醋酸鈉林格注射液與包材中抗氧劑的相容性研究

鄒宇，劉楊，劉亞威，張迪，孫苓苓（遼寧省檢驗檢測認證中心，遼寧省藥品檢驗檢測院，沈陽 110036）

醋酸鈉林格注射液是一種新型的電解質平衡液，組成接近細胞外液生理比例，其含有的醋酸鈉鹽代謝速率快，可迅速改善微循環，糾正酸中毒[1-2]。臨床上廣泛用于圍術期液體治療，在安全性、有效性方面優勢明顯[3-5]。醋酸鈉林格注射液為五層共擠輸液用袋包裝，直接接觸藥品的包材有五層共擠輸液用袋、聚丙烯接口、聚丙烯組合蓋，均為塑料制品。塑料藥包材在生產過程中會加入抗氧劑來抑制或延緩老化降解，注射液在生產、流通、儲存及使用過程中長時間與藥包材接觸，抗氧劑可能溶出、遷移至藥液中，影響藥物的理化性質和藥理作用，甚至對人體具有一定的毒性[6-8]。2012年9月，我國藥審中心發布了《化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則（試行）》[9]，指出包裝系統應與藥品具有良好的相容性，即不能引入可引發安全性風險的浸出物，或引入浸出物的水平應符合安全性要求。歐洲藥典中對各種塑料材料中添加劑的添加量進行了限定，并給出了檢驗方法[10]。有文獻對不同塑料材料中的抗氧劑含量、不同注射液包材相容性進行了研究[11-20]，但未見醋酸鈉林格注射液包材相容性的相關報道。

醋酸鈉林格注射液的藥包材中使用了抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076、抗氧劑168，本研究參考歐洲藥典方法[10]和相關文獻[11-20]，建立了4種抗氧劑的測定方法，并對包材和注射液進行提取、遷移試驗，現報道如下。

1 材料

1.1 儀器

Waters 2695高效液相色譜儀（美國Waters公司），Tomy SX-700型高壓滅菌鍋（日本Tomy公司），BUCHI旋轉蒸發儀（瑞士BUCHI公司），TechMate C18-STII色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，北京泰克美公司），Cleanert S C18-SPE固相萃取柱（600 mg/6 mL，天津Agela公司）。

1.2 試藥

抗氧劑1010[四（3，5-二叔丁基-4-羥基）苯丙酸季戊四醇酯，批號：195014-201601，純度：98.2%]、抗氧劑330 [2，2'，2''，6，6'，6''-己 烷-叔丁基-4，4'，4''-（2，4，6-三甲基-1，3，5-苯基）三亞甲基]三苯酚，批號：195007-201601，純度：99.6%]、抗氧劑1076[β-（3，5-二叔丁基-4-羥基苯基）丙酸十八碳醇酯，批號：195009-201601，純度：99.5%]（中國食品藥品檢定研究院）；抗氧劑168[三（2，4-二叔丁基）亞磷酸苯酯，批號：172881，純度：98.5%，LGC]；四氫呋喃、甲醇（色譜純，Fisher）；乙腈（色譜純，Tedia）；二氯甲烷和甲苯（分析純，國藥集團）。

醋酸鈉林格注射液（規格：500 mL，批號：B19041901，B19041902，B19041903，A公司），五層共擠輸液用袋（批號：2001680853，2001680898，2001680930，B公司），聚丙烯接口（批號：1809151）、聚丙烯組合蓋（批號：1811012）（C公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

采用TechMate C18-STII（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動相為水-四氫呋喃-乙腈（1∶3∶6），流速為1.5 mL·min-1，檢測波長為280 nm，柱溫為40℃，進樣量為20 μL。

2.2 對照品溶液的制備

稱取抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑168、抗氧劑1076對照品適量，加入少量二氯甲烷溶解，以二氯甲烷-甲醇（3∶7）稀釋至含抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑168、抗氧劑1076各約0.24 mg· mL-1的混合對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 包材提取試驗供試品溶液的制備 取包材樣品約2.0 g，精密稱量，置于燒瓶中，加入甲苯80 mL，持續攪拌，加熱回流1.5 h，冷卻至60℃，在攪拌下加入甲醇120 mL，燒結玻璃過濾器濾過。用甲苯-甲醇（4∶6）混合液25 mL清洗燒瓶和濾渣，將清洗液與濾液合并，并用相同的混合溶劑稀釋至250 mL。取50 mL在45℃真空蒸干，殘渣用二氯甲烷-甲醇（3∶7）溶解殘留物并定容至5 mL，0.45 μm有機膜過濾，即為包材提取試驗供試品溶液。同法制備空白溶液。

