HPV E6/ E7 mRNA 聯合液基薄層細胞學檢測(TCT)在宮頸癌篩查中的實施價值

劉端芳

新泰市婦幼保健計劃生育服務中心婦女保健科，山東新泰 271200

宮頸癌又被稱為子宮頸癌， 是發生在宮頸部位的惡性腫瘤， 同時也是女性生殖道內極為常見的婦科腫瘤[1]。人乳頭狀瘤病毒（HPV）是導致宮頸癌發生的危險因素之一[2]。針對宮頸癌篩查可以進一步防止癌病變， 對女性患者身體健康有重要作用[3]。 HPV E6/E7 mRNA 可以有效評估癌癥基因的活動情況，同時對宮頸癌發生風險預測有重要作用[4]。液基薄層細胞學檢測（TCT）技術屬于目前針對宮頸癌細胞學檢查中關鍵性技術。 兩種技術均具有良好的宮頸癌篩查價值，而聯合HPV E6/E7 mRNA 與TCT 技術篩查應用與單一技術篩查應用相比篩查價值更高，準確性更加理想， 同時更加具有較高的靈敏度， 特異度，對宮頸癌疾病篩查有較高的臨床價值[5-6]。 選取2020 年7 月—2021 年7 月于該院進行宮頸癌篩查的1 528 例患者為研究對象， 分別使用HPV E6/E7 mRNA 聯合TCT 技術進行篩查，探究其在宮頸癌篩查中的價值。 現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取該院進行宮頸癌篩查的1 528 例患者為研究對象，患者年齡 25~64 歲，平均（48.59±2.26）歲。參與該次醫學研究女性均在《知情同意書》簽字。 經醫院醫學倫理委員會審批同意后開展項目研究。 納入標準：①存在陰道分泌物；②白帶異常；③宮頸糜爛、腫物；④接觸性出血；⑤24 h 內無性生活；⑥無宮頸放射性治療。 排除標準：①子宮切除者；②出現癌前病變史者；③合并其他腫瘤/癌癥者；④認知異常者。

1.2 方法

對參與該次研究的患者均同時采集TCT 標本以及HPV 標本，標本采集前叮囑患者不允許進行陰道沖洗，同時也不允許進行陰道內藥物使用。采集方法：凱普宮頸細胞收集保存系統與去RNA 酶宮頸細胞保存系統采集宮頸細胞標本各1 份； 同時使用陰道擴張器進行擴張后， 采用無菌棉球將宮頸分泌物拭去，將TCT 檢測專用采樣裝置放置在患者宮頸鱗柱狀上皮交界處。 以順時針旋轉3~5 圈后折斷采集器，將其采集樣本放置在細胞保存液中。

TCT 篩查：在篩查過程中涉及到的技術：膜式液基超薄細胞學和離心沉淀技術， 對采集后的宮頸脫落細胞進行固定染色處理， 利用Bethesda 系統診斷宮頸細胞學。

按照TBS 國際癌癥協會診斷標準，對非典型鱗狀細胞（ASCUS）、惡性病變（NILM）、高度鱗狀上皮內病變（HSIL）等進行檢查，上述任一存在則判斷為陽性。

HPV E6/E7 mRNA 篩查：篩查過程中采用PCR聚合酶鏈式反應， 對 HPV E6/E7 mRNA 進行篩查。篩查前通過將樣本進行離心處理， 完成離心后將上層清液清除，加入裂解液及蛋白酶，在恒溫狀態下保持90 min 后將其取出震蕩。 利用信號放大對目的mRNA 進行放大，同時加入催化劑實現病毒雜交，以此生成支鏈DNA 復合物，利用堿性磷酸酶進行標記，同時對其進行發光值檢測， 當相對發光強度(RLUs)比≥1，這種情況下說明HPV E6/E7 mRNA 陽性。

聯合診斷陽性判斷標準： HPV E6/E7 mRNA 篩查陽性，TCT 檢查為陽性。

1.3 觀察指標

觀察病理切片陽性情況， 同時對比單一檢驗及聯合檢驗與病理診斷結果， 分析不同診斷方案診斷效能。

1.4 統計方法

采用SPSS 19.0 統計學軟件分析數據。 符合正態分布的計量資料以（）來表示，計數資料以[n（%）]表示，P＜0.05 為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 病理切片陽性情況

