綠色木霉菌株發酵液及分生孢子懸浮液對南方根結線蟲二齡幼蟲活性的影響

談韞 樊航 張紫瑤 李玉平 周曉馥

摘要：為研究綠色木霉（Trichoderma viride）菌株對南方根結線蟲（Meloidogyne incognita）二齡幼蟲（J2）活性的影響，采用不同濃度綠色木霉菌株發酵液（簡稱發酵液）和綠色木霉分生孢子懸浮液（簡稱孢子液）觸殺二齡幼蟲（J2），分別在24、36、48 h測定發酵液和孢子液對二齡幼蟲（J2）致死效果。以5%阿維菌素乳油5 000倍液和無菌水為對照，同時對幼蟲形態特征變化進行顯微觀察，探究發酵液和孢子液觸殺二齡幼蟲（J2）的原因，并通過盆栽試驗對發酵液、孢子液預防和防治南方根結線蟲的效果進行評價。結果表明，孢子液殺線過程主要依靠分生孢子的寄生作用，孢子寄生于幼蟲體腔和體壁，幼蟲活力隨著孢子生長而降低;發酵液殺線過程主要依靠綠色木霉真菌在發酵過程中產生的拮抗物質。48 h內發酵液處理和孢子液處理中幼蟲校正死亡率最高達86%和71%，均對幼蟲具有較強致死效果，高于阿維菌素對照（51%），發酵液殺線效果和作用時效均優于孢子液。在盆栽試驗中，綠色木霉發酵液和孢子液對南方根結線蟲的預防效果分別為60.00%和49.99%，防治效果分別為66.67%和47.62%，生防作用顯著。綠色木霉菌株對南方根結線蟲的生防效果研究具有很高應用價值，為生物防治植物根結線蟲病提供了良好的理論基礎和研究依據。

關鍵詞：南方根結線蟲;綠色木霉;致死效果

中圖分類號： S432.4+5文獻標志碼： A

文章編號：1002-1302（2022）12-0114-07

收稿日期：2021-09-07

基金項目：吉林省科技發展計劃（編號：20190301059NY）;中央指導地方科技發展資金吉林省基礎研究專項（編號：202002016JC）。

作者簡介：談 韞（1996—），男，甘肅蘭州人，碩士研究生，主要從事植物遺傳學研究。E-mail：554979397@qq.com。

通信作者：周曉馥，女，博士，教授，博士生導師，主要從事植物分子生物學研究。E-mail：zhouxiaofu@ jlnu.edu.cn。

根結線蟲（Meloidogyne）是一種雜食性植物病原線蟲，被列為全球十大植物寄生線蟲之首[1]。其寄主范圍廣，致病性強，在二齡幼蟲（J2）時期可寄生于植物根部通過口針吸取植物根部營養，導致植物的根部形成不均等的球狀根瘤，使植物地上部吸收營養困難，出現葉片發黃、植株矮化等問題[2-3]。根結線蟲入侵造成的傷口，使土壤中其他病原物的侵入更加容易，形成復合性病害，每年對我國農副產品造成大量減產等嚴重經濟損失[4-5]。

南方根結線蟲（Meloidogyne incognita）是墊刃目（Tylenchida）異皮科（Heteroderidae）根結線蟲屬（Meloidogyne）植物寄生線蟲，是我國分布最廣的根結線蟲之一。由于根結線蟲極難防治，目前對于南方根結線蟲的防治仍以化學手段為主，因其高毒、高污染、殘留藥物難降解等特性，部分化學藥劑被禁用或限制使用[6-7]。即使是市面最常使用的生物類殺蟲劑阿維菌素乳油，雖然能有效殺死線蟲，但過多稀釋會導致殺線效果減退，濃度過高會對人體健康和生態壞境造成影響，遠不能滿足市場的需求[8-9]。隨著綠色環保的農業發展需要，運用安全高效的生物防治手段就愈發重要，多方生物防治技術也成為將來主要防治研究方向。

