兩種增色劑對阿里雌魚生長及體色調控的研究①

姜巨峰， 周勇， 史東杰， 劉肖蓮，劉克明， 李春艷， 韓現芹， 牟希東， 宋紅梅

1.中國水產科學研究院珠江水產研究所/農業農村部休閑漁業重點實驗室，廣州 510380； 2.天津市水產研究所/天津市觀賞魚技術工程中心，天津 300221； 3.北京市農林科學院，北京 100068

觀賞魚已成為繼狗、貓日常消費的世界第三大寵物．阿里魚(Sciaenochromisfryeri)是觀賞魚市場上較為暢銷的品種，屬硬骨魚綱，鱸形目，慈鯛科，鬼麗魚屬．阿里魚雄魚擁有艷麗的金屬藍體色，觀賞價值和經濟價值大，而雌魚和幼魚大多呈現單調的灰色，觀賞價值和經濟價值小．

目前國內外學者對阿里魚的研究較少，僅見繁養技術、營養等方面的報道[1-4]，而對其增色技術尚未見相關報道．雄性激素在促進魚類增色研究中的應用較為廣泛，目前已見在斑馬魚(Brachydaniorerio)、劍尾魚(Xiphophorushelleri)、珍珠瑪麗魚(Mollienisiavelifera)等多種魚類[5-12]增色方面進行了研究，應用最多、最廣泛的雄性激素是甲基睪酮(Methyltestosterone)．近些年來，甲基睪酮在動物食品中屬于禁用藥．在觀賞魚養殖行業中，由于養殖出的觀賞魚只是用來欣賞而不食用，在養殖水環境可控可安全處理的前提下，養殖戶由于經濟效益的驅使，常使用甲基睪酮對觀賞魚進行增色出售，如果管控不好，會對環境造成污染．在當前環保要求及養殖尾水處理達標的雙重標準下，探討甲基睪酮作為增色劑的替代品意義重大．雄烯二酮(Androstenedione)、睪酮(Testosterone)也屬于雄性激素，可以作為藥物或增色劑應用于水產動物中，但應用其對水產動物增色的技術研究報道較少．本文以阿里雌魚為研究對象，通過在飼料中分別添加不同劑量的雄烯二酮和睪酮配置功能飼料，探討不同功能飼料對阿里雌魚生長及體色的影響，旨在確定出阿里雌魚增色的適宜增色劑和添加量，同時也為篩選出甲基睪酮增色劑安全有效的替代品提供參考依據．

1 材料與方法

1.1 阿里增色飼料

試驗飼料以阿里魚養殖普通飼料為基礎飼料(表1)，分別配置含有100，200，300，400 mg/kg雄烯二酮(標記為A100，A200，A300，A400組)和100，200，300，400 mg/kg睪酮(標記為T100，T200，T300，T400組)8個濃度梯度的試驗飼料．分別稱取一定量的雄烯二酮和睪酮溶解在95%的乙醇中，配制成10 mg/mL的母液，4 ℃保存備用．配制飼料時使用95%的乙醇將母液稀釋至所用濃度即可．激素飼料配制參照El-Greisy等[13]進行，采用乙醇噴霧法均勻噴灑在飼料上，50 ℃烘干6 h，對照組飼料使用95%乙醇做同樣處理．所有飼料烘干后，裝袋放入4 ℃冰箱備用，飼料的粒徑為2 mm．

1.2 增色試驗

增色試驗在天津市某養殖場進行．以阿里雌魚為試驗對象，隨機挑選810尾規格一致、游動迅速、鰭條完整、110日齡的健康阿里雌魚放入水族缸(75 cm×60 cm×28 cm； LED燈，30 W，L/D=14∶10)中，試驗共分為9組，每組3個平行，每個平行30尾魚．在增色試驗開始前，先用普通飼料投喂1周試驗魚，待魚攝食穩定后，隨機從各缸中取樣，測定魚的初始全長、體長、體質量后，試驗組開始投喂增色飼料，對照組繼續投喂普通飼料開始增色試驗，阿里雌魚初始體質量為5.78±1.05 g．養殖水溫為22～24 ℃，pH值為7.8～8.0，每天投喂2次，9：00和16:00各飽食投喂1次，持續投喂試驗飼料8周； 8周以后試驗組改投普通飼料，每天正常投喂，觀察試驗魚的體色變化情況，再持續養殖4周．在投喂飼料時，堅持少量多次的原則，魚的攝食速度很快，基本上在3 s內飼料被攝食完畢，因此飼料中的營養物質不會溶失到養殖用水中造成水體環境的污染．當魚吃飽后，及時將剩余漂在水面上的飼料撈出回收．

