原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)與雌激素受體α基因甲基化的相關(guān)性研究

張一達(dá)，劉 璇，劉東亮，李恩靜，趙丹青，賀雯雯，謝 杰，齊雪威

（任丘康濟(jì)新圖醫(yī)院心內(nèi)科，河北 滄州 062550）

原發(fā)性高血壓屬于一種臨床較為常見(jiàn)的心血管綜合征，多發(fā)于中老年人群，且在原發(fā)性高血壓的發(fā)生與病情進(jìn)展過(guò)程中機(jī)體血管長(zhǎng)期處于高壓狀態(tài)，能夠引發(fā)頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度（IMT）升高，增大斑塊面積，也是引發(fā)大動(dòng)脈發(fā)生粥樣硬化的重要標(biāo)志。因此，早期識(shí)別高血壓患者頸動(dòng)脈粥樣硬化，有利于提前制定預(yù)防措施。雌激素的降壓作用與雌激素受體α基因有關(guān)，主要通過(guò)促進(jìn)一氧化氮的合成、抑制炎癥反應(yīng)、抗氧化應(yīng)激等機(jī)制參與血壓調(diào)節(jié)，且雌激素受體α基因表達(dá)受體受其啟動(dòng)子區(qū)甲基化的調(diào)控[1]。基因甲基化是最常見(jiàn)的表觀遺傳形式，基因甲基化通常會(huì)導(dǎo)致基因表達(dá)沉默，參與多種疾病的發(fā)生。相關(guān)研究顯示，動(dòng)脈粥樣硬化患者雌激素受體α基因啟動(dòng)子區(qū)呈異常甲基化[2]。同型半胱氨酸（Hcy）屬于一種非蛋白組成氨基酸，其在甲硫氨酸代謝途徑中生成S腺苷甲硫氨酸（SAM），SAM作為甲基基團(tuán)供體，參與DNA的甲基化調(diào)控[3]。因此，本研究旨在探討原發(fā)性高血壓患者Hcy、IMT、斑塊面積及雌激素受體α基因甲基化水平變化，并分析其相關(guān)性，以便為臨床改善原發(fā)性高血壓患者預(yù)后提供一定的參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2021年1月至12月任丘康濟(jì)新圖醫(yī)院收治的66例原發(fā)性高血壓患者的臨床資料，作為觀察組，同時(shí)回顧性分析35例同期入院體檢的健康者的體檢資料，作為對(duì)照組。觀察組中男、女患者分別為43、23例；年齡45～85歲，平均（58.39±10.85）歲。對(duì)照組研究對(duì)象中男、女性分別為23、12例；年齡46～86歲，平均（58.81±10.68）歲。兩組研究對(duì)象性別、年齡一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），組間具有可比性。納入標(biāo)準(zhǔn)：觀察組患者均符合《中國(guó)高血壓防治指南2018年修訂版》[4]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)實(shí)驗(yàn)室檢查確診者；伴有頭暈、心悸等癥狀者；臨床資料齊全，且病情可控制者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并內(nèi)分泌疾病者；合并其他心腦血管疾病者；合并惡性腫瘤者等。本研究經(jīng)任丘康濟(jì)新圖醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 高血壓分級(jí) 參照《中國(guó)高血壓基層管理指南》[5]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)將原發(fā)性高血壓患者進(jìn)行高血壓分級(jí)，其中1級(jí)：舒張壓（DBP）在 90～99 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），收縮壓（SBP）在 140～159 mmHg；2級(jí)：DBP在100～109 mmHg和（或）SBP 在 160～179 mmHg；3級(jí)：DBP ≥ 110 mmHg，SBP ≥ 180 mmHg。觀察組 66 例原發(fā)性高血壓患者中1級(jí)22例，2級(jí)23例，3級(jí)21例。

1.3 雌激素受體α基因甲基化狀態(tài)的檢測(cè) 于觀察組患者入院后及對(duì)照組研究對(duì)象體檢時(shí)，采集靜脈血5 mL，置于抗凝管中，置于-70 ℃?zhèn)溆茫捎萌芤撼恋矸ㄌ崛⊙簶颖净蚪MDNA，將DNA的亞硫酸氫鈉修飾純化，后置入-20 ℃保存?zhèn)溆谩Ｊ褂贸彩郊谆禺愋跃酆厦告準(zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法[6]檢測(cè)雌激素受體-α基因甲基化狀態(tài)。雌激素受體-α基因啟動(dòng)子區(qū)域存在完全甲基化、完全非甲基化、部分甲基化3種狀態(tài)，經(jīng)亞硫酸氫鈉修飾后，其產(chǎn)物DNA序列不同。根據(jù)雌激素受體α基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化情況將患者分為完全甲基化（雌激素受體α基因-pM擴(kuò)增存在目的條帶，17例）、完全非甲基化（雌激素受體α基因-pU擴(kuò)增存在目的條帶，28例）、部分甲基化（雌激素受體α基因-pM、雌激素受體α基因-pU擴(kuò)增都存在目的條帶，21例）[7]。

