CK5/6及EGFR在IBC分子分型中表達及相關性

吳震宇 趙娟 (蘭溪市人民醫院病理科，浙江 金華 321100)

乳腺癌是女性最為常見的惡性腫瘤之一，具有高度異質性。最近幾年乳腺癌的發病率與死亡率均呈快速升高趨勢，并在女性腫瘤中始終占有首要位置〔1〕。有學者指出〔2〕，腋淋巴結轉移情況、腫瘤大小、分級等對乳腺癌的預后有重要影響。同樣有研究認為〔3〕在治療乳腺癌的過程中應重視分子情況，能夠提高乳腺癌的臨床療效。國際共識認為可以通過免疫組化法將浸潤性乳腺癌(IBC)分為4個亞型，包括人表皮生長因子受體(HER)-2過表達型、Luminal A型、Luminal B型及三陰型〔4〕?；讟尤橄侔?BLBC)屬于三陰型乳腺癌(TNBC)的一種，且BLBC具有侵襲性強、惡性度高、預后差等特點〔5〕。細胞角蛋白(CK)5/6是一種基底型細胞角蛋白。本研究旨在檢測CK5/6、表皮生長因子受體(EGFR)、雌激素(ER)、HER-2、孕激素(PR)、Ki67在IBC組織中的表達及其在IBC診斷和治療的影響。

1 資料與方法

1.1一般資料 采集2017年1月1日至2020年12月31日于蘭溪市人民鋒院就診的180例IBC患者的標本。患者年齡60～79歲，平均(69.73±5.68)歲，中位年齡63歲。60～63歲55例，64～79歲125例。所有患者在接受手術前未接受過其他方法治療。參照2019年世界衛生組織(WHO)頒布的女性生殖系統乳腺和腫瘤的相關診斷標準〔6〕，其中82例腫瘤最大徑<2 cm，98例≥2 cm。參照Elston&Ellis法〔7〕組織學分級標準，18例組織分級Ⅰ級，94例Ⅱ級，68例Ⅲ級；參照2019 St．Gallen國際共識中通過免疫組化法對乳腺癌進行分子分型的標準進行劃分〔8〕：Luminal A型是指HER-2陰性與Ki-67增殖指數低于30%，ER陽性超過1%，PR陽性超過20%；Luminal B型存在兩種情況，一種是PR、ER均為陽性，HER-2陰性，Ki-67增殖指數超過30%；另一種是PR、ER均為陽性，HER-2陽性，Ki-67增殖指數無其他要求；HER-2過表達型即是指PR與ER為陰性，HER-2為陽性。三陰型是指PR、ER、HER-2三者均為陰性。本研究所有的標本由醫院工作經驗豐富的醫生進行及Ki-67閱片。

1.2方法 CK5/6、EGFR、Ki-67均為北京中杉金橋公司產品，PR、ER、HER-2及En Vision均為羅氏公司產品。本研究所有標本首先用10%甲醛進行固定，再使用石蠟將其包埋處理，隨后將其切成4 μm厚的組織切片，行蘇木素-伊紅(HE)染色、光鏡觀察。采用EnVision兩步法進行免疫組化染色，采用自動組化儀進行抗原修復。將所有的病理切片設兩組進行對照分析。ER、PR以子宮內膜作為參照，HER-2以乳腺癌患者的病理標本作為參照，Ki-67、EGFR采用闌尾炎患者作為參照，CK5/6以正常的乳腺組織為參照。

