乳腺浸潤性導管癌中分子標志物表達與病理診斷研究

李永琳，安仕勇，張培亮，蔡世遠，劉黔明

貴州省鳳岡縣人民醫院病理科，貴州遵義 564200

乳腺浸潤性導管癌為乳腺癌常見類型，手術+放化療治療為該病主要治療方式，需加強對患者疾病嚴重程度、預后精準評估，以保證治療方案的準確性[1-2]。隨著分子生物學技術不斷發展，在對該病診斷及預后評估中，雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、人表皮生長因子受體（HER-2）、Ki-67 應用頻率逐漸提升[3]。目前大量研究表示， 上述分子標志物表達情況與乳腺癌發生、發展過程密切相關，但哪種指標能更好地預測患者治療后復發、轉移情況研究仍存在爭議[4-5]。為此， 該研究回顧性分析鳳岡縣人民醫院2015 年1月—2020 年12 月收治的60 例乳腺浸潤性導管癌患者臨床資料，并收集其病理組織標本，分析其分子標志物表達與病理診斷之間關系。 現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

回顧性分析鳳岡縣人民醫院收治的60 例乳腺浸潤性導管癌患者臨床資料， 年齡36~68 歲， 平均（55.02±3.16）歲。 納入標準：①均符合乳腺浸潤性導管癌診斷標準[6]，且經病理組織診斷確診；②年齡≥18 歲；③臨床資料完整；④患者、家屬對研究知情同意。排除標準：①隨訪資料不完整者；②合并其他惡性腫瘤者。 該研究經該院倫理委員會審核批準。

1.2 方法

應用EnvisionTMSystems 分析系統分析乳腺癌標本， 采用 SP 二步法測定標本中 ER、PR、HER-2、Ki-67 的表達情況。主要步驟：切片脫蠟至水后0.3%H2O2甲醇處理切片后水洗； 抗原修復后PBS 沖洗，加入抗體孵育過夜；清洗后加入酶標抗兔/鼠，復合物孵育； 清洗后 DAB-H2O2孵育 5～10 min； 清洗后Harris 蘇木素染核 5～10 min；水洗，分化，藍化，脫水，透明并封固。觀察內容包括病理學分類及組織學分級等情況。

1.3 觀察指標

（1）免疫組化法判定染色陽性信號：①ER、PR：細胞核中間黃色著色物為陽性；②HER-2：依據胞膜著色強度評分為 0、（+）、（++）、（+++），≥30%浸潤癌連續出現完整強胞膜著色（+++）時為陽性；③Ki-67：取任意 5 個高倍視野（400 倍），陽性細胞率≤14%為陰性（-），＞14%為陽性（+）。

（2） 臨床評估指標， 包括腫瘤病組織學分類、TNM 分期、大小、是否存在腋窩淋巴結轉移及大小；其中組織學分類依據WHO 乳腺癌的組織學分類(2003)[7]中細胞分化、核分裂、腺管形成等評分標準，將其分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級；TNM 分期依據2002 年第六版AJCC 分期標準[8]將其分為Ⅰ級、Ⅱ級、Ⅲ級、Ⅳ級。

（3）所有患者均接受手術切除治療，并保持隨訪（信訪、電話隨訪、門診復查），統計患者復發、轉移情況；該研究中，出現原位復發、淋巴結轉移、遠處轉移其中任意一項均定義為復發； 分析不同分子標志物表達與患者復發之間關系； 該次研究中隨訪截止日期為2018 年2 月， 最長隨訪時間為 84 個月， 平均61 個月。

1.4 統計方法

采用SPSS 11.0 統計學軟件進行數據分析，計數資料以[n(%)]表示，組間差異比較采用χ2檢驗。P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 ER 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系

60 例患者中，ER 陽性檢出率為 56.67%（34/60）；不同年齡、組織學分級、TNM 分級、腫瘤大小、是否存在腋窩淋巴結轉移患者、 是否復發、ER 陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。 見表 1。