木霉屬真菌（Trichodema spp.）是絲孢綱（Hyphomycetes）絲孢目（Moniliales）叢梗孢科（Moniliales）木霉屬（Trichoderma）在自然界廣泛分布的一種生防真菌，通常存在于土壤環境和植物根系[ 10]。研究發現，木霉菌對根結線蟲具有拮抗作用，可產生拮抗物質或通過寄生作用達到防治根結線蟲的效果[10-12]。綠色木霉（Trichoderma aviride）作為應用最廣的木霉菌之一，具有促進植物生長、使用安全、價格低廉等多種優點[13-14]。目前，木霉菌在對根結線蟲的生防研究方面已經取得了重要的進展，但綠色木霉對植物根結線蟲病的防治效果相關研究還不完善，本研究將對綠色木霉菌株發酵液及分生孢子懸浮液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響進行探究，進一步為綠色木霉在植物根結線蟲病防治方面提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 供試材料

綠色木霉菌株（Trichoderma viride）由吉林省植物資源科學與綠色生產重點實驗室分離鑒定保存，南方根結線蟲（Meloidogyne incognita）卵塊由農業應用技術北京市重點實驗室分離鑒定，北京農學院王紹輝教授惠贈。

1.1.1 綠色木霉分生孢子懸浮液的制備

在培養7 d綠色木霉的PDA平板上中加入5 mL無菌水充分振蕩，使綠色木霉分生孢子脫落在無菌水中，即得到綠色木霉分生孢子懸浮液（簡稱Tvs），采用血球計數板計數孢子液的濃度（濃度為1.6×107 CFU/mL），并稀釋成1.6×106 CFU/mL;3.2×105 CFU/mL;1.6×105 CFU/mL（簡稱Tvs10;Tvs50;Tvs100）3個梯度的濃度備用。

1.1.2 綠色木霉發酵液的制備

取配制好的綠色木霉孢子懸浮液2 mL加入含有100 mL PDB培養基250 mL三角瓶中，黑暗振蕩培養7 d（28 ℃，180 r/min），后采用滅菌的濾紙濾去發酵液中的菌絲團、孢子等即得到綠色木霉發酵液（簡稱：Tv），并稀釋10、50、100倍得到3個濃度（簡稱：Tv10，Tv50，Tv100）放入4 ℃冰箱，保存備用。PDB培養基配方：馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、蒸餾水1 000 mL，pH值為7。

1.1.3 南方根結線蟲的活體培養

將番茄種子（番茄品種為常豐中蔬四號）浸泡在50 ℃溫水中3～5 h，采用1% NaClO溶液消毒，洗凈后放入裝有少量溫水的培養皿中（下墊1層濾紙防止種子淹死），在28 ℃培養箱中催芽至種子露白。將露白番茄種子播種至裝有滅菌的草炭土和蛭石1 ∶1塑料缽中，待番茄發育到4～5真葉時在距離植株根部約1.5 cm處用1 mL移液器槍頭打4個約2 cm深的小孔，每孔接種1 000條南方根結線蟲二齡幼蟲。

1.1.4 南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）懸浮液的制備

挑取接種南方根結線蟲植株根系的淡黃色卵塊浸泡在1% NaClO溶液中5 min，洗凈后置于滅菌的培養皿中，加入少量無菌水，26 ℃恒溫培養箱中黑暗培養3 d，逐天收集孵化的二齡幼蟲，計數，加無菌水配制成10 000 條/mL的二齡幼蟲（J2）懸浮液，放入4 ℃冰箱保存備用。

1.2 綠色木霉發酵液和分生孢子懸浮液直接殺線作用

向滅菌的96孔細胞培養板中依次加入100 μL南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）懸浮液（1 000條）、不同濃度的綠色木霉孢子懸浮液和綠色木霉發酵液100 μL，同時設置加100 μL無菌水的空白對照和加100 μL 5%阿維菌素乳油5 000倍液對照，共10個樣本，3次生物學重復，置于26 ℃恒溫培養箱中黑暗培養，分別在24、36、48 h采用體態法（活動彎曲的線蟲代表存活，僵直的線蟲代表死亡）統計南方根結線蟲二齡幼蟲死亡情況，并校正其死亡率。

