SPE-HPLC-ESI-MS/MS檢測污水中常見13種違禁藥物的方法

郭晶晶，陳丹萍，董露斌，楊飛，胡雙英

浙江中和司法鑒定中心，浙江寧波，315012

0 引言

目前，對(duì)毒品的主要檢測技術(shù)有化學(xué)檢驗(yàn)[1]、免疫學(xué)檢測法[2]、薄層色譜分析法（TLC）[3]、氣相色譜法（GC）[4]、高效液相色譜法（HPLC）[5]、氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用分析法（GC-MS）[6]等，其中質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)可以定性與定量檢測環(huán)境中痕量多殘留藥物，具有快速、靈敏、簡單的處理優(yōu)點(diǎn)[7]。但已有報(bào)道主要以毛發(fā)、尿液等生物樣本為研究對(duì)象，較少涉及生活污水。本研究建立了SPEHPLC-ESI-MS/MS技術(shù)分析生活污水中13種違禁藥物的方法，并優(yōu)化固相萃取柱，有效提高了對(duì)目標(biāo)藥物的回收率。該方法簡便、定量限低、可靠性高，可應(yīng)用于實(shí)際污水樣品檢測。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

島津LCMS-8050高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜（日本島津公司）；蠕動(dòng)泵（重慶科耐普公司）；循環(huán)水真空泵（上海予華公司）；高速離心機(jī)（德國艾本德公司）；干式氮吹儀（寧波洛尚公司）；Oasis MCX固相萃取柱（美國Waters公司）；Oasis HLB固相萃取柱（美國Waters公司）；GF/CTM無黏合劑玻璃纖維濾紙（英國Whatman公司）。

1 3 種待測物及其氘代內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液均購于美國Cerilliant公司，包括可卡因（COC）、苯甲酰愛康寧（BZE）、氯胺酮（KET）、去甲氯胺酮（N K）、3，4-亞甲二氧基甲基苯丙胺（MDMA）、3，4-亞甲基二氧基苯丙胺（M D A）、甲基苯丙胺（M A M P）、苯丙胺（AMP）、甲卡西酮（MC）、嗎啡（MOR）、6-單乙酰嗎啡（6-MAM）、可待因（COD）、美沙酮（TMD）以及它們的氘代內(nèi)標(biāo)。甲醇、乙腈均為色譜純（美國Supelco公司），甲酸（50%）為色譜級(jí)（上海麥克林公司），乙酸銨為色譜純（美國賽默飛公司），氨水為色譜級(jí)（上海阿拉丁公司），鹽酸（市售分析純）。

1.2 固相萃取方法

水樣用鹽酸調(diào)至pH 2.0，用真空抽濾裝置進(jìn)行過濾，濾膜選用GF/CTM無黏合劑玻璃纖維濾紙，過濾后取水樣50mL，加入100μL的50ng/mL氘代內(nèi)標(biāo)工作液，混合均勻，待固相萃取。分別用甲醇1mL和pH 2.0的純水1mL活化SPE萃取柱。50mL樣品以2mL/min的速度上樣；后用甲醇1mL淋洗；再用4%氨水-乙腈洗脫劑3mL洗脫（流速0.2mL/min）。收集洗脫液，在60℃下氮吹，用100μL甲醇溶液復(fù)溶，高速離心取上清液進(jìn)HPLC-ESI-MS/MS分析。

1.3 色譜條件

色譜柱為Restek Allure? PFP Propyl（100mm×2.1mm，5μm）；流動(dòng)相A為乙腈，B為20mmol/L乙酸銨和0.1%甲酸水溶液，流動(dòng)相比例為80%A、20%B；流速為0.35mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：5μL。

1.4 質(zhì)譜條件

正離子模式（ES I+），多反應(yīng)監(jiān)測模式（MRM），離子源溫度：400℃；離子噴霧電壓：4000V；碰撞氣氦氣：270kPa；氣簾氣：10L/min；霧化氣：3L/min；輔助氣：10L/min；DL溫度：250℃。13種化合物及其氘代內(nèi)標(biāo)的LC-MS/MS參數(shù)見表1。

表1 13 種化合物及其氘代內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)

續(xù)表1

2 結(jié)果與討論

2.1 固相萃取柱的優(yōu)化

分別選用Oasis HLB柱、Oasis MCX柱與混合模式Oasis HLB+MCX，采用1.2固相萃取方法處理樣品，得到目標(biāo)藥物的回收率見圖1。

如圖所示，選用Oasis HLB柱與Oasis MCX柱對(duì)NT、KET、6-MAM、MDA、MDMA、COC、TMD的回收率基本一致，而選用Oasis HLB柱對(duì)BZE藥物的回收率要優(yōu)于使用Oasis MCX柱，剩余其他5種藥物的回收率則是選用Oasis MCX柱效果更佳。選用Oasis HLB柱、Oasis MCX柱與混合模式Oasis HLB+MCX對(duì)13種常見違禁藥品的平均回收率分別為69.0%、77.9%與91.5%。使用混合模式Oasis HLB+MCX柱大大提高了對(duì)目標(biāo)藥物的回收率，則最終采用Oasis HLB+MCX柱。

2.2 精密度及準(zhǔn)確度

分別配置5、100、400 3個(gè)濃度的質(zhì)控樣品，并按上述1.2處理樣品，每一濃度進(jìn)行6樣本分析，連續(xù)測定3天，結(jié)果見下表2所示。在6次平行測定的情況下，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于12%，準(zhǔn)確度基本在（100±15）%以內(nèi)，呈現(xiàn)良好的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，可以滿足污水中痕量違禁藥物的分析要求。

表2 在不同濃度樣品中13 種違禁藥物的回收率，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差以及準(zhǔn)確度（n=6）

續(xù)表2

3 結(jié)語

本文建立了一種基于固相萃取-高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)三重四級(jí)桿質(zhì)譜（SPE-HPLCESI-MS/MS）聯(lián)用技術(shù)定量分析生活污水中13種違禁藥物的方法。優(yōu)化固相萃取技術(shù)，選用Oasis HLB+MCX固相萃取柱，對(duì)目標(biāo)藥物的回收率高達(dá)91.5%，6次平行實(shí)驗(yàn)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于12%，準(zhǔn)確度基本在（100±15）%之內(nèi)。該方法操作簡單、定量限低、重現(xiàn)性好，可以有效監(jiān)測毒情發(fā)展情況，準(zhǔn)確掌握毒品的濫用種類，預(yù)防和打擊毒品犯罪，為禁毒工作的開展提供重要的技術(shù)支持。