表1 基礎飼料組成及營養分析

1.3 樣品測定

在試驗第0，2，4，6，8，10，12周時，分別于每缸中隨機各取10尾魚，用0.1 mL/L濃度的丁香油將其麻醉，濾紙吸干其體表水分后，每尾魚均按頭部朝左的順序放置，然后快速用色度色差儀(Konica Minolta CM-700 d，日本)測定其體表色度色差值，測定部位為腹部的前部、中部和后部，測定數據取平均值并與阿里真雄魚的標準體表色度值(取13尾阿里真雄魚進行測定，分別測定每尾魚腹部的前部、中部和后部3個位置并取平均值，得出標準魚色度值： 明亮度值L*為35.62±3.04； 紅綠色度值a*為0.06±1.79； 黃藍度值b*為-18.99±2.79)進行比較，測出總色差值(△E*ab)和黃藍度值(b*)，同時測其全長、體長、體質量指標．待測畢后，立即將魚放入充氧的潔凈水桶中進行蘇醒，待魚恢復正常后，將魚放回到原缸中繼續養殖．

1.4 數據計算與分析

阿里雌魚特定生長率(SGR)[14]計算公式如下：

SGR= (lnWt-lnW0)/t×100%

式中，Wt為試驗魚終末體質量(g)；W0為試驗魚初始體質量(g)；t為試驗天數(d)．

2 結果

2.1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚生長及成活率的影響

從表2可以看出，不同濃度的雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚的成活率沒有影響，均為100%．同等增色劑濃度下，雄烯二酮對阿里雌魚增質量效率優于睪酮組，其中A200組終質量顯著高于T200組(p<0.05)．同時，隨著兩種增色劑添加量的增加，阿里雌魚終質量呈現先升高后降低的趨勢．A200組的阿里雌魚SGR最高，為0.39，顯著高于T100，T200，T400組和對照組(p<0.05)．從表2 可知，雄烯二酮組中雖然A200組的SGR最高，但與其余各組之間差異無統計學意義．從生長的角度來看，雄烯二酮的適宜添加量為100 mg/kg； 睪酮組中T300組的SGR最高，但與其余各組之間差異無統計學意義，從生長的角度來看，睪酮的適宜添加量為100 mg/kg．

表2 飼料中雄烯二酮、睪酮質量分數對阿里雌魚生長及成活率的影響

2.2 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚體色的影響

2.2.1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚色差值(△E*ab)的影響

△E*ab值代表測定魚體色色度值與標準魚的差距，其值越小說明其測定色度值與標準體色值的差異越小．從表3和圖1可以看出，雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚具有增色效應，其與標準魚的色差值隨著增色時間的延長而逐漸變小．所有試驗組色差值均顯著低于對照組(p<0.05)，雄烯二酮處理組增色效果優于睪酮組．在投喂增色飼料8周時，A300，A400組的色差值與T300組的色差值差異無統計學意義(p>0.05)，但均顯著低于其余各組(p<0.05)； T300，T400組的色差值差異無統計學意義(p>0.05)，但均顯著低于T100，T200，A100，A200組及對照組(p<0.05)．

表3 雄烯二酮、睪酮對阿里增色效果(△E*ab)

投喂8周增色飼料后改投普通飼料，在第10周時，除A100和A400組外，各處理組色差值較第8周時色差值均有所下降．從雄烯二酮和睪酮各處理組來看，A300，A400組和T300，T400組色差值差異無統計學意義(p>0.05)，但均顯著低于其余各組(p<0.05)．

在第12周時，除對照組，A100，T100，T200組外，其余處理組的色差值均高于第10周時各處理組的色差值．從雄烯二酮和睪酮各處理組來看，A300，A400組和T400組的色差值差異無統計學意義(p>0.05)，但均顯著低于A100，A200，T100，T200組及對照組的色差值(p<0.05)； T300組色差值與T400和A300組差異無統計學意義(p>0.05)．