陽性結果判斷 ER和PR陽性主要表現為在IBC細胞核中有陽性著色出現；HER-2陽性主要表現為顯現出較強陽性著色的浸潤性癌細胞膜的數量在10%以上；CK5/6陽性主要表現為腫瘤細胞胞質上有陽性著色出現；EGFR陽性表現為腫瘤細胞胞質和胞膜上均有陽性著色。陽性細胞是指當抗體在腫瘤細胞表達中，細胞膜、細胞核及細胞質出現棕色顆粒。切片中的陽性細胞數量超過10%為陽性。Ki-67、PR、ER的陽性表達于細胞核中。參照《中國臨床腫瘤學會乳腺癌診療指南 2018》〔9〕中的相關診斷標準。1%是PR和ER的陽性臨界值；HER-2陽性(3+)是指腫瘤細胞呈現數量超過10%細胞膜環周強著色；HER-2不確定(2+)是指超過10%的完整細胞膜環周著色程度一般或著色程度較強的細胞膜環周數量低于10%；HER-2陰性(1+)是指超過10%的不完整細胞膜著色程度較弱；沒有出現著色或呈現微弱的不完整細胞膜的數量低于10%為0，1+和0均屬于陰性。對HER-2經免疫組化最后評分結果為2+的患者進行熒光原位雜交，檢測HER-2基因是否出現增殖情況，根據檢測結果再將HER-2進行分組。采用免疫組化法對CK5/6和EGFR進行染色處理，若沒有出現著色定義為陰性；著色程度弱到強的癌細胞數量在20%及以下為弱陽性；著色程度較強的浸潤癌細胞數量超過20%為強陽性。

1.3統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行Kruskal-Wallis秩和檢驗、χ2檢驗及Pearson相關性分析。

2 結 果

2.1IBC組織學分類情況 180例IBC患者中，非特殊類型IBC(IBC-NST)165例(91.67%)，其中經典型IBC-NST 157例，變異形態IBC-NST 8例；另有15例(8.33%)特殊類型IBC。180例IBC中，37例TNBC，143例非三陰型乳腺癌(N-TNBC)。見表1。

表1 IBC組織學分類情況〔n(%)〕

2.2CK5/6、EGFR在各類分子分型中的表達情況 180例IBC中包括47例(26.11%)Luminal A型；66例(36.67%)Luminal B型，Luminal B型中有48例(26.67%)Luminal B型HER-2陰性型，18例(10.00%)Luminal B型HER-2陽性型；30例(16.67%)HER-2過表達型；37例(20.56%)TNBC。180例IBC中CK5/6陽性率為13.89%(25/180)，其中有12例呈弱陽性，13例呈強陽性；EGFR陽性率為28.89%(52/180)，其中23例呈弱陽性，29例呈強陽性，兩者共陽性率為10.56%(19/180)。37例TNBC中，CK5/6陽性率為43.24%(16/37)，其中7例呈弱陽性，9例呈強陽性；EGFR陽性率為62.16%(23/37)，8例呈弱陽性，15例呈強陽性；CK5/6和EGFR均為陽性的比率為35.14%(13/37)。143例N-TNBC中，CK5/6陽性率為6.29%(9/143)，其中5例呈弱陽性，4例呈強陽性；EGFR陽性率為20.28%(29/143)，其中16例呈弱陽性，13例呈強陽性；CK5/6和EGFR均為陽性的比率為4.20%(6/143)。CK5/6、EG-FR在TNBC中的陽性率及共陽性率均比在N-TNBC中的更高(P<0.01)。CK5/6、EGFR在TNBC中的共陽性率顯著高于其他4種分子分型中的陽性率(P<0.05)，見表2。

2.3CK5/6、EGFR的表達與疾病臨床病理特征的關系 在IBC-NST中，CK5/6的陽性率為13.33%(22/165)，EGFR的陽性率為29.09%(48/165)，兩者共陽性率為10.91%(18/165)；在特殊類型IBC中，CK5/6的陽性率為20.00%(3/15)，EGFR的陽性率為26.67%(4/15)，兩者共陽性率為6.67%(1/15)。CK5/6與EGFR的表達在IBC、TNBC和IBC-NST的組織學分級中均存在相關性(P<0.01)。CK5/6、EGFR表達在Ⅲ級腫瘤中的表達率明顯比Ⅰ級、Ⅱ級更高(P<0.01)。見表3。通過進一步分析發現，EGFR在IBC中的表達與PR、ER、HER-2、Ki-67表達均有相關性(P<0.01)，CK5/6的表達與PR、ER、Ki-67表達有相關性(P<0.01)。見表3。

表2 CK5/6、EGFR在各類分子分型中的表達情況〔n(%)〕

表3 CK5/6、EGFR陽性表達與IBC病理特征的關系(n)