線蟲死亡率=（死亡線蟲數/供試總線蟲數）×100%;

校正死亡率=（處理線蟲死亡率-空白對照線蟲死亡率）/（1-空白對照線蟲死亡率）×100%。

1.3 盆栽試驗

1.3.1 綠色木霉發酵液和分生孢子懸浮液對南方根結線蟲的預防作用

將黃瓜種子（黃瓜品種為津研四號）播種在營養土中，待出苗后移栽至填裝無菌土的盆中，每盆無菌土2 kg，2株苗。移苗 7 d 后在黃瓜植株根系周圍施入綠色木霉發酵液（Tv）和孢子懸浮液（Tvs）15 mL，同時設置施加清水和5%阿維菌素乳油5 000倍液作為對照，共4組處理，3次生物學重復。施入綠色木霉15 d后在距離每棵黃瓜植株根部約1.5 cm處采用1 mL移液器槍頭打2個約2 cm深小孔，每孔接種1 000條南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）。接種線蟲30 d后統計根結數，計算根結減退率，評價發酵液和孢子液對南方根結線蟲的預防效果，種植期間適量補充水分。

1.3.2 綠色木霉發酵液和分生孢子懸浮液對南方根結線蟲的防治作用

移苗前處理同“1.3.1”節。移苗7 d后在距離每棵黃瓜植株根部約1.5 cm處采用1 mL移液器槍頭打2個約2 cm深的小孔，每孔接種1 000條南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）;接種線蟲15 d后在黃瓜植株根系周圍施入綠色木霉發酵液（Tv）和孢子懸浮液（Tvs）15 mL，同時設置施加清水和5%阿維菌素乳油5 000倍液作為對照，共4組處理，3次生物學重復。施入綠色木霉30 d后統計根結數，計算根結減退率，評價發酵液和孢子液對南方根結線蟲的防治效果，種植期間適量補充水分。

參考Bridge等的方法[3]對根結進行分級：0級，無根結，根系健康;1級，有不明顯的小根結，且根結之間不連接，占總根系1%～10%;2級，有明顯的小根結，有些根結之間相互連接，占總根系的11%～30%;3級，有明顯的大根結，部分側根發生畸變，占總根系31%～50%;4級，主側根出現大量根結，部分主側根發生畸變，占總根系51%～75%;5級：根結大且密集，大部分根結相互連接，多數主測根發生畸變，占總根系76%以上。

盆栽試驗時間：2021年5月6日至6月28日;試驗地點：吉林師范大學吉林省植物資源科學與綠色生產重點實驗室。

根結指數=∑（各級病株數×相對應根結分級）/（該處理組調查總株數×最高級別數）×100;

預防效果（防治效果）=（對照根結指數-處理根結指數）/對照根結指數×100%;

根結減退率=（對照組根結數-處理組根結數）/對照組根結數×100%。

1.4 數據處理

數據均運用SPSS 5.0軟件分析處理，鄧肯氏（Duncans）法進行差異顯著性檢驗（α=0.05）。

2 結果與分析

2.1 南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）在綠色木霉發酵液和孢子懸浮液中形態特征變化的分析與比較

綠色木霉發酵液和孢子懸浮液中南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）形態變化的鏡檢顯示，初期不同處理加入新孵化的幼蟲時，幼蟲活性較高，行動不受影響。由圖1可知，0～24 h分生孢子及菌液發酵物逐漸發揮作用，部分幼蟲身體逐漸僵直、行動遲緩、頭部口器和身體中發現少量孢子，身軀周圍也被少量孢子團所包圍。與孢子液處理不同，發酵液處理組中還出現大量被菌絲纏繞的幼蟲，由于菌絲纏繞致使幼蟲無法脫離，限制其活動能力。24～48 h鏡檢發現，孢子液處理中出現許多僵直死亡的幼蟲，幼蟲口器和身體內可以清晰發現大量的孢子，并且軀干中部被大量孢子包圍，一些孢子寄生于幼蟲體內和體壁上，整個蟲體還被大量孢子團和菌絲團所包裹，幼蟲身軀麻痹，生命力極低，一些寄生在幼蟲體內的孢子萌發出少量菌絲穿透體壁。發酵液處理中死亡幼蟲尾部出現溶解現象，軀干并無孢子寄生和纏繞，體內流出大量孢子和器官，蟲體相對完整。接下來72 h觀察中，孢子液處理中被孢子寄生的蟲體在寄生部位發生溶解現象，蟲體分解成斷裂的幾部分，無法保持完整形態。