1.4 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)的檢測(cè) 采集所有研究對(duì)象靜脈血5 mL，經(jīng)抗凝處理后，進(jìn)行離心（轉(zhuǎn)速為3 000 r/min，時(shí)間為10 min），使用全自動(dòng)免疫分析儀（山東萊博生物科技有限公司，型號(hào)：CLIA 500）檢測(cè)血漿Hcy水平。采用彩色超聲診斷系統(tǒng)（深圳駝人生物醫(yī)療電子股份有限公司，型號(hào)：TRU160）檢測(cè)IMT、頸動(dòng)脈斑塊面積。

1.5 觀察指標(biāo) ①比較對(duì)照組研究對(duì)象與不同分級(jí)原發(fā)性高血壓患者雌激素受體α基因甲基化狀態(tài)。②比較對(duì)照組研究對(duì)象與不同分級(jí)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，包括血漿Hcy水平及IMT、斑塊面積。③比較對(duì)照組研究對(duì)象與不同甲基化狀態(tài)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平，包括血漿Hcy水平及IMT、斑塊面積。④分析原發(fā)性高血壓患者甲基化狀態(tài)與血漿Hcy水平、IMT、斑塊面積的相關(guān)性。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，計(jì)量資料以(±s)表示，兩組間比較行t檢驗(yàn)，多組間比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析；計(jì)數(shù)資料以[例(%)]表示，兩組間比較行χ2檢驗(yàn)，多組間比較采用秩和檢驗(yàn)；指標(biāo)間相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)照組研究對(duì)象與不同分級(jí)高血壓患者雌激素受體α基因甲基化比較 與對(duì)照組比，高血壓2～3級(jí)患者雌激素受體α基因甲基化占比呈升高趨勢(shì)，且高血壓2級(jí)顯著高于對(duì)照組；高血壓3級(jí)顯著高于對(duì)照組及高血壓1、2級(jí)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 對(duì)照組研究對(duì)象與不同分級(jí)高血壓患者雌激素受體α基因甲基化比較[例(%)]

2.2 對(duì)照組研究對(duì)象與不同分級(jí)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較 與對(duì)照組比，高血壓1～3級(jí)患者血漿Hcy水平均呈升高趨勢(shì)，IMT呈增厚趨勢(shì)，斑塊面積呈增大趨勢(shì)，且組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表 2。

表2 對(duì)照組研究對(duì)象與不同分級(jí)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較( ±s)

表2 對(duì)照組研究對(duì)象與不同分級(jí)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)比較( ±s)

注：與對(duì)照組比，*P＜0.05，與高血壓1級(jí)比，#P＜0.05，與高血壓2級(jí)比，△P＜0.05。Hcy：同型半胱氨酸；IMT：頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度。

組別 例數(shù) Hcy(μmol/L) IMT(mm) 斑塊面積(mm2)對(duì)照組 35 5.19±0.78 0.58±0.07 1.47±0.29高血壓1級(jí) 22 18.01±2.75* 0.92±0.16* 17.78±2.89*高血壓2級(jí) 23 26.17±3.66*# 1.36±0.27*# 21.85±3.26*#高血壓3級(jí) 21 31.27±4.52*#△ 1.67±0.27*#△ 25.63±3.57*#△F值 401.898 157.795 485.729 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.3 不同甲基化狀態(tài)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平 與對(duì)照組比，完全非甲基化、部分甲基化、完全甲基化患者血漿Hcy水平均呈升高趨勢(shì)，IMT呈增厚趨勢(shì)，斑塊面積呈增大趨勢(shì)，且組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表 3。

表3 不同甲基化狀態(tài)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平比較( ±s)

表3 不同甲基化狀態(tài)原發(fā)性高血壓患者實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)水平比較( ±s)

注：與對(duì)照組比，*P＜0.05；與完全非甲基化比，▲P＜0.05；與部分甲基化比，□P＜0.05。

組別 例數(shù) Hcy(μmol/L) IMT(mm) 斑塊面積(mm2)對(duì)照組 35 5.19±0.78 0.58±0.07 1.47±0.29完全非甲基化 28 19.36±1.25* 0.99±0.18* 15.12±2.85*部分甲基化 21 25.74±2.86*▲ 1.33±0.22*▲ 18.47±3.12*▲完全甲基化 17 32.45±3.73*▲□ 1.64±0.25*▲□ 26.47±3.58*▲□F值 763.407 164.896 441.477 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 相關(guān)性分析 經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析顯示，原發(fā)性高血壓患者雌激素受體α基因甲基化狀態(tài)分別與血漿Hcy、IMT、斑塊面積水平呈正相關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（r= 0.437、0.486、0.475，均P＜0.05）。

