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超聲-微波輔助酶法提取糜子麩皮可溶性膳食纖維及其抗氧化活性分析

2022-06-11 11:19:38顏飛翔朱立斌苗欣月牛廣財魏文毅
食品工業科技 2022年12期

顏飛翔,朱立斌,朱 丹 ,苗欣月,牛廣財, ,魏文毅

(1.黑龍江八一農墾大學食品學院,黑龍江大慶 163319;2.黑龍江省農產品加工工程技術研究中心,黑龍江大慶 163319;3.黑龍江八一農墾大學生命科學技術學院,黑龍江大慶 163319)

糜子(Panicum miliaceumL.)又叫稷、黍和糜,屬禾本科黍屬,耐旱且生長期短,在我國華北、東北和西北等地均有栽培[1-2]。糜子麩皮是糜子加工中的副產品,在加工制米之后,糜子麩皮基本屬于廢棄物,沒有得到充分利用,造成了資源浪費。糜子麩皮中含有豐富的天然活性成分,如酚類化合物[3]、膳食纖維、礦物質和維生素等。但是,目前國內對于糜子在食品方面的利用,主要通過與小麥粉等復配改善其加工特性,以及作為釀酒原料和地方小吃為主,相關產物的開發應用還不夠,尤其缺乏對糜子副產物的深入研究[4]。膳食纖維(Dietary fiber,DF)是食物中不被人體胃腸消化酶所分解、不可消化植物成分的總稱,包括水溶性膳食纖維(Soluble dietary fiber,SDF)和不溶性膳食纖維(Insoluble dietary fiber,IDF)[5]。膳食纖維因具有預防肥胖癥[6]、心腦血管疾病[7]、改善腸道微環境[8]以及調節血糖及血脂水平[9-10]等諸多生理功能,成為了近年來營養學研究的熱點。而可溶性膳食纖維(soluble dietary fiber,SDF)含量的多少對于評價膳食纖維生理功能具有重要意義,因此,對膳食纖維中SDF的研究有助于進一步探索膳食纖維的品質及生理功能。

關于麩皮和果渣類可溶性膳食纖維的提取方法,有酶法、化學法、發酵法、膜分離法及物理法等方法。其中,新發展出一些輔助的方法,如微波、超聲、加壓、超臨界等物理技術[11],將多種方法協同使用是一種高效環保的提取方式,可以結合每種方法的優點,在提高得率的同時保證其生物活性。其中,超聲-微波協同提取技術日趨成熟,該技術充分利用微波的高能作用和超聲波的空化作用,實現對有效成分在常壓下進行充分提取[12],在可溶性膳食纖維的提取方面得到了很好的應用。例如,董玉瑋等[13]分別采用超聲法和超聲結合酶法對紅薯渣中SDF進行提取,結果表明,超聲水提取紅薯渣中SDF提取率為5.64%;而采用超聲結合酶法提取最佳工藝條件為加酶量1.5%、料液比1:30(g/mL)、時間20 min、功率100 W,此時,紅薯渣中SDF提取率為7.29%,其對羥基和超氧自由清除率的IC50值分別為3.94和0.35 mg/mL。唐小閑等[14]采用超聲-微波輔助酶法對蓮藕中膳食纖維進行提取,得到最佳工藝為:料液比 1:13(g/mL)、超聲功率300 W、超聲時間15 min、纖維素酶添加量0.6%、酶解溫度60 ℃,該條件下膳食纖維提取率為36.83%。吳俊男等[15]采用微波-酶法對小麥麩皮中可溶性膳食纖維進行處理并測定其抗氧化活性,在微波功率280 W,微波時間90 s,酶添加量1.5%,酶解時間20 min的條件下處理的小麥麩皮SDF,其DPPH自由基清除率約為70%。由此可見,采用超聲、微波和酶法相結合的方法對膳食纖維進行提取,是一種高效簡潔的方法,且提取的樣品具有較好的生物活性。

