CysC、IL-2、C3在慢性腎小球腎病患者中的水平及相關(guān)性研究

姚鵬云，龔亞萍，高佳琪

(南通大學(xué)附屬如皋醫(yī)院，江蘇省如皋市人民醫(yī)院腎臟康復(fù)科，江蘇 如皋 226500)

慢性腎小球腎病屬于一種在臨床上較為常見的腎病類型，其可發(fā)于任何年齡段，其中以青壯年男性發(fā)病率最高，其臨床表現(xiàn)為血尿、尿蛋白、水腫等，嚴(yán)重威脅患者的生命安全，但目前對(duì)于此病的具體發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，部分研究認(rèn)為此病的發(fā)生與多種細(xì)胞因子異常表達(dá)相關(guān)[1-2]。目前臨床上常采用腎小球?yàn)V過(guò)率(renal function impairment，eGFR)、血肌酐(serum creatinine,Scr)評(píng)估慢性腎小球腎病患者腎功能和損傷程度，但受多種因素的影響，其診斷準(zhǔn)確度和特異度均欠佳，胱抑素C(cystatin C，CysC)被證實(shí)與eGFR相關(guān)，其在診斷時(shí)不受性別、年齡、飲食等外界因素的影響，診斷準(zhǔn)確度、特異度較高[3]。另外研究顯示，腎病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)具有重要的作用，在腎病發(fā)展過(guò)程中腎臟中幾乎所有的細(xì)胞均會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞因子[4-5]，且所產(chǎn)生的細(xì)胞因子的靶細(xì)胞會(huì)誘導(dǎo)腎小球發(fā)生病理性改變和功能異常，其中炎癥因子等作用更為突出，白細(xì)胞介素(interleukin，IL)等指標(biāo)含量降低，而在上述過(guò)程中補(bǔ)體家族成員C3、C4等介導(dǎo)炎癥因子異常表達(dá)，最終加重疾病。臨床上現(xiàn)有的研究?jī)H分析上述指標(biāo)在患者疾病中的水平高低，并未分析其診斷臨界值，現(xiàn)分析其診斷臨界值，以期望用于臨床疾病的診斷，改善患者預(yù)后。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年3月—2021年3月我院收治的慢性腎小球腎病患者138例作為研究組，男性65例，女性73例，年齡30～69歲，平均(40.38±10.00)歲，BMI 22.00～25.00，平均23.98±1.02，早期46例，中期60例，晚期32例。另外同期選取于我院行健康體檢的健康志愿者80例作為對(duì)照組，男性41例，女性39例，年齡31～68歲，平均(41.65±10.35)歲，BMI 22.00～24.13，平均23.35±0.86。兩組在一般資料比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)?；颊呒凹覍倬橥獠⒑炇鹬橥鈺?/p>

納入標(biāo)準(zhǔn)：研究組均符合臨床對(duì)慢性腎小球腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，尿蛋白定量<3.5 g/24 h，患者臨床表現(xiàn)為尿異常(蛋白尿、血尿、管型尿)、水腫和(或)高血壓等，病程>1年。根據(jù)eGFR評(píng)估患者疾病嚴(yán)重程度，采用慢性腎臟病流行病學(xué)合作研究(chronic kidney disease epidemiology collaboration,CKD-EPI)公式計(jì)算[7]，早期為60 mL/min

排除標(biāo)準(zhǔn)：腎臟惡性腫瘤者；近3個(gè)月內(nèi)服用過(guò)腎毒性藥物者；合并心、肺、肝等功能不全者；肺部感染等感染疾病者；一般資料不全者；精神障礙者；溝通障礙者；妊娠期或者哺乳期婦女。

1.2血清CysC、IL-2、C3檢測(cè) 抽取所有研究對(duì)象入組次日清晨空腹靜脈血3 mL，以離心半徑5 cm、轉(zhuǎn)速3 000 r/min離心處理10 min，分離上層血清，-80 ℃保存待檢。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清CysC、IL-2水平，CysC ELISA試劑盒及相關(guān)試劑均由上海富雨生物科技有限公司提供，批號(hào)：FY-04088H1，IL-2 ELISA試劑盒及相關(guān)試劑均由江西艾博因生物科技有限公司提供，批號(hào)：IB-E10055。采用液相免疫沉淀散射比濁終點(diǎn)測(cè)定法測(cè)定血清C3水平。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)。Logistic回歸分析慢性腎小球腎病發(fā)生的影響因素，CysC、IL-2、C3之間相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。采用GraphPad Prism 7軟件做ROC曲線分析CysC、IL-2、C3對(duì)慢性腎小球腎病的診斷價(jià)值。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.12組CysC、IL-2、C3表達(dá)比較 與對(duì)照組相比，研究組CysC水平升高，IL-2、C3水平降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組CysC、IL-2、C3表達(dá)比較Table 1 Comparison of CysC, IL-2 and C3 expression between two groups