2.4TNBC病理特征與CK5/6、EGFR表達的關系 CK5/6在年齡間的表達有明顯差異(P<0.05)，EGFR在不同年齡組間的表達無明顯差異(P>0.05)。CK5/6和EGFR表達均與Ki-67高表達有相關性(P<0.05)。見表4。對37例IBC-NST進一步分析發現，EGFR與組織學分級無關，CK5/6與TNBC組織學分級有相關性，CK5/6在Ⅲ級腫瘤中的陽性率明顯比Ⅰ級、Ⅱ級更高(P<0.05)。

表4 TNBC臨床病理特征與CK5/6、 EGFR陽性表達的關系(n)

3 討 論

乳腺癌是一種涉及多種信號通路且具有極度異質性的疾病，該疾病的分子特征較為獨特，不同分子亞型的內在特征會影響疾病發展和預后效果，因此腫瘤生物學的關鍵信息對治療乳腺癌有至關重要的作用〔10〕。近年來，隨著分子生物技術的快速發展，人們對乳腺癌的分子特征有了更進一步地了解，乳腺癌分子分型被廣泛應用于治療乳腺癌疾病中，從而幫助患者進行個性化生物靶向治療，改善預后效果〔11〕。PR、ER、HER-2、Ki67是目前公認的分子。而不同分子分型不同，IBC治療方案也存在一定差異〔12〕；針對Luminal A型主要采用內分泌療法；Luminal B型HER-2陰性型會在Luminal A型治療的基礎上給予相應化療手段；Luminal B型HER-2陽性型會在給予相應的HER-2治療方法；HER-2過表達型通常采用化療與HER-2相結合的治療方法。本實驗結果與Line等〔13〕研究結果相似。

CK5/6是一種能夠在乳腺定向干細胞、肌上皮中間細胞、腺中間細胞表達的基底細胞型細胞角蛋白，但其不能夠在腺上皮和肌上皮終端細胞進行表達。而定向干細胞是普通乳腺增生主要特征，因此CK5/6在期間常呈陽性表達，而CK5/6在大多數的浸潤性導管癌中均呈陰性表達，因此CK5/6可作為區分乳腺增生類型的重要參考數據〔14，15〕。EGFR是一種跨膜酪氨酸激酶，EGFR能與表皮生長因子(EGF)、雙調蛋白(AR)及轉化生長因子(TGF)2α結合，形成異源或同源二聚體，從而激活自身活性，與其下游含PTB和SH2區域的蛋白相結合，幫助細胞從G1期到S期的過渡。EGFR在疾病發生和發展過程中起重要作用〔16,17〕。有研究顯示〔18〕，EGFR在浸潤性腫瘤中呈高表達狀態。有研究報道〔19〕，CK5/6和EGFR陽性在IBC中的惡性程度高，臨床上的預后效果更差。CK5/6、EGFR在TNBC中的陽性率和共陽性率均明顯比在N-TNBC中更高，CK5/6和EGFR在TNBC中表達均與Ki-67有相關性。而Ki67是一種能夠反映腫瘤增殖率的典型細胞增殖性核蛋白，在增殖細胞中呈高表達。本研究結果表明，CK5/6、EGFR表達和腫瘤的惡性程度有關。CK5/6、EGFR表達可作為患者治療和預后的重要參考標準。本實驗結果，表明EGFR同樣能夠成為IBC患者預后的重要參數。有研究指出〔20〕，可以通過熒光原位雜交、免疫組化方法檢測PR、ER及HER-2水平來對TNBC進行診斷。本研究結果表明了CK5/6可作為TNBC預后的重要參數。高級別TNBC主要有組織學分級為Ⅲ級的IBC-NST，鱗狀細胞化生性癌、大汗腺癌、伴軟骨肉瘤分化的化生性癌、梭形細胞化生性癌等。低級別TNBC包括腺樣囊性癌、低級別纖維瘤病樣化生性癌、多形態癌、分泌性癌、低級別腺鱗癌等。有研究指出〔21〕，多數高級別TNBC預后較差，但也有極少數高級別TNBC預后效果較好，與本文結果相似。

綜上，乳腺癌檢測CK5/6及EGFR與PR、ER、HER2的表達相結合，對IBC預后具有重要的參考價值，TNBC的腫瘤患者術后預后較差。