經過病理切片檢查，1 528 例患者宮頸癌篩查中，陽性例數108 例，陽性率7.07%，陰性例數1 420例，陰性率92.93%。

2.2 單項檢測、聯合檢查與病理檢查結果

聯合診斷對于宮頸癌篩查的靈敏度、 特異度及診斷符合率88.89%、96.34%、95.81%，對比單一診斷數據均更為理想，見表1、表2。

表1 單項檢測、聯合檢查與病理檢查結果

表2 不同診斷方案診斷效能對比（%）

3 討論

宮頸癌是現階段女性生殖道內最為常見的惡性腫瘤之一，嚴重地影響女性身體健康及生命安全。據流行病學調查數據顯示，世界衛生組織在2018 年通過調查發現全球宮頸癌發病率為13/10 萬， 死亡率7/10 萬， 而同期全球新發宮頸癌患者數量超過56.9萬，死亡患者數量超過31.1 萬[7-8]。 而近年來世界上宮頸癌的發病率及病死率有明顯的降低， 導致這種情況發生的主要原因是社會上加強了對宮頸癌疾病的健康教育，同時HPV 疫苗的接種以及宮頸癌篩查工作也大大降低了宮頸癌疾病發生[9]。盡管宮頸癌發生情況逐漸減少，但是相關研究表明，宮頸癌發病的平均年齡有低齡化、年輕化趨勢。我國宮頸癌發病最多年齡40~50 歲，峰值年齡60~70 歲。疾病的發生主要因HPV 感染導致，加之患者如果存在吸煙或者多個性伴侶， 而且性生活過早或者出現多孕多產以及免疫障礙，均會增加疾病發生風險[10]。

疾病在發生初期癥狀并不明顯， 很容易導致女性忽視自身癥狀， 而局部癥狀主要表現為患者存在接觸性出血，白帶、陰道分泌物異常，除此之外還會伴隨著其他組織發生病變， 例如壓迫直腸， 侵犯膀胱、盆腔進而造成尿頻，尿急，腹部疼痛等。為保障女性患者機體健康， 需要進一步加大宮頸癌的臨床篩查工作， 通過宮頸癌篩查可以進一步對患者宮頸病變程度及宮頸病變類型進行判斷， 同時還可以為患者提供有效的救治服務[11-13]。現階段臨床中針對宮頸癌篩查的方法主要為HPV 檢測、細胞學檢測、陰道鏡檢測及宮頸組織病理學活檢等方法[14]。 目前分析宮頸癌疾病出現原因主要是持續性感染高危型HPV病毒造成，HPV E6/E7 作為造成宮頸致癌因子重要內容，E6 可以對抑癌P53 進行抑制， 進而起到細胞周期凋亡阻斷工作，除此之外，該物質還可以進一步促進腫瘤細胞異常增殖擴散提高宮頸癌變風險。 E7同樣可以使細胞周期異常，促進癌細胞增殖分化[15]。因此在宮頸癌篩查過程中通過HPV E6/E7 檢查可以進一步判斷患者感染HPV 病毒后的嚴重情況，對于宮頸癌前病變以及相關疾病風險預測有重要作用。 液基薄層細胞學檢測（TCT）是現階段臨床醫學中具有高精準性，較為先進的宮頸癌篩查技術。該種診斷方式需要細胞學醫師進行診斷， 不同人員在診斷過程中很容易出現偏差導致檢驗結果不準確，所以在針對患者疾病篩查過程中需要由2 名或者2 名以上醫生進行檢查復核， 這樣可以進一步提升疾病診斷準確性[16]。

經過病理切片檢查，1 528 例患者宮頸癌篩查中，陽性例數108 例，陽性率7.07%，陰性例數1 420例，陰性率92.93%；同時經診斷效能分析，聯合診斷對宮頸疾病篩查的靈敏度、 特異度及診斷符合率分別為88.89%、96.34%、95.81%， 較單一診斷更加理想。 陳林龍[17]在其研究中也發現，在宮頸癌篩查中采取HPV E6/E7 mRNA 聯合薄層液基細胞學檢測的診斷靈敏度為96.21%，特異度為74.00%；HPV E6/E7 mRNA 靈敏度為 84.26%， 特異度為 63.11%，TCT 檢驗靈敏度為71.43%， 特異度為72.02%， 均是HPV E6/E7 mRNA+TCT 檢驗效能更高， 這一結果與該次研究部分結果高度相似， 進一步說明HPV E6/E7 mRNA+TCT 聯合篩查在宮頸癌篩查中的價值。

在宮頸癌疾病篩查中使用HPV E6/E7 mRNA檢驗聯合TCT 技術篩查效果更加理想。 而且使用TCT 檢查可以實現宮頸癌疾病有效檢出， 在采集樣本后將其直接保存在細胞保存瓶中， 這樣在一定程度上提升細胞獲取率， 減少黏液組織及炎癥因子干擾，同時減少檢測次數。 薛春芬等[18]在研究中發現HPV E6/E7 mRNA、TCT 單獨檢測陽性率，TCT 更加理想， 而且針對宮頸癌早期病變同樣是兩種篩查方式靈敏度更高，研究結果與該次研究結果高度相似，進一步說明了HPV E6/E7 mRNA 與TCT 聯合檢查在宮頸癌篩查中的實施價值。

綜上所述，宮頸癌篩查中HPV E6/E7 mRNA 聯合TCT 篩查效果更加理想，更加利于宮頸疾病診斷，值得臨床推廣使用。