2.2ROC曲線分析CysC、IL-2、C3對(duì)慢性腎小球腎病的診斷價(jià)值 ROC曲線顯示，與CysC、IL-2、C3單項(xiàng)診斷相比，3項(xiàng)聯(lián)合對(duì)慢性腎小球腎病的診斷價(jià)值較高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2，圖1。

表2 CysC、IL-2、C3對(duì)慢性腎小球腎病的診斷價(jià)值ROC曲線分析結(jié)果Table 2 Results of ROC curve analysis of CysC, IL-2, and C3 in the diagnosis of chronic glomerular nephropathy

圖1 ROC曲線Figure 1 ROC Curve

2.3慢性腎小球腎病發(fā)生的單因素分析 單因素分析顯示，慢性腎小球腎病的發(fā)生在患者性別、年齡、血尿酸、合并癥中差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；慢性腎小球腎病的發(fā)生在患者吸煙史、飲酒史、是否肥胖、CysC、IL-2、C3水平中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 慢性腎小球腎病發(fā)生的單因素分析Table 3 Univariate analysis of chronic glomerular nephropathy (n=138)

2.4CysC、IL-2、C3與慢性腎小球腎病患者腎功能損害的關(guān)系分析 相關(guān)性分析顯示，CysC與eGFR正相關(guān)(r=0.404，P<0.001)，IL-2與eGFR負(fù)相關(guān)(r=-0.375，P<0.001)，C3與eGFR負(fù)相關(guān)(r=-0.504，P<0.001)，見圖2。

圖2 CysC、IL-2、C3與患者腎功能損害(eGFR)的相關(guān)性分析Figure 2 Analysis of correlation of CysC, IL-2 and C3 with renal function impairment(eGFR) in patients

2.5Logistic回歸分析CysC、IL-2、C3是否為影響慢性腎小球腎病發(fā)生的因素 將慢性腎小球腎病發(fā)生(未發(fā)生=0，發(fā)生=1)作為因變量，將吸煙史(無(wú)=0，有=1)、飲酒史(無(wú)=0，有=1)、是否肥胖(否=0，是=1)、CysC(<1.52 mg/L =0，≥1.52 mg/L =1)、IL-2(≥4.16 μg/L=0，<4.16 μg/L=1)、C3(≥1.75 g/L=0，<1.75 g/L=1)作為自變量，納入二分類多因素Logistic回歸模型分析，結(jié)果顯示，CysC、IL-2、C3為影響慢性腎小球腎病發(fā)生的因素(P<0.05)，見表4。

表4 Logistic回歸分析CysC、IL-2、C3是否為影響慢性腎小球腎病發(fā)生的因素Table 4 Logistic regression analysis of CysC, IL-2 and C3 as influencing factors of the occurrence of chronic glomerular nephropathy

2.6CysC、IL-2、C3之間相關(guān)性分析 CysC與IL-2負(fù)相關(guān)(r=-0.250,P=0.003)；CysC與C3負(fù)相關(guān)(r=-0.373,P=0.001)；IL-2與C3正相關(guān)(r=0.232,P=0.006)，見圖3。

圖3 CysC、IL-2、C3之間相關(guān)性分析Figure 3 Analysis of correlation of CysC, IL-2 and C3

3 討 論

現(xiàn)階段用于診斷慢性腎小球腎病的指標(biāo)易受外來(lái)因素的影響，而影響診斷準(zhǔn)確度，導(dǎo)致不能準(zhǔn)確診斷患者病情，延誤治療，因此尋找不受外來(lái)因素影響的特異性指標(biāo)顯得尤為重要[8-10]。CysC屬半胱氨酸蛋白酶抑制劑，廣泛存在于有核細(xì)胞中，其產(chǎn)生率恒定，且僅通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)作用而被清除，在診斷臨床疾病時(shí)不受外來(lái)因素的影響，臨床上常將其作為一種反應(yīng)腎小球?yàn)V過(guò)的理想標(biāo)志物，以用于腎臟病變的評(píng)估[11]。研究認(rèn)為，在腎病發(fā)生后，患者腎功能損傷后CysC在血液中的含量會(huì)根據(jù)患者腎小球?yàn)V過(guò)功能變化而發(fā)生變化，在腎病發(fā)展成為腎衰竭時(shí)CysC在患者外周血中的含量高于正常含量的10倍，且其水平變化僅由eGFR變化決定[12-13]。因此基于上述背景，在本研究中分析CysC在慢性腎小球腎病患者中的表達(dá)，結(jié)果顯示，CysC在患者血中表達(dá)升高，且隨著疾病的進(jìn)展，其升高更為明顯，分析其原因可能與慢性腎小球腎病發(fā)生后足細(xì)胞損傷破壞足突裂隙膜結(jié)構(gòu)，造成腎小球?yàn)V過(guò)功能改變，而腎小球?yàn)V過(guò)功能改變與CysC水平變化正相關(guān)，隨著慢性腎小球腎病患者疾病嚴(yán)重程度的加深，腎小球?yàn)V過(guò)功能改變顯著，而足細(xì)胞損傷逐漸加深，誘導(dǎo)CysC水平升高相關(guān)，此結(jié)果提示，CysC可作為評(píng)價(jià)慢性腎小球腎病患者病情的標(biāo)志物。