目前,尚未有采用超聲-微波輔助酶法對糜子麩皮中可溶性膳食纖維進行研究。本研究以糜子麩皮為原料,采用超聲-微波輔助酶法提取糜子麩皮可溶性膳食纖維,并且對其抗氧化活性進行分析,以期為糜子麩皮膳食纖維的開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

糜子麩皮 黑龍江省肇源縣產龍黍23品種,礱米后的副產物,其中總膳食纖維含量36.44%,蛋白含量10.1%,灰分含量15.4%;纖維素酶Celluclast 1.5L(酶活117.4 U/mL)、木聚糖酶shearzyme 500L(酶活500 FXU (S)/g)、高溫α淀粉酶Termamyl SC(酶活120 KNU/g)、堿性蛋白酶Alcalase 2.4FG(酶活2.4 AU/g) 諾維信(中國)生物技術有限公司;1,1-二苯基-2-苦肼基自由基(DPPH) 梯希愛(上海)化成工業發展有限公司;2,2′-聯氨-雙(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺鹽(ABTS) 上海源葉生物科技有限公司;無水乙醇、維生素C、過硫酸鉀、過氧化氫、無水碳酸鈉、硫酸亞鐵等 均為國產分析純。

GY-FS-02多功能高速粉碎機 江西贛云食品機械有限公司;EX324電子分析天平 奧豪斯儀器(上海)有限公司;XH-300A型電腦微波超聲波合成/萃取儀 北京祥鵠科技發展有限公司;L420臺式低速離心機 湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司;ALPHA冷凍干燥機 德國Christ公司;RE 3000 A旋轉蒸發儀 上海亞榮生化儀器廠;UV-1100紫外可見分光光度計 上海凌析達儀器;TECAN-sunrise酶標儀 奧地利Tecan公司;SX2-8-13NP馬弗爐上海一恒科學儀器有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 復合酶法提取糜子麩皮SDF

1.2.1.1 制備工藝 糜子麩皮經粉碎,正己烷脫脂,采用1%的耐高溫α-淀粉酶,調節pH為6.5,在95 ℃反應30 min脫除淀粉,采用2%堿性蛋白酶,調節pH為8.0,在50 ℃反應30 min脫除蛋白,100 ℃沸水浴10 min滅酶,55 ℃烘干后,備用。固定液料比30:1 mL/g,復合酶(纖維素酶:木聚糖酶為1:1)添加量1.4%,調節酶解溫度、酶解時間、酶解pH、復合酶比例進行酶解,結束后4000 r/min離心15 min收集上清液,用旋轉蒸發儀濃縮至原體積的1/3;用4倍體積的無水乙醇醇沉12 h;收集沉淀,冷凍干燥后,加適量水復溶后配成5%的溶液,4 ℃下蒸餾水透析(3500 Da)48 h,每8 h換一次水,冷凍干燥后,得到糜子麩皮可溶性膳食纖維。

1.2.1.2 單因素實驗 以液料比為30:1 mL/g,酶解時間4 h,酶解溫度55 ℃,酶解pH為5.0,復合酶添加量為1.4%,纖維素酶:木聚糖酶比例為1:1為固定條件,考察復合酶(纖維素酶:木聚糖酶)比例(2:1、1.5:1、1:1、1:1.5、1:2)、酶解pH(4.0、4.5、5.0、5.5、6.0)、酶解時間(1、2、3、4、5 h)、酶解溫度(45、50、55、60、65 ℃)對糜子麩皮SDF得率的影響。

1.2.2 超聲-微波輔助酶法提取糜子麩皮SDF

1.2.2.1 提取工藝 調節不同液料比、提取溫度、協同時間、超聲功率和微波功率進行超聲-微波協同提取,在超聲波和微波的共同作用結束后,調節pH為5.0,然后調節復合酶(纖維素酶:木聚糖酶為1:1)添加量,于55 ℃下酶解4 h。結束后4000 r/min離心15 min收集上清液,之后步驟同1.2.1.1制備工藝中的方法。