綜上，綠色木霉孢子懸浮液對根結線蟲二齡幼蟲（J2）的作用主要依靠分生孢子的寄生作用，孢子從幼蟲口器進入蟲體內部，寄生于體腔，外部孢子寄生于幼蟲體壁，幼蟲活力隨著孢子生長而降低，蟲體最終也被溶解成分裂的幾段。相較于孢子懸浮液處理，發酵液處理組由于孢子和菌絲被濾除，孢子較少，死亡的幼蟲大多蟲體完整，寄生現象少，證明綠色木霉真菌在發酵過程中會產生使二齡幼蟲（J2）致死的拮抗物質，其作用發生過程中使幼蟲尾部溶解，從體腔內流出組織和體液，導致幼蟲死亡。

2.2 綠色木霉發酵液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

2.2.1 4 h不同濃度發酵液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

24 h二齡幼蟲（J2）在5%阿維菌素乳油5 000倍液對照與發酵液處理中校正死亡率分別高達36.78%和58.03%，與無菌水對照相比幼蟲死亡數顯著增大（P<0.05），證明發酵液能夠對幼蟲起到良好的致死效果，由表1可知，24 h殺線效果優于阿維菌素。

2.2.2 36 h不同濃度發酵液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

由圖2-A可知，36 h 4個濃度發酵液處理，二齡幼蟲（J2）死亡數均顯著大于無菌水處理，殺線效果顯著。幼蟲在發酵液（Tv）中校正死亡率（73.32%）顯著大于阿維菌素處理（44.84%）（P<0.05）。此時，發酵液（Tv）殺線效果遠好于5%阿維菌素乳油5 000倍液。10倍稀釋液殺線效果（45.36%）和阿維菌素對照不顯著，提示在36 h，10倍稀釋液殺線效果已和阿維菌素相近，4個濃度發酵液處理幼蟲校正死亡率Tv>Tv10>Tv50>Tv100。

2.2.3 48 h不同濃度發酵液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

由圖2-B可知，在48 h發酵液（Tv）殺線效果（86.21%）和10倍發酵液稀釋液殺線效果（73.74%）無顯著差異，提示發酵液殺線效果接近峰值。50倍和100倍稀釋液對幼蟲致死率與阿維菌素對照（50.66%）無顯著差異，二齡幼蟲（J2）校正死亡率Tv>Tv10>Tv50>CK2>Tv100，呈現明顯梯度關系，在0～100倍稀釋濃度范圍內，濃度越高殺線效果越好。

綜上，由圖3-A可知，綠色木霉發酵液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）有良好的致死作用， 校正死亡率在48 h內最高可達86%，效果要好于阿維菌素處理的51%，不同濃度的發酵液對應二齡幼蟲（J2）死亡率呈明顯的線性關系，在0～100倍稀釋濃度范圍內，幼蟲死亡率隨濃度升高而上升。

2.3 綠色木霉孢子懸浮液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

2.3.1 4 h不同濃度孢子液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

由表2可知，24 h南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）在5%阿維菌素乳油5 000倍液對照與Tvs處理（1.6×107 CFU/mL）中校正死亡率分別為36.78%和27.98%，Tvs<CK2，阿維菌素殺線效果優于孢子液。不同濃度孢子液處理中幼蟲死亡數與無菌水對照相比無顯著差異，提示在24 h不同濃度孢子液對幼蟲活性影響不顯著。

