G6PD 活性檢測在地中海貧血診斷中的臨床價值

羅秀霞，沈誠

（1.東莞市人民醫院 檢驗科，廣東 東莞 523000；2.東莞市橫瀝鎮人民醫院 檢驗科，廣東 東莞 523000）

0 引言

地中海貧血（簡稱地貧）主要是由于體內珠蛋白合成異常而引起的遺傳性溶血性疾病。在臨床上由于輕型地貧、靜止型地貧的臨床表現隱匿，致使本病漏診率高。因此，為了提高出生人口質量，減少地貧特別是重型地貧兒出生，尋找操作簡單、有效的初篩客觀指標至關重要。以往臨床常應用紅細胞參數，如平均紅細胞血紅蛋白量、平均紅細胞體積等對地貧進行初篩，但臨床實踐發現該指標的診斷效果并未能達到預期理想[1]。葡萄糖-6-磷酸脫氫酶（G6PD）為紅細胞進行糖代謝磷酸己糖旁路中的一個關鍵脫氫酶，其能夠在糖代謝中產生NADPH以對紅細胞巰基氧化發生保護作用[2]。而當有地貧發生時，機體內珠蛋白生成受到阻礙，未能被匹配到的珠蛋白有剩余可在紅細胞內形成不穩定的聚集物，積聚到紅細胞膜表面，造成氧化損傷，G6PD含量代償性升高[3]。另外，G6PD的活性存有一定的胞齡性，在年輕紅細胞中的活性相對較高，但是地貧為溶血性貧血的一種，其紅細胞壽命短，故年輕紅細胞中含有G6PD的活性較高[4]。由此可見，地貧患者中含有的G6PD活性較高。然而，關于G6PD活性檢測在地貧診斷及嚴重程度判斷中的應用報道較為少見。為此，本研究開展對照試驗，以進一步明確G6PD活性檢測在地中海貧血診斷中的臨床價值，具體論述如下。

1 資料和方法

1.1 一般資料

選擇2019年10月-2020年12月在東莞市橫瀝鎮人民醫院行G6PD活性檢測的200例受檢者，根據其健康狀況或疾病類型分為健康體檢組（n=20）、地貧組（n=138）、缺鐵貧血組（n=42）。健康體檢組中有男8例，女12例；年齡18～64歲，平均（45.20±8.24）歲。地貧組中有男46例，女92例；年齡20～60歲，平均（45.96±7.88）歲；病程1～5年，平均（2.89±0.51）年。缺鐵貧血組有9例男，33例女；年齡18～65歲，平均（46.01±7.25）歲；病程1～6年，平均（2.82±0.60）年。三組性別、年齡等一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），地貧組與缺鐵貧血組的病程比較差異無統計學意義（P>0.05），有可比性。本研究獲得醫學倫理委員會審批同意。

納入標準：①地貧組患者均經血常規、地貧基因檢測確診為地貧；②缺鐵貧血組患者均經血常規、血清鐵蛋白檢測確診為缺鐵性貧血；③健康體檢組的研究對象血常規、血清鐵蛋白檢測均無異常；④各組研究對象均未服用影響本研究結果的藥物或患有疾病；⑤自愿接受檢測，簽訂了同意書。排除標準：①患有嚴重心肺肝腎臟器疾病、急性感染性疾病等需立即進行治療的疾病；②患有G6PD缺乏癥。

1.2 G6PD活性檢測

（1）樣本采集：地貧組、缺鐵貧血組患者在進行G6PD活性檢測前1天22:00后停止服用藥物。抽取三組研究對象的肘靜脈血3～5mL存于含有EDTA-K2抗凝試劑的專用管中，充分混勻待檢。

（2）檢測步驟：將全血樣本以3000r/min離心處理5min，抽吸20μL壓積紅細胞到含有1μL的裂解液中，待紅細胞得到溶解后開始檢測（要求在0.5h內檢測完畢）。應用貝克曼ANL AU5800全自動生化分析儀和G6PDH活性檢測試劑盒（天津中成佳益生物科技有限公司），以速率法檢測。嚴格按照試劑盒說明書進行操作，而且每日對檢驗室進行2次室內質控，確保質量在控。檢測結果評定[5]：正常范圍1300～3600U/L。若G6PD活性>3600U/L，說明G6PD活性升高，可判為陽性。

1.3 觀察指標

①比較地貧組、缺鐵貧血組、健康體檢組的G6PD活性檢測結果；②根據地貧組患者病情嚴重程度分為靜止型地貧（n=30）、輕型地貧（n=103）、中間型地貧（n=5），比較不同病情嚴重程度的G6PD活性檢測結果；③分析G6PD活性測定診斷地貧的臨床效能，包括靈敏度和特異性。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 各組G6PD活性檢測結果的比較