1.2.2.2 單因素實驗 以液料比30:1 mL/g,超聲功率250 W,微波功率200 W,提取溫度50 ℃,復合酶添加量1.2%,協同時間20 min為固定條件,考察液料比(15:1、20:1、25:1、30:1、35:1 mL/g)、協同時間(10、20、30、40、50 min)、提取溫度(40、45、50、55、60 ℃)、超聲功率(150、200、250 、300、350 W)、微波功率(100、200、300、400、500 W)、復合酶添加量(0.8%、1.0%、1.2%、1.4%、1.6%)對糜子麩皮中SDF得率的影響。

1.2.3 超聲-微波輔助酶法提取糜子麩皮SDF響應面試驗設計 在單因素實驗的基礎上,以糜子麩皮SDF得率(Y)為響應值,根據 Box-Behnken試驗設計原理,選取A液料比、B協同時間、C提取溫度、D復合酶添加量4個因素,優化超聲-微波輔助酶法提取糜子麩皮SDF的工藝參數。響應面試驗設計見表1。

表1 響應面試驗因素與水平表Table 1 Response surface experimental factors and levels

1.2.4 計算方法 糜子麩皮SDF得率的計算,按照公式(1)進行計算。

1.2.5 糜子麩皮中總膳食纖維及灰分的測定 總膳食纖維的測定參照國標GB 5009.88-2014《食品中膳食纖維的測定》;灰分的測定參照國標GB 5009.4-2016《食品中灰分的測定》。

1.2.6 糜子麩皮SDF中蛋白含量的測定 參照楊靜等[16]的方法,采用考馬斯亮藍法測定糜子麩皮SDF中蛋白含量,以牛血清白蛋白為標準蛋白溶液,繪制得標準曲線:y=0.0057x+0.0207,R2=0.9979。

1.2.7 糜子麩皮SDF體外抗氧化性實驗

1.2.7.1 DPPH自由基清除率的測定 采用李治龍等[17]的方法略有改動。配制0.5 mmol/mL的DPPH溶液100 mL。取2 mL稀釋10倍后的樣液,加入0.5 mL的DPPH溶液,混合均勻后于37 ℃下避光20 min,用無水乙醇調零,在517 nm條件下測定其吸光度Ai;用同體積的無水乙醇代替樣品溶液,測其吸光值為Ac,用同體積的無水乙醇代替DPPH溶液,測其吸光值為Aj。按照(2)式計算DPPH自由基清除率。

1.2.7.2 ABTS+自由基清除率的測定 參照宋藝君等[18]的方法,略有修改。分別配制50 mL的7 mmol/L的ABTS溶液和2.45 mmol/L的K2S2O8溶液,之后將兩種溶液1:1混合后于室溫下暗處靜置一夜,即得儲備液。然后用無水乙醇稀釋到其吸光值在0.7±0.2,得到ABTS工作液。取20 μL不同濃度的糜子麩皮SDF于試管中,加入2 mL的ABTS工作液,混勻,室溫下靜置10 min,用蒸餾水調零,在734 nm處測其吸光度值為Ai,用同體積的蒸餾水代替樣品,測定吸光值為A0。按照式(3)計算ABTS自由基清除率。

1.2.7.3 羥自由基清除率的測定 按照董佳萍等[19]的方法進行測定。取0.1 mL樣品,加入2 mL 6 mmoL/L的過氧化氫溶液以及FeSO4溶液,搖勻靜置10 min后,加入2 mL 6 mmoL/L的水楊酸溶液,搖勻,放置37 ℃恒溫水浴中1 h,在波長510 nm下測定吸光度A1。以去離子水為參比溶液,測定吸光度A0,以同體積的蒸餾水代替水楊酸溶液,測定吸光度A2。按式(4)計算羥自由基清除能力。

