12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑液相色譜分析

白 亮，馬 超，趙宜君，徐 軍，2*，陳 昶，2*

（1.河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司，北京 100193；2.中國農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所，北京 100193)

蟲螨腈又名溴蟲腈（Chlorfenapyr），作用于昆蟲細胞的線粒體，主要抑制二磷酸腺苷（ADP）向三磷酸腺苷（ATP）的轉化[1-2]，其具有胃毒、觸殺作用與內吸活性，對鱗翅目、同翅目等多重害蟲的防治具有高效性[3-5]，因而被廣泛應用于蔬菜、水果等作物[6-7]。多殺菌素（Spinosad）是一種作用于煙堿型乙酰膽堿受體的抗生素類藥劑[8]，其對鱗翅目[9-10]等靶標害蟲同樣具有優(yōu)異的防效。關于蟲螨腈、多殺菌素單劑分析方法已有研究[11]，但二者混配制劑的高效液相色譜分析方法未見報道。本研究采用高效液相色譜法同時檢測12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑中的蟲螨腈和多殺菌素。該方法具有較高的準確度和精密度，是較為實用的分析方法。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

甲醇（色譜純），默克（德國）股份有限公司；乙腈（色譜純），美國飛世爾科技公司；氨水（分析純），北京廣達恒益科技有限公司；蟲螨腈標準品（純度99.0%）和多殺菌素標準品（純度≥92.0%），沈陽化工研究院；12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑（10%蟲螨腈＋2%多殺菌素），河北中保綠農(nóng)作物科技有限公司。

1.2 儀器與設備

Waters e2695高效液相色譜儀、2489UV-Vis紫外檢測器，沃特世科技（上海）有限公司；C18色譜柱（4.6 mm×200 mm，5 μm），北京海誠中儀科技有限公司；UV-6100紫外分光光度計，上海元析儀器有限公司；真空抽濾器（內置孔徑為0.45 μm的水系濾膜），天津科億龍試驗設備有限公司；0.45 μm有機濾膜，上海密粒膜分離技術有限公司；AL104電子天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.3 液相色譜分析條件

流動相：甲醇-乙腈-緩沖鹽（42∶42∶16，V/V/V），其中，緩沖鹽為水-氨水（300∶1，V/V），經(jīng)真空抽濾器抽濾除雜，并采用超聲排空液體中氣泡；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；進樣體積：5 μL；檢測波長：245 nm。

1.4 溶液配制

1.4.1 標準溶液的配制

稱取多殺菌素標準品0.05 g（精確至0.000 2 g），加入適量甲醇溶解，置于100 mL容量瓶中，超聲震蕩20 min后，取出冷卻至室溫；準確稱取蟲螨腈標準品0.05 g（精確至0.000 2 g），用甲醇溶解，置于100 mL容量瓶中，隨后準確量取20 mL上述多殺菌素標準溶液加入至蟲螨腈標準溶液中，用甲醇定容后上下顛倒混勻，制得多殺菌素標準溶液的濃度為0.1 mg/mL，蟲螨腈標準溶液濃度為0.5 mg/mL，過濾后存于4℃冰箱，待測。

1.4.2 試樣溶液的配制

精確稱取含多殺菌素和蟲螨腈的試樣0.5 g（精確至0.000 2 g），加入適量甲醇溶解，置于100 mL容量瓶中，超聲震蕩20 min后，取出冷卻至室溫，待樣品完全溶解后用甲醇定容，過濾后裝入進樣瓶，存于4℃冰箱，待測。

1.5 有效成分質量分數(shù)測定

在1.3中檢測樣品有效成分的分析條件下平衡儀器，使儀器達到最佳使用狀態(tài)（基線波動范圍應小于10-3），取1.4中配制好的標準溶液和試樣溶液進行測定。

1.6 計算

樣品中的有效成分多殺菌素和蟲螨腈的質量分數(shù)w按式（1）進行計算。

式中：A1為標樣溶液中蟲螨腈（多殺菌素）峰面積的平均值，mAU·min；A2為試樣溶液中蟲螨腈（多殺菌素）峰面積的平均值，mAU·min；m1、m2分別為蟲螨腈（多殺菌素）標樣、試樣質量，g；P為標樣中蟲螨腈（多殺菌素）的質量分數(shù)，%；f為稀釋倍數(shù)（f蟲螨腈=1，f多殺菌素=5）。

2 結果與分析

2.1 檢測波長的選擇

使用紫外分光光度計分別對蟲螨腈和多殺菌素的標準溶液進行全波長掃描，得到在200～300 nm波長范圍的紫外光譜圖（圖1）。在245 nm波長條件下，蟲螨腈和多殺菌素均有較強的吸收蜂，且雜峰較少。因此，本方法選擇245 nm作為檢測波長。

圖1 蟲螨腈和多殺菌素的紫外吸收光譜圖

2.2 流動相的選擇

在12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑有效質量分數(shù)檢測中，對流動相各分相的比例進行調整，觀察峰型的變化和出峰的先后順序，來確定流動相的最佳配比。最終結果表明，當V乙腈∶V甲醇∶V緩沖鹽為42∶42∶16時，色譜峰型較好（圖2、圖3），出峰較快，分離效果最佳，滿足分析檢測要求。

圖2 蟲螨腈和多殺菌素標樣液相色譜圖

圖3 蟲螨腈和多殺菌素試樣液相色譜圖

2.3 分析方法的線性關系

依次吸取多殺菌素和蟲螨腈標準溶液1.0、2.0、5.0、8.0、10.0 mL進行濃度稀釋，制得0.2～2.0 mg/mL多殺菌素和0.05～0.5 mg/mL的蟲螨腈系列標準溶液。之后，用1.3所述的色譜分析條件對各濃度的標樣溶液進行測定并記錄峰面積。繪制標準曲線，計算出多殺菌素和蟲螨腈的線性回歸方程。多殺菌素的回歸方程為y=1 028 812.278 9x-303 559.850 3，R2=0.999 8；蟲螨腈的回歸方程為y=424 359.738 1x＋55 725.761 9，R2=0.999 2，兩者的R2值均大于0.999。結果表明，多殺菌素和蟲螨腈均具有良好的線性關系。

2.4 分析方法的精密度

在上述色譜檢測條件下，對12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑試樣進行n（n≥5）次獨立分析檢測。由檢測結果可知，樣品中蟲螨腈的相對標準偏差為0.43%，多殺菌素的相對標準偏差為0.62%，分別小于Horwitz公式[12]21-0.5logC×0.67（其中C為樣品中有效成分含量的平均值）的計算值0.947 5和1.207。以上結果均符合分析標準要求[12]，說明該分析方法的精密度良好（表1）。

表1 分析方法的精密度檢測結果（n=5）

2.5 分析方法的準確度

準確稱取5份12%蟲螨腈·多殺菌素的試樣，再分別加入多殺菌素標準品（約0.05 g）和蟲螨腈標準品（約0.05 g），對其質量分數(shù)進行測定，計算回收率，結果見表2。多殺菌素和蟲螨腈的平均回收率分別為96.29%和98.29%，均較高，說明該分析方法的準確度良好。

表2 分析方法的準確度測定結果（n=5）

3 結論

本文建立了能夠同時對12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑中的有效成分蟲螨腈和多殺菌素進行檢測的高效液相色譜分析方法，并對此方法進行合理的方法驗證。結果表明，蟲螨腈和多殺菌素有效成分的分離效果較好，精密度較高，檢測方法重現(xiàn)性良好，高效，易操作，因此該方法可用于12%蟲螨腈·多殺菌素懸浮劑產(chǎn)品的有效成分的定量分析。