地貧組的G6PD活性顯著高于缺鐵貧血組、健康體檢組（P<0.05），但健康體檢組與缺鐵貧血組比較差異無統計學意義（t=1.890，P=0.064>0.05），見表1。

表1 三組G6PD活性檢測結果的比較(±s，U/L）

表1 三組G6PD活性檢測結果的比較(±s，U/L）

注：與健康體檢組比較，①P<0.05；與缺鐵貧血組比較，②P<0.05。

2.2 地貧組中不同病情嚴重程度G6PD活性檢測結果的比較

在地貧組中，隨著地貧嚴重程度加重，G6PD活性顯著升高，差異有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 地貧組中不同病情嚴重程度G6PD活性檢測結果的比較(±s，U/L）

表2 地貧組中不同病情嚴重程度G6PD活性檢測結果的比較(±s，U/L）

注：與靜止型地貧比較，①P<0.05；與輕型地貧比較，②P<0.05。

2.3 ROC曲線分析

將地貧病例設為陽性病例，健康體檢人群、缺鐵性貧血病例設為陰性病例。經ROC曲線分析顯示，當G6PD活性的診斷閾值≥2939.0U/L時，診斷地貧的靈敏度72.50%，特異性71.00%，見表3、圖1。

表3 ROC曲線分析結果

圖1 G6PD活性對地貧的ROC曲線

3 討論

地貧在臨床中較為常見，主要是由于機體存有的珠蛋白出現基因缺失或發生基因突變，致使珠蛋白肽鏈生成受阻，造成血紅蛋白中的1種或以上珠蛋白分泌不足而引起溶血性疾病。地貧在全球范圍內均流行，其中在國內好發于廣東、四川、廣西等地，嚴重影響著人口質量[6]。因此，加強地貧早期篩查，對于早期控制患者病情具有積極的作用。

在臨床上，地貧的常規篩查方法有血常規檢測、血紅蛋白電泳檢測等，其中血常規檢測缺乏特異性和靈敏度，極易漏診或誤診[7]。而血紅蛋白電泳檢測也具有一定的局限性，部分α地貧復合β地貧患者的血紅蛋白電泳檢測結果表現為正常，故應用血紅蛋白不能準確診斷出地貧，極易導致漏診[8]。

G6PD是一種廣泛存在于人體的管家基因，其在紅細胞系中的表達水平高，特別是在新生紅細胞系中的表達顯著升高。因此有研究證實[9]，G6PD表達與新生紅細胞數量呈正相關，可見G6PD活性與紅細胞的胞齡有依賴性，紅細胞胞齡愈小，G6PD活性愈高。地貧屬于慢性溶血性疾病，當患有地貧時，體內的溶血信號可刺激機體，代償性增加紅細胞的數量，促使G6PD活性升高。本研究結果也顯示，地貧組的G6PD活性顯著高于缺鐵貧血組、健康體檢組（P<0.05），但健康體檢組與缺鐵貧血組比較差異無統計學意義（P>0.05），進一步證實了地貧患者普遍存在G6PD活性升高。研究分析其原因可能是[10-11]：①G6PD是紅細胞胞齡依賴性酶，上文已對此作解釋；②G6PD是協助葡萄糖進行新陳代謝的脫氫酶，該酶分泌不足可引起還原型輔酶Ⅱ合成障礙，極易使得血紅蛋白氧化，而誘發溶血；③地貧的發生機制是體內珠蛋白合成障礙，未能合成的珠蛋白就會積聚到紅細胞膜，引起過氧化受損，機體為了拮抗氧化受損，會不斷修復受到損害的紅細胞膜蛋白，這就會使得G6PD代償性升高；④地貧患者的紅細胞體積偏小，使得單位體積內的紅細胞數量、紅細胞膜表面積增多，G6PD分布在紅細胞膜，這有可能會引起G6PD活性增加。

在地貧病情嚴重程度方面，本研究發現，隨著地貧嚴重程度加重，G6PD活性顯著升高，組間差異有統計學意義（P<0.05），說明G6PD活性水平與地貧病情嚴重程度呈正相關，地貧病情越嚴重，機體代償性產生的年輕紅細胞就越多，其G6PD活性就會顯著增加[12]。進一步繪制ROC曲線發現，當G6PD活性的診斷閾值≥2939.0U/L時，診斷地貧的靈敏度72.50%，特異性71.00%，提示G6PD活性診斷地貧有良好的靈敏度和特異性，但其靈敏度、特異性并不是極高，研究認為G6PD活性只可以作為地貧的初篩方法，對提高疾病診斷準確率有一定的輔助作用。

綜上所述，地貧患者G6PD活性顯著升高，且貧血程度越嚴重G6PD活性越高，其對于地貧診斷具有良好的靈敏度和特異性，有一定的輔助診斷價值，可以推廣應用。