1.2.7.4 還原力的測定 按照程宏楨等[20]的方法進行測定。精確吸取不同濃度2.0 mL的糜子麩皮SDF溶液,分別加入0.2 mo L/L pH=6.6的磷酸鹽緩沖液2.5 mL和1%的鐵氰化鉀溶液2.5 mL,振蕩混勻,50 ℃水浴30 min,之后迅速冷卻,加入10%三氯乙酸溶液2.5 mL,然后在4000 r/min條件下離心10 min,取2.5 mL上清液,加入2.5 mL蒸餾水和0.5 mL的0.1%三氯化鐵溶液,振蕩混勻,以蒸餾水為參比,在在波長700 nm處測定吸光度值。

1.3 數據處理

2 結果與分析

2.1 復合酶法提取糜子麩皮SDF單因素實驗結果

2.1.1 復合酶比例對糜子麩皮SDF得率的影響 由圖1可知,當木聚糖酶添加量逐漸大于纖維素酶添加量時,SDF得率明顯升高,當木聚糖酶:纖維素酶為1:1時,得率最大,而當木聚糖酶比例超過纖維素酶時,又呈下降趨勢。這可能是由于兩種酶的作用機制的差異而導致的。由于纖維素酶可以把纖維素水解為半纖維素,而木聚糖酶則作用于半纖維素。因此,當木聚糖酶量升高時,把更多的半纖維素轉化為可溶性的,從而使SDF得率升高[21],但當木聚糖酶含量過高時,可溶性半纖維素降解為小分子低聚糖的速度超過了其生成速度,從而導致SDF得率下降[22],因此選擇纖維素酶:木聚糖酶為1:1時最宜,此時糜子麩皮SDF得率為2.60%。

2.1.2 酶解pH對糜子麩皮SDF得率的影響 從圖2中結果可知,SDF得率隨著pH的升高而不斷增加,在pH5.0時達到最高值2.74%,但pH大于5.0時,SDF得率逐漸減小。原因是酶與底物的結合受反應體系pH值影響,先隨著pH的增大,逐漸達到酶的最適pH[23],酶促反應速率也達到最大值。超過其最適pH后,酶的活性降低,從而影響酶與底物的結合,使酶解反應速率變慢,SDF得率隨之下降,因此pH 5.0是最適宜的酶解pH,此時糜子麩皮SDF得率為2.74%。

圖 1 復合酶比例對糜子麩皮SDF得率的影響Fig.1 Effect of compound enzyme ratio on SDF yield in millet bran

2.1.3 酶解時間對糜子麩皮SDF得率的影響 從圖3中結果可知,SDF得率隨著時間的延長而明顯增加,在4 h時達到最高值2.58%,但超過4 h時SDF得率逐漸降低。原因是SDF主要成分是果膠,而果膠中的原果膠是不溶于水的物質,隨著延長酶解時間,利于糜子麩皮中果膠質充分酶解,但酶解時間過長,果膠被分解成-1,4-D聚半乳糖醛酸,不能被乙醇沉淀出來[23-24],從而其得率降低。因此確定最適酶解時間是4 h,此時糜子麩皮SDF得率為2.58%。

圖 2 酶解pH對糜子麩皮SDF得率的影響Fig.2 Effect of enzymatic hydrolysis pH on SDF yield in millet bran

圖 3 酶解時間對糜子麩皮SDF得率的影響Fig.3 Effect of enzymatic hydrolysis time on SDF yield in millet bran

圖 4 酶解溫度對糜子麩皮SDF得率的影響Fig.4 Effect of enzymatic hydrolysis temperature on SDF yield in millet bran

