mm×150 mm，2.7 μm)、Thermo Dionex IonPacTMCS12A(4 mm×250 mm)，通過比較其對4種陽離子的保留行為和分離度，最終發現SiELC Primesep A (4.6 mm×250 mm，5 μm)柱分離效果最佳。葡萄糖在此色譜條件下率先出峰，但峰形較差，故不對葡萄糖進行分析。

流動相中加入的酸性調節劑選用了具有揮發性的三氟乙酸，并考察了不同濃度三氟乙酸對結果的影響。結果表明，當酸濃度過低時，鎂、鈣離子不出峰，當濃度過高時，各離子間分離較差，最后發現0.1%三氟乙酸水溶液–0.25%三氟乙酸乙腈系統分離效果最佳，且基線平穩。進一步優化洗脫梯度后，確定了上述的洗脫條件，此時分離效果好，峰形好，理論塔板數高。

3 結束語

本文采用陽離子分析柱和通用型檢測器-電霧式檢測器，建立了同時測定復方醋酸鈉林格注射液中鈉、鉀、鎂、鈣離子含量的HPLC-CAD檢測方法。本研究對色譜柱和流動相進行了篩選和優化，考察供試品溶液濃度，并進行方法學驗證。該方法能較好地分離上述四種離子，不受溶劑和輔料的干擾，靈敏度、精密度、重復性、準確度均良好。該方法測定結果與原子吸收光譜法測定結果無明顯差異，可準確定量，且可實現多種離子同時測定，耗時少，操作簡便，為金屬離子的測定提供了一種新的思路。