酸棗仁湯對帕金森病抑郁大鼠行為學及腦內5-HT表達的影響

黃忠明 (達州中醫藥職業學院，四川 達州 635000)

帕金森病抑郁(PDD)是帕金森病(PD)常見的非運動癥狀之一，可能會加重PD患者認知功能損害及運動功能障礙程度，但PDD病情隱匿，容易被忽視，患者可能面臨殘疾、生活質量降低等風險〔1,2〕。因此，PDD患者實施科學有效的治療措施十分必要。以往西醫治療PDD主要通過左旋多巴、氟西汀等西藥治療，雖然可在一定程度上改善患者臨床癥狀，但經臨床實踐發現，單純西藥治療往往需要長期服藥，價格昂貴，患者接納度不高，且西藥長期應用副作用較大，依賴性強，容易產生一系列不良反應，應用受限〔3〕。隨著中醫理論不斷發展，中醫藥近年不斷被用于PDD治療中，并取得一定效果。中醫認為，PDD屬于“顫證”合并“郁證”范疇，肝腎陰虛、氣機阻滯、脾失健運等是其重要病機，治療應以疏肝解郁、清熱除煩等為主〔4〕。酸棗仁湯是一種安神劑，多被用于治療神經衰弱、心肝血虛者，具有養血安神、清熱除煩等功效〔5〕。研究發現，酸棗仁湯用于抑郁患者中可改善患者癥狀，提高其睡眠質量〔6〕。但目前關于酸棗仁湯治療PDD具體作用機制尚未闡明，相關研究較少，本研究通過建立PDD大鼠模型，對其實施酸棗仁湯治療，觀察酸棗仁湯對PDD大鼠行為學及腦內5-羥色胺(5-HT)表達的影響。

1 資料與方法

1.1實驗動物 選取SPF級的健康雄性SD大鼠50只，均由湖北實驗動物研究中心提供，大鼠均飼養于恒溫動物房內，每12 h晝夜交替1次，保證大鼠可自由飲水及進食飼料；50只SD大鼠周齡6～13 w，平均(8.15±0.57)w；體重0.15～0.35 kg，平均(0.25±0.03)kg。

1.2方法

1.2.1主要藥品與試劑 氟西汀膠囊購自蘇州中化藥品工業有限公司，國藥準字H20064844，規格：20 mg/粒，用蒸餾水配制成0.18 mg/ml藥液；酸棗仁湯由解放軍總醫院中藥房提供，藥物組成：酸棗仁15 g、甘草3 g、知母6 g、茯苓6 g、川芎6 g，先用水浸泡約30 min，再武火、文火分別煎煮30 min、20 min，濾出藥液，再加水煎煮，濾出藥液，將2次藥液混勻制成濃縮液；5-HT、去甲腎上腺素(NE)、神經肽(NP)Y等檢測試劑盒均購自美國Sigma公司；6-羥多巴胺購自美國Sigma公司。

1.2.2主要儀器與設備 常州普天儀器制造有限公司提供的TD-5M型離心機；美國Agilent公司提供的HP1100型高效液相色譜儀；天津斯維科科技公司提供的電子秤；STOELTING公司提供的腦立體定位儀；北京光明儀器廠提供的勻漿器；北京軍事科學院提供的QL21型動物旋轉監測儀。

1.2.3大鼠分組及藥物干預方法 大鼠進行常規適應性飼養1 w后，隨機選擇其中10只大鼠作為空白對照組，剩余40只大鼠建立PDD模型，建模成功后隨機分為4組，每組各10只，分別為：模型組、氟西汀組、中藥(酸棗仁湯)高劑量組、中藥低劑量組；氟西汀組實施鹽酸氟西汀3 mg/kg干預；中藥高劑量組、中藥低劑量組分別給予9.90 g/(kg·d)、2.48 g/(kg·d)體重灌服酸棗仁湯(給藥體積：每100 g體重給予1.0 ml)；空白對照組、模型組均給予等體積的生理鹽水灌服；連續灌胃2 w。

1.2.4建立PDD模型 用10%水合氯醛對大鼠麻醉，固定于腦立體定位儀，參考腦立體圖譜，顱骨鉆孔，向大鼠左側紋狀體緩慢注射6-羥多巴胺液5 μg/μl，縫合皮膚，術后常規預防感染；術后2 w注射阿樸嗎啡，誘導大鼠旋轉，記錄每5 min大鼠向健側旋轉的次數及40 min內旋轉總次數，陽性判定：≥7圈/min，40 min總旋轉次數≥280圈；1次/w，連續測量4 w陽性大鼠為PD合格模型。PD建模成功后，利用慢性不可預見性溫和應激法制作PDD模型：禁食禁飲24 h、4℃冷水游泳5 min、關閉在潮濕鼠籠中24 h、熱烘、通宵照明、夾尾10 min、束縛8 h、電擊足底、晝夜顛倒；每日隨機選擇一種刺激方式，每種方式不可聯系使用，持續21 d。

1.3觀察指標的檢測

1.3.1行為學檢測 ①懸尾試驗：選擇適宜高度的橫桿，將大鼠尾巴固定于桿上，使其距地面約1.5 m，記錄大鼠5 min內靜止時間(大鼠四肢、頭部不動時身體晃動時間)；②糖水偏愛測試：大鼠禁食禁飲24 h后進行實驗，同時給予大鼠200 ml 1%蔗糖水、純凈水各1瓶，24 h后測量糖水消耗情況，計算糖水偏愛率=糖水消耗/液體總計消耗×100%；③強迫游泳實驗：將大鼠放置在24℃左右的透明水缸內，游泳6 min，觀察并記錄后4 min大鼠漂浮不動時間，每次實驗后需換水，避免對實驗產生影響。