臨床研究顯示，腎病患者機(jī)體內(nèi)細(xì)胞所分泌的前列腺素E2等生理活性物質(zhì)經(jīng)活化T抑制細(xì)胞亞群而抑制Th細(xì)胞分泌IL-2[14]。IL-2屬于一種15 000的糖蛋白，由輔助性T細(xì)胞所分泌，具有促進(jìn)抗體生成，協(xié)助免疫應(yīng)答的作用[15-16]。另外有研究證實(shí)，腎病患者血清中的IL-2含量明顯低于健康人，可能與此類患者免疫功能較健康人降低，而輔助性T細(xì)胞數(shù)量減少，導(dǎo)致分泌IL-2的功能降低相關(guān)[17]。本研究結(jié)果顯示，慢性腎小球腎病患者血清中IL-2表達(dá)水平明顯低于健康人，且與不同病理階段相關(guān)，晚期腎功能損害患者IL-2表達(dá)水平降低程度更為顯著，分析其原因可能與慢性腎小球腎病患者免疫功能下降，而免疫功能降低后Th細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的功能被抑制，導(dǎo)致IL-2分泌不足，不足以滿足機(jī)體需要，進(jìn)而導(dǎo)致腎臟損害，且隨著腎功能損害的發(fā)展，此表現(xiàn)更加劇相關(guān)。

臨床研究顯示，補(bǔ)體在人體中的存在具有雙向作用，一方面正常的補(bǔ)體系統(tǒng)會(huì)可協(xié)助免疫復(fù)合體在體內(nèi)運(yùn)送促使其在肝臟、脾臟中被巨噬細(xì)胞吞噬而清除，另一方面，補(bǔ)體系統(tǒng)缺陷是可給機(jī)體帶來(lái)不同程度的損傷[18]。C3屬于補(bǔ)體家族成員之一，其在經(jīng)典激活途徑和旁路激活途徑中起著重要的作用[19]。有研究顯示，當(dāng)腎臟發(fā)生病變后局部浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞和腎臟固有細(xì)胞中會(huì)產(chǎn)生大量的致炎細(xì)胞因子，致炎細(xì)胞因子影響C3分泌，而導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生免疫損傷，與此同時(shí)，補(bǔ)體又會(huì)通過(guò)C3促使T增殖、炎細(xì)胞因子釋放，進(jìn)一步加重腎臟損傷[20]。本研究結(jié)果顯示，與健康人相比，C3在慢性腎小球腎病患者中的表達(dá)降低，且與疾病嚴(yán)重程度相關(guān)，此結(jié)果可能與慢性腎小球腎病發(fā)生后炎癥細(xì)胞、腎臟固有細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子的能力增強(qiáng)，而炎癥因子會(huì)損傷機(jī)體免疫，導(dǎo)致C3分泌異常相關(guān)。

本研究?jī)H單純使用Pearson分析三者之間的相關(guān)性，證明三者線性相關(guān)，但并未深入分析三者之間相互作用的機(jī)制，因此還需后續(xù)研究進(jìn)一步分析3者之間相互作用的機(jī)制，以明確3者是否共同參與慢性腎小球腎病的發(fā)生，以期望為臨床上此病的早期診斷提供參考。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示，CysC在慢性腎小球腎病中表達(dá)升高，IL-2、C3在慢性腎小球腎病中表達(dá)降低，且與患者腎功能損害相關(guān)，ROC曲線、回歸分析顯示，三者疾病診斷的分界點(diǎn)分別為1.52 mg/L、4.16 μg/L、1.75 g/L，且3者線性相關(guān)，臨床可根據(jù)指標(biāo)高低評(píng)估此病。