3 討論

原發(fā)性高血壓主要是由遺傳、環(huán)境等因素導(dǎo)致體循環(huán)動(dòng)脈壓升高的一種心血管綜合征，其可導(dǎo)致心臟、血管發(fā)生功能與結(jié)構(gòu)性改變，從而對(duì)患者的生命健康與安全造成嚴(yán)重的威脅。雌激素受體α作為核受體超家族成員之一，其基因表達(dá)可受啟動(dòng)子區(qū)甲基化調(diào)控，DNA甲基化是甲基基因甲基從供體SAM轉(zhuǎn)移到DNA CpG島胞嘧啶第5位碳原子上，生成5-甲基胞嘧啶的過(guò)程。CpG島的甲基化通過(guò)改變?nèi)旧|(zhì)結(jié)構(gòu)、基因構(gòu)象、基因穩(wěn)定性等的相互作用方式，對(duì)基因表達(dá)產(chǎn)生抑制作用，因此當(dāng)雌激素受體α基因甲基化水平較高時(shí)，其表達(dá)受到抑制，易誘發(fā)原發(fā)性高血壓發(fā)生，甚至加重患者病情，導(dǎo)致高血壓級(jí)別升高[8-9]。

Hcy作為一種非蛋白組成氨基酸，當(dāng)其水平升高時(shí)，可顯著抑制機(jī)體一氧化氮合成、分泌，使其生物活性降低，嚴(yán)重?fù)p傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致體內(nèi)脂質(zhì)生理代謝紊亂，升高血脂水平，進(jìn)而誘發(fā)高血壓，且Hcy水平越高，則患者的高血壓病情越嚴(yán)重[10]。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比，高血壓2～3級(jí)患者的雌激素受體α基因甲基化占比及高血壓1～3級(jí)患者的血漿Hcy水平均呈升高趨勢(shì)，IMT呈增厚趨勢(shì)，斑塊面積呈增大趨勢(shì)，表明高血壓患者病情越嚴(yán)重，則雌激素受體α基因甲基化程度越高，同時(shí)血漿Hcy水平參與了原發(fā)性高血壓的發(fā)病過(guò)程。

此外，Hcy可影響雌激素受體α基因啟動(dòng)子的甲基化，致使mRNA表達(dá)缺失，減少雌激素合成，使其不能進(jìn)入細(xì)胞核內(nèi)發(fā)揮作用，從而導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞的抑制因素消失，并促進(jìn)斑塊的形成過(guò)程，促使IMT增厚[11]。本研究中，與對(duì)照組比，完全非甲基化、部分甲基化、完全甲基化患者血漿Hcy水平均呈升高趨勢(shì)，IMT呈增厚趨勢(shì)，斑塊面積呈增大趨勢(shì)，且組間兩兩比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明血漿Hcy水平升高能夠通過(guò)引起雌激素受體α基因啟動(dòng)子區(qū)的超甲基化，參與原發(fā)性高血壓的發(fā)生。

Hcy是甲硫氨酸循環(huán)的重要一環(huán)，可在甲硫氨酸代謝途徑中生成SAM和S腺苷同型半胱氨酸（SAH），其中SAM是包括基因甲基化在內(nèi)的體內(nèi)大多數(shù)轉(zhuǎn)甲基反應(yīng)的供體，而SAH則是甲基轉(zhuǎn)移酶強(qiáng)有力的抑制劑，兩者可參與基因的甲基化調(diào)控，因此Hcy水平升高可加重基因甲基化程度；因雌激素受體α基因甲基化程度升高，可影響部分基因的表達(dá)，易導(dǎo)致血管重構(gòu)，使得動(dòng)脈硬化，從而促使IMT增厚，斑塊面積增大，加速病情發(fā)展[12]。本研究結(jié)果顯示，甲基化狀態(tài)分別與血漿Hcy、IMT水平、斑塊面積呈正相關(guān)，表明Hcy可能通過(guò)引起雌激素受體α基因啟動(dòng)子區(qū)的超甲基化、下調(diào)甲基化基因表達(dá)，減弱雌激素的降壓作用，從而參與原發(fā)性高血壓的發(fā)生和發(fā)展，與劉松等[13]研究結(jié)果基本一致。

綜上，原發(fā)性高血壓患者病情越嚴(yán)重，則雌激素受體α基因甲基化程度越高，同時(shí)血漿Hcy水平可隨著高血壓分級(jí)、雌激素受體α基因甲基化程度的升高而升高，IMT增厚，斑塊面積增大；此外，在原發(fā)性高血壓中，甲基化狀態(tài)分別與血漿Hcy、IMT水平、斑塊面積存在正相關(guān)，但是目前相關(guān)研究報(bào)道尚不多見(jiàn)，值得臨床進(jìn)一步開(kāi)展深入研究。