2.3.2 相容性提取試驗供試品溶液的制備 模擬并適當加強滅菌工藝條件，考察目標物的浸出情況。取五層共擠輸液用袋，剪切成0.5 cm×2 cm條狀，按表面積6 cm2· mL-1比例加入醋酸鈉林格注射液100 mL；分別取聚丙烯接口、組合蓋，剪成小塊，按0.2 g·mL-1比例加入醋酸鈉林格注射液100 mL，置高壓蒸汽滅菌器中，121℃浸提1 h，取出放冷至室溫，作為提取試驗供試品溶液。固相萃取柱使用前分別用3 mL甲醇和3 mL水依次活化。量取提取試驗供試品溶液100 mL，以約1.5 mL·min-1的流速通過固相萃取柱，用6 mL水淋洗，再分別用5 mL甲醇、3 mL二氯甲烷依次洗脫，收集洗脫液，用甲醇稀釋至10 mL，0.45 μm有機膜過濾后進樣測定。同法配制空白溶液。

2.3.3 相容性遷移試驗供試品溶液的制備 固相萃取柱使用前分別用3 mL甲醇和3 mL水依次活化。量取醋酸鈉林格注射液100 mL，以約1.5 mL·min-1的流速通過固相萃取柱，用6 mL水淋洗，再分別用5 mL甲醇、3 mL二氯甲烷依次洗脫，收集洗脫液，用甲醇稀釋至10 mL，0.45 μm有機膜過濾后進樣測定。同法配制空白溶液。

2.4 測定方法

將對照品溶液、供試品溶液與空白溶液分別注入高效液相色譜儀，采用外標法定量。要求抗氧劑對應峰之間的分離度均不小于2.0，空白溶液在抗氧劑的出峰位置不得有干擾。

2.5 方法學考察

2.5.1 專屬性試驗 取制備好的抗氧劑對照品溶液、空白溶液、供試品溶液，在“2.1”項色譜條件下進行測定，抗氧劑1010的保留時間為5.3 min；抗氧劑330的保留時間為6.5 min；抗氧劑1076的保留時間為11.2 min；抗氧劑168的保留時間為12.8 min，各峰分離良好，醋酸鈉林格注射液及空白溶液無干擾，典型色譜圖見圖1。

圖1 典型HPLC色譜圖Fig 1 Typical HPLC chromatogram

2.5.2 線性關系考察 以二氯甲烷-甲醇（3∶7）溶液稀釋抗氧劑對照品，制得含抗氧劑1010質量濃度為0.4596、1.149、2.298、4.596、22.98、45.96、229.8、459.6 μg· mL-1，含抗氧劑330質量濃度為0.4594、1.148、2.297、4.594、22.97、45.94、229.7、459.4 μg· mL-1，含抗氧劑1076質量濃度為1.173、2.346、4.692、23.46、46.92、234.6、469.2 μg· mL-1，含抗氧劑168質量濃度為1.152、2.305、4.610、23.05、46.10、230.5、461.0 μg· mL-1的系列混合對照品溶液，依法測定，以質量濃度為橫坐標，響應值為縱坐標，進行線性回歸，結果見表1，表明4種抗氧劑在各自質量濃度范圍內與峰面積線性關系良好。

表1 線性關系結果 Tab 1 Linearity

2.5.3 精密度試驗 取質量濃度均為0.24 μg·mL-1的4種抗氧劑混合對照品溶液，連續進樣6次，以峰面積計算RSD值，結果抗氧劑1100、抗氧劑330、抗氧劑1076、抗氧劑168的峰面積RSD分別為0.32%、0.16%、0.21%、0.25%，表明儀器精密度良好。

2.5.4 包材提取試驗回收率 取五層共擠輸液用袋，聚丙烯接口、組合蓋，剪成小塊混合，精密稱定（約2.0 g），按“2.3.1”項下方法制備回收率本底供試品溶液；同法加入低、中、高濃度的抗氧劑對照溶液，制備回收率加標供試品溶液，進樣測定，計算回收率，結果見表2，表明包材提取試驗準確度良好。

2.5.5 相容性提取試驗和遷移試驗回收率 固相萃取柱使用前分別用3 mL甲醇和3 mL水依次活化。分別取24 μg·mL-1、46 μg·mL-1、240 μg·mL-1的低、中、高質量濃度對照溶液1 mL，加入醋酸鈉林格注射液至100 mL，混勻。溶液以約1.5 mL·min-1的流速通過固相萃取柱，用6 mL水淋洗，分別用5 mL甲醇、3 mL二氯甲烷依次洗脫，收集洗脫液，用甲醇稀釋至10 mL，0.45 μm有機膜過濾后進樣測定，結果見表2，表明提取遷移試驗準確度良好。