2.1.4 酶解溫度對糜子麩皮SDF得率的影響 從圖4中結果可知,SDF得率先隨著溫度的升高而明顯增加,在溫度55 ℃時達到最大值2.55%,但溫度繼續升高,SDF得率逐漸下降。原因是適宜的溫度使纖維的結構松散,暴露出更多的側鏈基團,增大了底物與酶的接觸面積,促進酶解反應。溫度過高時,會破壞SDF的主要成分果膠和β-葡聚糖的分子結構[25],從而降低SDF得率。也可能由于溫度過高使酶的活性降低,反應速率也會隨之減慢。因此確定最適酶解溫度為55 ℃,此時糜子麩皮SDF得率為2.55%。

2.2 超聲-微波輔助酶法提取糜子麩皮SDF單因素實驗結果

2.2.1 液料比對糜子麩皮SDF得率的影響 由圖5中液料比的變化對糜子麩皮SDF得率的影響可知,隨著液料比的增大,糜子麩皮SDF的得率也隨之增加,當液料比為30:1 mL/g時,得率達到最大(6.02%)。這是因為在一定濃度范圍內,溶劑可以有效地吸收微波,使物料適度膨脹,有利于增加接觸物料和溶劑之間的表面積,從而提高可溶性膳食纖維的溶出[26]。當液料比高于30:1 mL/g時,得率開始下降。這可能是因為,隨著溶劑用量的持續增加,微波能對物料的作用力減弱,使得溶出的SDF開始減少[27]。Ying等[28]研究認為,可能是高比例的溶劑與溶質比,延長了溶質向內部組織的擴散距離,致使SDF含量降低。因此,選擇液料比為30:1 mL/g,此時糜子麩皮SDF得率為6.02%。

圖 5 液料比對糜子麩皮SDF得率的影響Fig.5 Effect of liquid-solid ratio on SDF yield in millet bran

圖 6 協同時間對糜子麩皮中SDF得率的影響Fig.6 Effect of synergistic time on SDF yield in millet bran

2.2.2 協同時間對糜子麩皮SDF得率的影響 由圖6中協同時間對糜子麩皮SDF得率的影響曲線可知,糜子麩皮SDF得率在20 min時候達到最大值6.17%,之后隨著提取時間的延長,則呈下降趨勢。超聲波增強傳質的作用使SDF更容易釋放和擴散到水中,同時在微波的作用下,糜子麩皮可以吸收微波的能量,熱量的積累進一步促進SDF溶解到溶液中,但是時間過長可能導致SDF降解,導致提取率降低[29]。因此,選擇協同時間為20 min,此時糜子麩皮SDF得率為6.17%。

2.2.3 提取溫度對糜子麩皮SDF得率的影響 圖7反映了提取溫度對糜子麩皮SDF得率的影響,隨著提取溫度的升高,糜子麩皮SDF得率呈現先增加后降低的趨勢。這可能是因為隨著溫度的升高,SDF在水中的溶解度增大,從而使 SDF得率增大。升溫導致SDF在水中的溶解度增大,但過高的溫度會使其發生降解,故當溫度超過50 ℃時,得率降低[30]。也有研究表明,可能是高溫和超聲的雙重作用導致SDF的結構破壞,進而造成得率的下降[31]。因此,選擇提取溫度為50 ℃,此時糜子麩皮SDF得率為5.73%。

圖 7 提取溫度對糜子麩皮中SDF得率的影響Fig.7 Effect of extraction temperature on SDF yield in millet bran

2.2.4 超聲功率對糜子麩皮SDF得率的影響 由圖8可知,隨著超聲功率增加,膳食纖維提取率先快速升高后又快速降低。在超聲功率250 W時,膳食纖維提取率最大,為5.71%。主要是超聲波能在物料內部產生振動,超聲功率較小時對植物細胞和分子間的作用較小,超聲功率增大時,空化效應更強烈[32],膳食纖維的提取率增大,但功率過大時致使膳食纖維結構破壞,提取率下降。由于超聲功率在250 W時已經達到較高的得率,因此,選擇250 W為固定的超聲功率條件,進行后續響應面試驗。