2.3.2 36 h不同濃度孢子液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

由圖4-A可知，在36 h，Tvs處理（1.6×107 CFU/mL）和Tvs10處理（1.6×106 CFU/mL）的幼蟲死亡數顯著大于無菌水對照，Tvs50 和Tvs100處理（3.2×105、1.6×105 CFU/mL）的幼蟲死亡數殺線效果顯著（P<0.05），提示在36 h不同濃度孢子液開始對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性有影響。

2.3.3 48 h不同濃度孢子液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性的影響

由4-B可知，在48 h，Tvs（1.6×107 CFU/mL）的殺線效果（70.56%）和Tvs10（1.6×107 CFU/mL）的殺線效果（70.11%）無顯著差異，顯著大于幼蟲在Tvs50（3.2×105 CFU/mL）和Tvs100（1.6×105 CFU/mL）的校正死亡率（45.09%、38.20%）（P<0.05）。幼蟲在4個濃度孢子液的校正死亡率Tvs>Tvs10>Tvs50>Tvs100，提示48 h幼蟲校正死亡率在孢子液濃度3.2×105～1.6×107 CFU/mL范圍內呈梯度關系，孢子濃度越高殺線效果越好。孢子濃度低于3.2×105 CFU/mL時對線蟲活性影響不大。

綜上，綠色木霉分生孢子懸浮液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）有良好的致死作用，校正死亡率在48 h內最高可達71%，效果要好于阿維菌素處理的51%。0～24 h幼蟲活性與孢子液濃度無關，24～48 h 幼蟲死亡率在孢子濃度 3.2×105～1.6×107 CFU/mL 范圍內呈梯度關系，隨著濃度升高，對線蟲致死率越高。

2.4 綠色木霉發酵液和孢子懸浮液觸殺南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）作用時效分析

2.4.1 發酵液觸殺南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）作用時效分析

由圖5-A可知，在0～48 h相同濃度發酵液處理下，二齡幼蟲（J2）校正死亡率隨時間增長呈明顯上升趨勢，在48 h達到各個處理最高值。0～24 h內二齡幼蟲（J2）在綠色木霉發酵液（Tv）處理中校正死亡率增長最高，致死效果最強;24～48 h內校正死亡率增長平穩上升，趨于平緩。10、50、100倍稀釋液在0～24 h 對二齡線蟲（J2）致死效率增長低于24～48 h，發酵液濃度越低在 0～48 h內對二齡幼蟲（J2）致死效率增長越緩慢，可能是由于發酵液濃度越低導致對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）活性產生影響的拮抗物質越少，對二齡幼蟲（J2）致死作用發揮時間越長。在 48 h 發酵液（Tv）和10倍稀釋液對二齡幼蟲（J2）活性影響無顯著差異，提示在48 h綠色木霉發酵液對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）的活性影響已接近峰值（86.21%）。

2.4.2 孢子液觸殺南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）作用時效分析

由圖5可知，在0～24 h，相同濃度孢子液處理下二齡幼蟲（J2）校正死亡率隨時間的增長呈緩慢上升趨勢，24～36 h內二齡幼蟲（J2）在Tvs（1.6×107 CFU/mL）和Tvs10（1.6×106 CFU/mL）中校正死亡率增長最高，孢子液在此時段對幼蟲觸殺效果最好。36～48 h二齡幼蟲（J2）在Tvs10（1.6×106 CFU/mL）和Tvs（1.6×107 CFU/mL）中校正死亡率無顯著差異，且在Tvs（1.6×107 CFU/mL）中校正死亡率保持較高水平，提示48 h孢子液對二齡幼蟲（J2）觸殺效果達到頂峰（70.56%）。可能是由于綠色木霉孢子對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）寄生作用主要是發生在24～36 h，在此時段，效果最好。