1.3.2血清NPY、腦內5-HT、NE等表達檢測 ①治療2 w且行為學檢測結束，10%水合氯醛麻醉后，取大鼠腹主動脈血2 ml，以3 000 r/min速率離心15 min，取血清，置于冰凍環境下保存待檢，采用酶聯免疫吸附試驗測定血清NPY水平，操作遵照說明書嚴格進行。②上述取血操作后，立即斷頭處理，取出大腦稱重，置于冰袋上分離大腦，取前額葉皮質組織，放入勻漿器中勻漿，低溫離心，以12 000 r/min速率離心20 min，取上清液，采用高效液相電化學檢測腦內5-HT、NE色譜，計算各指標含量。

1.4統計學方法 采用SPSS20.0軟件進行單因素方差分析、SNK-q檢驗。

2 結 果

2.1各組行為學檢測結果比較 與空白對照組比較，其余4組懸尾靜止、游泳不動時間均顯著升高，糖水偏愛率顯著降低(P<0.05)；氟西汀組、中藥低劑量組、中藥高劑量組懸尾靜止、游泳不動時間顯著低于模型組，糖水偏愛率顯著高于模型組，中藥低劑量組、中藥高劑量組懸尾靜止、游泳不動時間顯著低于氟西汀組，糖水偏愛率顯著高于氟西汀組，且中藥高劑量組懸尾靜止、游泳不動時間顯著低于中藥低劑量組，糖水偏愛率顯著高于中藥低劑量組(均P<0.05)。見表1。

表1 各組行為學檢測及腦內5-HT、NE水平比較

2.2各組血清NPY水平比較 空白對照組、模型組、氟西汀組、中藥低劑量組、中藥高劑量組血清NPY平均水平分別為(32.96±2.24)、(13.25±2.14)、(16.58±2.41)、(22.69±3.02)、(27.45±2.77)ng/ml；與空白對照組比較，其他4組血清NPY水平顯著降低(P<0.05)；但氟西汀組、中藥低劑量組、中藥高劑量組血清NPY水平顯著高于模型組，中藥低劑量組、高劑量組血清NPY水平顯著高于氟西汀組，且中藥高劑量組血清NPY水平顯著高于中藥低劑量組(P<0.05)。

2.3各組腦內5-HT、NE表達比較 與空白對照組比較，其他4組腦內5-HT、NE表達顯著降低(P<0.05)；氟西汀組、中藥低劑量組、高劑量組5-HT、NE表達顯著高于模型組，中藥低劑量組、高劑量組5-HT、NE表達顯著高于氟西汀組，且中藥高劑量組5-HT、NE表達顯著高于中藥低劑量組(P<0.05)。見表1。

3 討 論

PD多發生于老年群體，因黑質多巴胺能神經元丟失導致患者腦內多巴胺分泌降低，使得5-HT釋放減少，進而出現抑郁癥狀，發展為PDD〔7〕。據報道，PDD發病率高達35%～40%〔8〕。PDD可發生在疾病各個時期，不僅加重患者運動功能障礙，還嚴重影響其生存質量，甚至威脅生命安全〔9〕。因此，對PDD患者實施安全有效治療方案至關重要。

以往西醫治療PDD多采用藥物聯合方式，主要以改善臨床癥狀為主，可在一定程度上提高患者生存質量，但藥物長期應用副作用較明顯，難以達到預期效果，應用受限〔10〕。中醫理論認為，PDD屬于“顫證”合并“郁證”范疇，“顫證”病機主要是肝腎陰虛、虛風內動，久則肝失疏泄，氣機阻滯，發展成為“郁證”，該病始發于肝，并發于脾，最終上擾腦神，治療以疏肝理氣、清熱除煩等為主〔11〕。酸棗仁湯是一種安神劑，主治肝血不足、虛煩失眠證，方中含酸棗仁、知母、川芎、甘草等成分，其中酸棗仁為君藥，具有養肝、安神等作用；茯苓、知母可寧心安神、清熱除煩，共為臣藥，川芎可調肝理氣，為佐藥；甘草調和各藥，為使藥，諸藥為伍，共奏養血除煩、安神等功效〔12〕。研究發現，酸棗仁湯具有鎮靜催眠的作用〔13〕。

5-HT是一種抑制性神經遞質，PDD發病與5-HT水平的異常代謝存在密切聯系。研究發現，5-HT水平異常降低是PDD發病基礎，且其水平變化與患者抑郁程度、認知功能障礙程度呈正相關〔14〕。NE也是一種神經遞質，據報道，NE水平異常下降提示PD患者可能并發抑郁風險，被證實與PD及抑郁癥發生及發展有關〔15〕。NPY是一種神經活性肽，大量存在于大腦皮質及下丘腦中，在情感障礙發生及發展中發揮一定作用〔16〕。研究發現，NPY在抑郁癥患者中水平顯著降低，且在抑郁癥自殺患者中水平下降更為明顯，NPY與抑郁癥程度存在一定聯系〔17〕。本研究結果說明酸棗仁湯治療PDD大鼠可促進腦組織NPY的釋放，增加5-HT、NE等神經遞質含量。分析其原因可能為，酸棗仁湯高劑量可顯著提高大鼠腦內神經營養家族相關成員表達，如腦源性神經營養因子及其特異性受體，進而促進神經元生存，提高腦內神經遞質因子釋放，達到抗抑郁作用〔18〕。此外，本研究結果說明酸棗仁湯可改善PDD大鼠行為學狀況，這可能與酸棗仁湯通過提高5-HT、NE、NPY等因子釋放，達到抗抑郁效果，進而改善大鼠行為學有關。

綜上，酸棗仁湯可顯著改善PDD大鼠行為學異常，促進大鼠血清DPY釋放，增加5-HT、NE含量，應用價值高。