表2 回收試驗考察結果 Tab 2 Recovery

2.5.6 檢測限和定量限 取抗氧劑對照品溶液用二氯甲烷-甲醇（3∶7）逐步稀釋測定，以各抗氧劑峰信噪比S/N為3的質量濃度作為檢測限，以S/N為10的質量濃度作為定量限，結果見表3。

表3 抗氧劑的檢測限與定量限 Tab 3 LOD and LOQ of different antioxidants

2.5.7 穩定性試驗 將混合對照品溶液分別于0、16、24、48、96 h進樣測定，結果抗氧劑1100、抗氧劑330、抗氧劑1076、抗氧劑168的峰面積RSD值分別為1.4%、1.4%、1.1%、0.90%，表明抗氧劑對照品在二氯甲烷-甲醇（3∶7）溶劑中穩定性良好。

2.6 樣品測定

2.6.1 包材提取試驗測定結果 取包材樣品，照“2.3.1”項下方法進行制備，按外標法計算五層共擠輸液用袋、聚丙烯接口、聚丙烯組合蓋中各抗氧劑的含量，結果見表4。

表4 包材中抗氧劑含量(%) Tab 4 Content of antioxidants in packaging materials (%)

2.6.2 相容性提取試驗測定結果 取醋酸鈉林格注射液及包材樣品，按“2.3.2”項下方法進行制備，按外標法計算抗氧劑在提取液中的浸出量，提取液中的抗氧劑含量均低于檢測限。

2.6.3 相容性遷移試驗測定結果 取醋酸鈉林格注射液3批樣品，照“2.3.3”項下方法進行制備，按外標法計算抗氧劑在注射液中的遷移量，注射液中的抗氧劑含量均低于檢測限。

3 討論

3.1 溶劑的選擇

歐洲藥典方法中使用四氫呋喃-乙腈（1∶1）作為溶劑[10]。筆者在試驗中發現，抗氧劑168在使用該溶劑配制對照品溶液時不穩定，連續進樣6次，峰面積呈連續下降趨勢，1.5 h峰面積下降了22%。經過條件優化，最終選擇二氯甲烷-甲醇（3∶7）溶液作為溶劑，4種抗氧劑峰形良好，溶液穩定性良好，96 h內峰面積沒有明顯變化。

3.2 固相萃取小柱的選擇

抗氧劑在注射液中的遷移量很小，且不溶于水，本試驗采用Cleanert S C18固相萃取柱進行富集。該固相萃取柱為高純球型硅膠基質的反相C18萃取柱，既通過強疏水作用保留非極性化合物，又避免了普通C18對堿性與極性物質的過度吸附，更適合用于萃取低濃度分析物。

3.3 分析評價閾值（AET）與方法檢測限比較

根據《化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則（試行）》[9]要求，分析測試方法應滿足待測物AET的測定要求，選擇可達到其能靈敏檢出的分析方法。AET計算方法為各抗氧劑最大日暴露量（PDE）與最大劑量的比值，醋酸鈉林格注射液的最大日劑量為1000 mL，即AET＝PDE/1000。由文獻[21]可知，PDE值有兩種計算方法，可采用口服途徑PDE數據的10%計算注射途徑的PDE值，則抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076、抗氧劑168的PDE值分別為15、5、0.5、5 mg·d-1，其對應的AET值分別為15、5、0.5、5 μg·mL-1；也可按動物NOEL數據計算注射途徑的PDE值，抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076、抗氧劑168的PDE值分別為10、200、0.3、2.5 mg·d-1，則其對應的AET值分別為10、200、0.3、2.5 μg·mL-1。本方法抗氧劑1010、抗氧劑330、抗氧劑1076、抗氧劑168的提取遷移試驗檢測限分別為0.011、0.011、0.023、0.046 μg·mL-1，遠低于兩種方法對應的AET值，靈敏度高，方法可行。

3.4 安全性評估

五層共擠輸液袋、聚丙烯接口及聚丙烯組合蓋中的抗氧劑單個含量和總含量均小于0.3%，符合歐洲藥典[10]和《化學藥品注射劑與塑料包裝材料相容性研究技術指導原則（試行）》[9]規定的單個抗氧劑含量不得過0.3%，總量不得過0.3%的限度要求。五層共擠輸液袋、聚丙烯接口及聚丙烯組合蓋在醋酸鈉林格注射液高壓121℃浸提1 h的提取試驗及遷移試驗中檢出量均低于檢測限，試驗結果可為其安全性提供數據參考。