2.2.2 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚黃藍色度值(b*)的影響

b*值表示黃藍度值，+表示偏黃，-表示偏藍．從表4和圖1可以看出，阿里雌魚體表b*值隨著增色時間的延長，其b*值呈現逐漸減小的趨勢，所有處理組均顯著低于對照組(p<0.05)．在增色8周時，A400組體表b*值最低，為-12.97，與A300處理組體表b*值差異無統計學意義(p>0.05)，但顯著低于其余各組(p<0.05)； T300組體表b*值為-10.03，與A300，T400組體表b*值差異無統計學意義(p>0.05)，但顯著低于A100，A200，T100，T200組及對照組體表b*值(p<0.05)．

表4 飼料中雄烯二酮、睪酮對阿里增色效果(b*值)

圖1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚體色的影響

投喂8周增色飼料后改投普通飼料，試驗第10周時，除A100，A400組體表b*值較第8周時高一些，其余各處理組阿里雌魚體表b*值均較第8周時低，阿里魚體表藍色呈現出更深的趨勢； A300組體表b*值為-13.23，與A400組體表b*值(-12.73)差異無統計學意義(p>0.05)，但顯著低于其余各處理組(p< 0.05)； T300，T400和A200組體表b*值差異無統計學意義(p>0.05)，但顯著低于A100，T100組及對照組(p<0.05)； T200，A200組體表b*值差異無統計學意義(p>0.05)．

第12周時，所有試驗組體表b*值均顯著低于對照組(p<0.05)．A300，A400，T300，T400組體表b*值差異無統計學意義(p>0.05)，但顯著低于A100，A200和T100組(p<0.05)．與第10周相比，第12周除A100，T200組及對照組體表b*值低于第10周外，其余各組體表b*值均比第10周時高．

3 討論

3.1 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚生長及成活率影響分析

適宜濃度的雄性激素能促進魚類自身蛋白質的合成，提高魚體內的生長激素水平，從而提高魚類的生長速度．本研究中，A100，A200，A300，A400組和T300組的SGR均顯著高于對照組(p<0.05)，說明雄烯二酮和睪酮對阿里雌魚均具有促生長作用．這與用甲基睪酮處理馬拉瓜麗體魚(Cichlasomamanaguense)[11]、鯉魚(Cyprinuscarpio)[12]、金魚[12](Carassiusauratus)、櫻桃鲃[15](Barbustitteya)雌魚、吉富羅非魚[16](Oreochromisniloticus)能夠促使其生長速度加快的結論一致，表明雄烯二酮和睪酮在促進魚類生長上與甲基睪酮有相同的作用效果．本研究還發現，從兩種增色劑的SGR來看，相同濃度組的雄烯二酮SGR比睪酮組高，這說明雄烯二酮比睪酮對阿里雌魚促生長效果更好，這可能是由于雄烯二酮是睪酮的激素原，在生理代謝過程中可直接轉換為睪酮，同時還產生一些雌激素和一些活性物質，對促進魚體內生長因子的表達有促進作用．

從雄烯二酮、睪酮各組別的SGR來看，其數值在一定程度上均呈現出先增加后降低的趨勢，這說明雄烯二酮和睪酮對阿里雌魚促生長均具有劑量效應，高濃度組的雄烯二酮、睪酮有抑制阿里雌魚生長的趨勢，這與高濃度激素抑制黑鱸[17](Dicentrarchuslabrax)、大口黑鱸[18](Micropterussalmoides)、尼羅非鯽[19](Oreochromisniloticus)、半滑舌鰨[20](Cynoglossussemilaevis)生長的研究結果相一致，但與雄性激素對庸鰈[21](HippoglossushippoglossusL.)生長速度沒有明顯影響和雄性激素對黃姑魚[6]的生長有顯著抑制作用的研究結果不同．這可能是由于魚的種類特異性不同所致，也可能是因為魚類不同生長階段對雄性激素的耐受性和吸收轉化利用能力不同有關．雄性激素對魚類生長性能的影響機制是多方面的．一方面可能是因為雄性激素通過影響水產動物的攝食與消化系統，從而影響其生長性狀； 另一方面可能是因為魚類攝食雄性激素后，體內與生長相關的激素及其受體濃度發生了改變，從而影響魚類的生長速度．當激素濃度在適宜范圍內時對魚類成活率無顯著影響，但當激素濃度超過某個閾值后，會導致魚類的成活率顯著降低．17α-MT 對白斑狗魚[22](Esoxlucius)有顯著致死效應； 用2 μg/L的辛基酚處理日本青鏘[23](Oryziaslatipes)時，死亡率升高20%～30%．本研究飼料中添加雄烯二酮或睪酮對阿里雌魚的成活率沒有影響，這與用雄性激素處理馬拉瓜麗體魚[12]和櫻桃鲃[15]的研究結論一致．這說明雄烯二酮、睪酮各處理組濃度在阿里雌魚的耐受范圍內．