2.5 綠色木霉發酵液和孢子懸浮液對南方根結線蟲盆栽試驗的預防效果

由表3可知，在盆栽預防試驗中，清水對照處理的黃瓜植株根結大、數量多，密集分布于整個根系，根系粗糙，平均根結數為153.67個，顯著高于其他處理組，綠色木霉發酵液和孢子液處理的黃瓜植株根系潔白，較光滑，根結小且數量少，平均根結數量為30.00個和34.00個，兩者的根結指數（33.33和41.67）相較于清水對照顯著降低。發酵液和孢子液對南方根結線蟲的預防作用明顯，預防效果分別達60.00%和49.99%，均高于阿維菌素對照處理的45.00%，且2個處理中根結減退率分別為79.38%和77.48%，高于阿維菌素對照（66.13%），提示綠色木霉發酵液和孢子懸浮液能夠對根結線蟲起到良好的預防作用，且效果略優于阿維菌素。

2.6 綠色木霉發酵液和孢子懸浮液對南方根結線蟲盆栽試驗的防治效果

由表4可知，在盆栽防治試驗中，清水對照處理的黃瓜植株根系根結大而密，遍布整個根系，占整體根系約70%，平均根結數為167.67個，顯著高于其他處理組（P<0.05），被嚴重侵染，綠色木霉發酵液處理的黃瓜植株根系光滑潔白，根結小且數量少，僅占整個根系的10%，平均根結數量為29.00個，顯著少于清水對照和阿維菌素對照（73.67）（P<0.05），根結指數為29.16，提示受線蟲侵染程度較輕。發酵液和孢子液對南方根結線蟲的防治作用顯著，防治效果分別達66.67%和47.62%，高于阿維菌素對照處理的38.09%，且2個處理中根結減退率分別為66.21%和60.02%，高于阿維菌素對照（54.97%），提示綠色木霉發酵液和孢子懸浮液能夠對根結線蟲起到良好的防治作用，發酵液顯著優于阿維菌素，而孢子液和阿維菌素防效相當。阿維菌素防治效果偏低原因可能是稀釋倍數過大，導致防效不理想。

3 結論與討論

木霉屬真菌作為自然界廣泛存在具有生防作用的真菌，在農業、植物病蟲害防治和環境治理領域具有廣闊應用前景[12]。研究表明，木霉菌對根結線蟲具有多方面生防機制，Sahebani等研究發現，木霉菌可產生可揮發抗生物質從而起到生防作用[15];Sharon等發現，綠色木霉可產生拮抗物質殺死根結線蟲[16];Mallikharjuna等和Smith等研究表明，綠色木霉通過產生幾丁質酶等細胞壁降解酶從而寄生于根結線蟲蟲卵或幼蟲體內[17-18]。本研究中，綠色木霉菌株發酵液和孢子懸浮液均可快速高效地殺死南方根結線蟲二齡幼蟲（J2），48 h內線蟲減退率分別達到86%和71%，進一步證明綠色木霉菌株具有穩定的防治效果。同時，通過對比發現，綠色木霉菌株發酵液和孢子懸浮液與5%阿維菌素乳油 5 000 倍液的防治效果存在顯著差異，可能原因是阿維菌素稀釋倍數過大，導致對線蟲的致死效果未達到預期效果。在試驗過程中還通過鏡檢觀察了綠色木霉分生孢子對南方根結線蟲二齡幼蟲（J2）的寄生作用和綠色木霉菌液發酵物對二齡幼蟲（J2）的拮抗作用，對二齡幼蟲（J2）不同時間段不同處理顯微鏡下形態特征變化進行觀察分析，為綠色木霉對根結線蟲的寄生作用和拮抗作用提供佐證。通過綠色木霉發酵液和孢子懸浮液對南方根結線蟲的預防和防治盆栽試驗，進一步證明了綠色木霉在植物生長過程中對南方根結線蟲的生防作用十分顯著，綠色木霉發酵液和孢子液對南方根結線蟲的預防效果分別為60.00%和49.99%，防治效果分別為66.67%和47.62%，具有穩定的防治效果。

綠色木霉大規模開發應用尚存在許多難題，如綠色木霉生長和繁殖受環境因素影響較大，產生的拮抗物質濃度較低、純化困難等。因此，利用基因工程提高綠色木霉對不利環境的適應性成為研究熱點，可為大規模應用綠色木霉提供保障。針對綠色木霉生物功能的開發尚不全面，未來仍需進一步進行研究。

參考文獻：

[1]翟明娟，李登輝，馬玉琴，等. 綠色木霉菌株Tvir-6對黃瓜根結線蟲的防治效果研究[J]. 中國蔬菜，2017（10）：67-72.