圖 8 超聲功率對糜子麩皮中SDF得率的影響Fig.8 Effect of ultrasonic power on SDF yield in millet bran

2.2.5 微波功率對糜子麩皮SDF得率的影響 由圖9可知,隨著微波功率的增加,糜子麩皮SDF的得率增加,當微波功率為200 W時,得率為最高值6.04%,這可能是由于微波的熱效應導致細胞破裂,有利于SDF進入溶劑中[26],同時,纖維素、半纖維素等粗纖維成分被選擇性加熱,水解成低聚寡糖[33],從而使糜子麩皮SDF增加,但是過高的微波功率會導致膳食纖維發生降解,從而導致產率降低。本實驗中微波功率變化不大,因此,選擇200 W為微波固定的功率條件。

圖 9 微波功率對糜子麩皮中SDF得率的影響Fig.9 Effect of microwave power on SDF yield in millet bran

2.2.6 復合酶添加量對糜子麩皮SDF得率的影響在圖10所示的復合酶添加量對糜子麩皮SDF得率的曲線中,隨著復合酶添加量的增加,糜子麩皮SDF得率呈現先增加后下降的趨勢。當酶促反應中酶的濃度過低,會導致酶解不完全,從而使得可溶性膳食纖維含量較低[34]。在加酶量為1.4%時,可溶性膳食纖維得率最高,為5.47%。當復合酶添加量低于1.4%的時候,復合酶能將不溶性膳食纖維轉化成可溶性膳食纖維。但當酶的濃度過高時,會使得部分膳食纖維被水解成不能被乙醇沉淀的低聚糖,反而降低其得率[13]。因此,選擇復合酶添加量為1.4%,此時糜子麩皮SDF得率為5.47%。

2.3 超聲-微波輔助酶法提取糜子麩皮SDF響應面優化

2.3.1 響應面試驗結果 按照選取的A液料比、B協同時間、C提取溫度、D復合酶添加量,進行四因素三水平中心組合實驗,結果見表2。

2.3.2 回歸方程的建立及方差分析 利用Design-Expert 8.0.6數據分析軟件對表3中數據進行處理,經回歸擬合后得到二次回歸方程:Y=6.33+0.30A+0.24B+0.20C+0.096D-0.10AB-0.060AC-0.10AD-0.097BC+2.500E-003BD-0.048CD-0.66A2-0.75B2-0.73 C2-1.05 D2。

對模型方程進行方差分析,分析結果見表3。

表3 回歸模型的方差分析Table 3 Analysis of variance of regression model

由表3可知,模型P<0.0001,極顯著;失擬項P=0.9988>0.05,不顯著,說明本實驗的二次回歸方程的結果可靠,可以對響應值進行預測;決定系數R2=0.9999,校正系數RAdj2=0.9998,能夠解釋實驗99.98%的響應值變異,表明理論值與實際值擬合良好,可用于糜子麩皮SDF提取工藝的分析和優化。由F值可知,各因素對糜子麩皮SDF得率的影響大小順序為液料比(A)>協同時間(B)>提取溫度(C)>復合酶添加量(D)。

2.3.3 響應面分析 響應曲面反映了當液料比、協同時間、提取溫度以及復合酶添加量等四個因素的任意兩個變量取零點水平時,其他兩個因素的交互作用對糜子麩皮SDF得率的影響。其相應曲面坡度越陡峭,等高線越接近于橢圓形,說明各因素之間交互作用越顯著[35]。

