山楂黃酮對肥胖小鼠慢性炎癥的影響

文│張海明（晉中信息學院）

文章主要研究山楂黃酮對高脂飼料誘導小鼠慢性炎癥的影響，試驗將1月齡的昆明鼠分成兩組，一組飼喂正常飼料，另一組用高脂飼料建立小鼠肥胖模型。模型構建成功后從正常飼喂組隨機抽取10只作為空白對照組，在肥胖模型小鼠中隨機抽取40只，隨機分為4組，模型組、高劑量（300毫克/千克）中劑量（200毫克/千克）和低劑量組（150毫克/千克）。每天給小鼠灌服不同濃度山楂黃酮提取物溶液后測定各模型小鼠血液中炎癥因子水平、抑炎癥因子水平、游離脂肪酸濃度等。結果表明，山楂黃酮提取物對高脂飼料誘導的慢性炎癥小鼠有很好地降低血清中白介素-6（IL-6），提高白介素-10（IL-10）的作用，同時增加小鼠的飼料利用率，減少白色脂肪含量，且對正常小鼠血液中炎癥因子有一定影響。由此可見，山楂黃酮提取物對高脂飼料誘導的慢性炎癥小鼠具有一定的保健作用。

一、材料與試劑

山楂黃酮提取物（hawthorn flavonoid extract，HFE）購自山西省晉城中晉藥業有限公司，為山楂果實黃酮提取物（黃酮含量為97.8%）。小鼠白介素-6（IL-6）ELISA試劑盒、小鼠白介素-10（IL-10）ELISA試劑盒、小鼠游離脂肪酸（FFA）ELISA試劑盒［齊一生物科技（上海）有限公司］，昆明種K M小鼠，體重20～25克，雄鼠50只，廣州市賽博諾生物科技有限公司提供。高脂飼料（脂肪含量60%）、普通飼料（脂肪含量4%）由南京盛民科研動物養殖場提供，自由飲水，保持自然光照，溫度25℃，濕度60%～70%。準備蒸餾水、吸水紙、一次性試管。

表2 山楂黃酮提取物對各組小鼠血清中IL-6含量的影響

1.主要儀器與設備。ELX800型酶標儀（BIO-TEC），JY6002電子天平（上海精其儀器有限公司）。TDZ4-WS離心機（上海悅豐儀器儀表有限公司），1毫升玻璃比色皿。

二、方法

1.建模及分組。肥胖小鼠模型的建立參考盧申姣等的方法。隨機選取飼喂正常飼料的10只小鼠作為空白對照組，將建模成功的30只肥胖小鼠分為模型組、高劑量組（300毫克/千克）、中劑量組（200毫克/千克）、低劑量組（150毫克/千克）。每只小鼠每天灌胃0.02毫升/克，記錄每日采食量。

2.測量血清IL-6、IL-10、FFA水平。血液采取后在室溫條件下讓其自然凝固20分鐘，隨后將靜置液離心20～30分鐘（2000～3000轉/分鐘）。最后要認真收集上清液。儲存時如果有其他沉淀形成，應再次離心，重復上述過程，具體按照試劑盒說明書操作，3種物質均可使用雙抗體夾心法檢測血清中IL-6、IL-10、FFA含量。

3.白色脂肪稱重。脫頸處死后的小鼠進行解剖及采樣，采取腹膜后白色脂肪組織、附睪白色脂肪組織等，用電子天秤來進行稱重，并記錄數據。

4.數據處理。試驗數據用“平均數±標準差”表示，各組數據間用SPSS（V22）完成。

三、結果與分析

1.山楂黃酮對各組小鼠體重、攝食量、白色脂肪重量的影響。由表1可知，高劑量組白色脂肪顯著低于模型組（P＜0.05），中劑量組白色脂肪相較于模型組低，建模組小鼠體重和脂肪比空白的組高很多，說明建模成功，同時也間接證明了山楂黃酮提取物會影響高脂飲食小鼠體重和脂肪變化，高劑量組最為明顯，其次是中劑量組和低劑量組。

表1 各組體重、采食量、白色脂肪重 克

2.白細胞介素-6（IL-6）測定結果。ELISA檢測各組試驗數據中IL-6、IL-10的含量，模型組小鼠血清IL-6含量較正常組明顯升高，說明造模成功，而山楂黃酮提取物各組IL-6較模型組降低。

表3 山楂黃酮提取物對各組小鼠血清中IL-10含量的影響（±s）

表4 山楂黃酮提取物對血清中游離脂肪酸（FFA）水平影響（±SD，n=10）

3.白細胞介素-10（IL-10）測定結果。IL-10含量較低，各組造模后含量開始升高，給藥后可以看出各組IL-10含量均高于正常值。模型組含量最高，給藥組介于正常組與模型組之間。

4.小鼠血清中游離脂肪酸（FFA）水平。摘眼球取血，根據檢測試劑盒說明操作，經過離心后測定各組小鼠游離脂肪酸（FFA）的含量。數據顯示，空白對照組小鼠與高脂肥胖模型小鼠血清FFA表現出差異顯著，山楂黃酮提取物組與高脂模型組FFA濃度相比高劑量和中劑量差異極顯著（P＜0.01），低劑量組水平顯著升高（P＜0.05）。各項結果均表明，山楂黃酮提取物對降低血清中FFA水平效果顯著，且劑量越高效果越明顯，可緩解FFA過量導致的脂質堆積，進而預防機體帶來的影響。

三、討論

經過對測定高脂飼料誘導的肥胖小鼠體內的一些細胞因子可知，高脂飲食會導致機體出現慢性炎癥，血清中白介素-6水平隨肥胖模型的建立不斷上升，飼喂山楂黃酮后其含量下降，證明山楂黃酮是增強免疫力的保健藥物。機體炎癥因子水平上升，在血液中含量很少的IL-10也會隨高脂飲食而提升，說明慢性炎癥會對動物機體造成持續性損傷。而山楂黃酮使白介素-10含量下降，說明山楂黃酮對動物機體有修復損傷的作用。根據結果還可以發現，山楂黃酮提取物對FFA有抑制作用，FFA作為白介素-6分解脂肪的產物可以誘導細胞發生炎癥反應，防止脂類物質在血管及其他器官中聚集，保護一些細胞炎性因子對組織器官的損害。因此，該試驗結果為深入研究山楂黃酮作為細胞修復、動物消炎保健做出進一步論證。