3.2 飼料中添加雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚體色調控的比較分析

在自然界中，一般雄魚較雌魚艷麗，因此也更具有觀賞價值和經濟價值．10 mg/kg的甲基睪酮對5月齡的珍珠瑪麗魚[24](Mollienesiavelifera)的體色沒有作用，但能使3月齡的紅劍尾魚[24](Xiphophorushelleri)體色增色，這可能是由于5月齡的珍珠瑪麗魚性腺已較成熟或者投喂的甲基睪酮時間較短、劑量較小的緣故； 30 mg/kg以上的17α-MT處理50日齡的中華鳑鲏[10](Rhodeussinensis)，28 d后體色明顯開始起效； 應用17α-MT 處理紅劍尾魚[9，24](Xiphophoroushelleri) 、瑪麗魚[25](MollienesiaLatipinnaLeSueur)以及紅斑馬魚[26](Brachydaniorerio)時，其體色明顯更加艷麗．本研究發現，飼料中添加適量的雄烯二酮或睪酮，可使阿里雌魚體色逐漸呈現雄魚的金屬藍體色，且雄烯二酮比睪酮增色效果更好．投喂增色飼料8周時，A300組與A400組和T300組的色差值(ΔE*ab)和黃藍度值(b*)差異無統計學意義(p>0.05)，但顯著低于其余各組(p<0.05)．綜合養殖成本和增色效果等因素，認為阿里雌魚最佳增色劑為雄烯二酮，其適宜添加量為300 mg/kg．

本研究發現，當停用增色飼料后的一段時間內，魚體的顏色呈現逐漸加深的趨勢，這可能是由于魚類吸收的雄烯二酮或睪酮在體內逐漸富集，后期通過代謝得以全部釋放，所以在改投普通飼料后前一段時間里，阿里魚呈現出更深的金屬藍體色，而到后期金屬藍體色有逐漸變淺的趨勢，表明外源雄烯二酮、睪酮對阿里雌魚具有適應性反應，為了使阿里魚呈現穩定的金屬藍體色，在實際養殖過程中需要定期投喂增色飼料．在本研究中，A300，A400組阿里魚改投普通飼料后4周中仍然呈現出較深的金屬藍體色，這可能是由于阿里雌魚經過8周增色后已雄性化，也可能尚未完全雄性化但體內吸收的增色劑還沒有代謝完全的原因，具體機理還需進一步研究確定．

觀賞魚的觀賞價值除體型以外，體色是最重要的因素．影響魚體色變化的原因是多方面的，內在的原因主要受有物種的特性和基因的影響，如麥穗魚[27](Pseudorasboraparva)在生殖期體色較平時呈現更加鮮艷的色彩； 外在的原因主要受養殖水環境和攝食的飼料組成的影響，如斑鱖[27](Sinipercascherzeri)可以根據光照強度的變化而變化，飼料中添加蝦青素、微藻等物質[14，28-29]可以有效增加人工養殖魚類的體色．微藻對環境雄激素也有顯著的富集和降解作用[30]，在飼料中適量添加雄激素或含有雄激素的微藻等介質，可以促使雌魚呈現出雄魚一樣鮮艷的體色．因此，研究如何有效在飼料中添加揚色成分，改善人工養殖條件下觀賞魚的外觀色彩，是觀賞魚研究和養殖從業者努力的方向[15]．

3.3 阿里增色魚與真雄魚顏色差異的比較分析

從本研究可以看出，飼料中添加雄烯二酮、睪酮投喂阿里雌魚后，其體色能夠呈現出金屬藍色，觀賞價值和經濟價值得到了提升，但與阿里真雄魚相比，用雄烯二酮或睪酮增色后的阿里雌魚其色差值(△E*ab)和黃藍度值(b*)還有一定的差距．這可能與魚的種類吸收利用雄烯二酮、睪酮的特異性有關，也可能與養殖的具體光照和溫度差異有關，具體原因還有待進一步研究．

4 結論

飼料中添加雄烯二酮、睪酮均可促使阿里雌魚生長速度加快，并使其呈現雄魚的金屬藍體色，雄烯二酮較睪酮促生長、增色效果好； 飼料中雄烯二酮的適宜添加量為300 mg/kg，增色8周后的阿里魚體色能夠穩定4周．