表1 ER 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系[n（%）]

2.2 PR 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系

60 例患者中，PR 陽性率為 51.67%（31/60）；不同年齡、組織學分級、TNM 分級、腫瘤大小、是否存在腋窩淋巴結轉移患者、是否復發，PR 陽性率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。 見表 2。

表2 PR 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系[n（%）]

2.3 HER-2 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系

60 例患者中，HER-2 陽性檢出率為40.00%（24/60）； 組織學Ⅲ級HER-2 陽性占比較Ⅰ~Ⅱ級高，存在腋窩淋巴結轉移HER-2 陽性占比較無腋窩淋巴結轉移高， 復發患者HER-2 陽性較無復發轉移高，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 3。

表3 HER-2 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系[n（%）]

2.4 Ki-67 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系

60 例患者中，Ki-67 陽性檢出率為55.00%（33/60）；TNM 分期中Ⅲ~Ⅳ級 Ki-67 分級占比較Ⅰ~Ⅱ級高，復發轉移患者Ki-67 陽性較無復發轉移高，差異有統計學意義（P＜0.05）。 見表 4。

表4 Ki-67 表達與乳腺浸潤性導管癌患者病理參數之間關系[n（%）]

3 討論

隨著分子生物學的不斷發展，在臨床疾病診斷中，逐漸傾向于應用分子生物學聯合影像學等技術共同進行疾病診斷，以準確評估患者病灶狀態及預后情況[9-10]。目前在乳腺癌診斷中，ER、PR、HER-2、Ki-6 均為常見的診斷評估指標， 但哪種指標可更好評估預后仍存在爭議[11-12]。

該研究中， 對乳腺浸潤性導管癌患者選擇ER、PR、HER-2、Ki-6，分析其與病理組織診斷結果之間關系， 結果顯示，ER、PR 與病理診斷結果之間無顯著關系， 但組織學Ⅲ級HER-2 陽性占比較Ⅰ~Ⅱ級高，存在腋窩淋巴結轉移HER-2 陽性占比較無腋窩淋巴結轉移高（72.22% vs 26.19%），復發患者HER-2 陽性較無復發轉移高，考慮原因為，HER-2 屬原癌基因，正常情況下處于非激活狀態，在受到外界因素刺激后出現腫瘤轉化活性[13-14]；且其水平升高會出現微血管密度、微淋巴管密度增加情況，其過度表達提示腫瘤惡性程度高，提示HER-2 水平升高，乳腺浸潤性導管癌存在腫瘤細胞增殖速度增加、 可能伴有淋巴結轉移情況[15-16]。 該次研究結果顯示，TNM 分期中Ⅲ~Ⅳ級Ki-67 分級占比較Ⅰ~Ⅱ級高（76.00% vs 40.00%）， 復發轉移患者Ki-67 陽性較無復發轉移高，考慮原因為，細胞核相關抗原Ki-67 為在增殖細胞中表達的抗原，其在乳腺癌發生、發展過程中均表現出異常增高情況[17-18]；該分子標志物主要表達在細胞 G1 期、S 期、G2 期、M 期，脫離細胞周期后迅速降解， 因此在對腫瘤細胞增殖活性檢測中表現出良好性能，提示Ki-67 水平升高，可能存在乳腺浸潤性導管癌組織細胞增殖、浸潤程度增加情況[19-20]；且若隨訪中存在HER-2、Ki-6 水平升高情況， 提示患者存在復發風險[21]。 陳余英等[22]研究發現，乳腺浸潤性導管癌患者發生淋巴結轉移，HER-2 陽性檢出率顯著提升 （54.76% vs 21.88%）；TNM 分期Ⅲ~Ⅳ期患者，Ki-67 陽性檢出率顯著提升（81.48% vs 57.45%），與該次研究結果相近。

綜上所述，HER-2、Ki-67 對腫瘤組織學分期、TNM 分期、是否存在腋窩淋巴結轉移及復發情況存在明顯影響，可作為該病術前評估、預后評估指標。