通過響應面圖11,同時結合表3可知,在所有交互項中,除BD之間交互作用對響應值的影響不顯著之外,其它因素之間的交互作用對響應值的影響均極顯著(P<0.01)。其中,AD交互作用對響應值的影響最強,表明液料比和復合酶添加量對糜子麩皮SDF得率的影響最為明顯。隨著液料比和復合酶添加量的增加,糜子麩皮SDF得率先增加后減少,且液料比相應曲面較陡,其影響程度大于復合酶添加量;當液料比為30:1 mL/g,復合酶添加量為1.4%時,為臨界最佳參數;當提取溫度和協同時間同時增加時,糜子麩皮SDF得率先增加后減少,協同時間曲面陡于提取溫度,表明協同時間比超聲功率影響大。因此,在實際操作中,應充分考慮各因素的交互影響,慎重控制各因素的用量,以保證糜子麩皮SDF的得率。

圖 11 各因素對糜子麩皮SDF得率的交互作用Fig.11 Interaction of various factors on SDF yield of millet bran

圖 12 糜子麩皮SDF的體外抗氧化能力Fig.12 Anti-oxidant capacity of millet bran SDF from millet in vitro

2.3.4 驗證性實驗 由二次回歸方程預測糜子麩皮SDF的最佳提取條件為:液料比31:1 mL/g,協同時間21 min,提取溫度56 ℃,復合酶添加量1.4%,此條件下其SDF得率的理論預測值為6.39%。為驗證上述結果的可靠性和穩定性,采用液料比31:1 mL/g,協同時間21 min,提取溫度56 ℃,復合酶(纖維素酶:木聚糖酶為1:1)的添加量1.4%,pH5.0,于55 ℃下酶解4 h。經過3次實驗證實,在上述條件下糜子麩皮SDF得率為6.35%±0.05%,與預測的理論值誤差較小。說明實驗結果與模型符合良好,可以用該模型對糜子麩皮中SDF的得率進行預測。同時,對醇沉后的樣品進行透析和冷凍干燥,計算得到樣品中所含的SDF含量為91.27%,純度較高。

2.4 糜子麩皮SDF體外清除自由基的能力

由圖12可以看出,在實驗濃度范圍內,糜子麩皮SDF抗氧化能力和濃度呈現一定的量效關系,即隨著糜子麩皮SDF濃度的增大,其抗氧化效果也而逐步增強,特別是對于DPPH自由基和羥自由基有較好的清除能力。當糜子麩皮SDF樣品質量濃度達14 mg/mL時,對DPPH自由基清除率為83.65%,低于1 mg/mL的VC清除率(95.40%),通過SPSS25.0分析,其IC50值為2.45 mg/mL。對于羥自由基清除能力來說,當樣品質量濃度小于6 mg/mL時,其清除能力隨樣品濃度升高而明顯加強;當樣品質量濃度達14 mg/mL時,對羥自由基清除率達到最大,為81.48%,低于1 mg/mL的VC清除率(92.97%),其IC50值為5.98 mg/mL。糜子麩皮SDF的還原力以及對于ABTS+自由基的清除能力較弱,當樣品濃度達14 mg/mL時,其還原力和對于ABTS+自由基的清除率分別為1.219和31.29%,均遠遠低于1 mg/mL的Vc抗氧化能力(1.422和94.12%),ABTS+自由基的IC50值為26.15 mg/mL。由此可以看出,糜子麩皮SDF對DPPH自由基和羥自由基的清除能力較強。

3 結論

將超聲-微波輔助酶法應用到糜子麩皮可溶性膳食纖維的提取中,利用響應面法優化得出其最佳提取工藝條件為:液料比為31:1 mL/g、協同時間21 min、提取溫度56 ℃、復合酶添加量1.4%,該條件下糜子麩皮SDF得率為6.35%。抗氧化活性表明,當樣品濃度為14 mg/mL時,糜子麩皮SDF的還原力為1.219,其對于DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率和羥自由基清除率的IC50值分別為2.45、26.15和5.98 mg/mL,說明糜子麩皮SDF有一定的抗氧化活性。該研究結果為糜子麩皮可溶性膳食纖維的提取提供依據,為后續應用提供了理論依據。

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