[2]盧樹昌，劉慧芹，王小波，等. 幾種藥劑對土壤根結線蟲的防效及對番茄根系生理性狀的影響[J]. 湖北農業科學，2012，51（1）：70-73.

[3]曾 立，程萬里，余 豪，等. 多黏類芽孢桿菌KM2501-1發酵液對番茄根結線蟲的防治效果[J]. 應用與環境生物學報，2020，26（5）：1046-1050.

[4]張樹武，徐秉良，薛應鈺，等. 長枝木霉T6菌株對黃瓜南方根結線蟲的防治及其根際定殖作用[J]. 應用生態學報，2016，27（1）：250-254.

[5]范亞磊，趙 敏，鄧 晟，等. 侵染江蘇獼猴桃的北方根結線蟲（Meloidogyne hapla）形態學描述和分子特征分析[J]. 江蘇農業學報，202 37（1）：75-82.

[6]李 通，毛維興，薛應鈺，等. 綠色木霉B3菌株發酵液殺線活性分析及其穩定性測定[J]. 西北農業學報，2019，28（9）：1535-1542.

[7]劉 霆，王 莉，段玉璽，等. 綠色木霉對北方根結線蟲的作用[J]. 江西農業大學學報，2007，29（4）：566-569.

[8]許 迪，潘竟林，劉萬強，等. 多殺菌素、阿維菌素乳油和高效氯氰菊酯3種農藥對環境生物的安全性評價[J]. 生態毒理學報，2013，8（6）：897-902.

[9]傅 強. 阿維菌素與甲維鹽的穩定性及農田環境安全性評價研究[D]. 長沙：湖南農業大學，2013.

[10]程麗云.木霉菌（Trichoderma spp.）的種類鑒定及生防菌株的篩選[D]. 福州：福建農林大學，2007.

[11]張樹武，徐秉良，薛應鈺，等. 長枝木霉對南方根結線蟲致死和寄生作用的顯微觀察及測定[J]. 植物保護，2013，39（4）：46-51.

[12]賀 超，王文全，侯俊玲. 綠色木霉對生物降解和生物防治的影響機理與應用研究進展[J]. 微生物學雜志，2019，39（3）：122-128.

[13]劉 暢，張欣玥，蔡汶妤，等. 綠色木霉與哈茨木霉對黃瓜幼苗促生作用機理的研究[J]. 江蘇農業科學，2020，48（16）：156-160.

[14]王禹佳，武 佶，李享，等. 發根農桿菌與綠色木霉對玉米幼苗根系生長的影響[J]. 江蘇農業科學，2020，48（15）：112-117.

[15]Sahebani N，Hadavi N.Biological control of the root-knot nematode Meloidogyne javanica by Trichoderma harzianum[J]. Soil Biology and Biochemistry，2008，40（8）：2016-2020.

[16]Sharon E，Chet I，Viterbo A，et al. Parasitism of Trichoderma on Meloidogyne javanica and role of the gelatinous matrix[J]. European Journal of Plant Pathology，2007，118（3）：247-258.

[17]Mallikharjuna R K L N，Raju K S，Ravisankar H. Cultural conditions on the production of extracellular enzymes by Trichoderma isolates from tobacco rhizosphere[J]. Brazilian Journal of Microbiology，2016，47（1）：25-32.

[18]Smith A，Beltrán C A，Kusunoki M，et al. Diversity of soil-dwelling Trichoderma in Colombia and their potential as biocontrol agents against the phytopathogenic fungus Sclerotinia sclerotiorum （Lib.） de Bary[J]. Journal of General Plant Pathology，2013，79（1）：74-85.