乙肝病毒感染血清標(biāo)志物的免疫檢驗(yàn)方法對比研究

姚 輝 張 靜

(1 山東省濟(jì)南市第二人民醫(yī)院/檢驗(yàn)科 山東 濟(jì)南 250021 2 山東省運(yùn)動康復(fù)研究中心檢驗(yàn)科 山東 濟(jì)南 250102)

乙肝病毒是乙型病毒性肝炎的病原體，還可導(dǎo)致肝硬化、肝癌等疾病，是現(xiàn)代人健康的重要威脅之一[1]。乙肝病毒對比一般病毒具有潛伏期長、病程長、發(fā)病緩慢，以及患者發(fā)病后期并發(fā)癥多等特點(diǎn)，并且乙肝病毒的傳播途徑廣、傳染性強(qiáng)，對此在乙肝病毒感染早期加強(qiáng)診斷，盡早進(jìn)行處理和治療，對于改善患者預(yù)后，提高患者生活質(zhì)量，具有重要的意義[2]。免疫檢查是臨床診斷乙型病毒感染的常規(guī)方法，一般有兩種方法即電化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法，兩種方法各具優(yōu)勢，診斷效果具有明顯差異[3]。本文即擇選2018年2月至2021年9月我院收治的80例乙肝病毒感染患者為研究對象，就不同免疫檢驗(yàn)方法在乙肝病毒感染血清標(biāo)志物中的檢驗(yàn)效果進(jìn)行了分組對比研究，現(xiàn)作如下匯報(bào)：

1 資料與方法

1.1 一般資料

擇取我院2018年2月至2021年9月收治的乙肝病毒感染患者80例為研究對象，獲取其血液標(biāo)本。80例患者中，男性43例，女性37例，年齡38～67歲，均值(51.14±12.06)歲。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①80例患者均經(jīng)臨床診斷和實(shí)驗(yàn)室診斷確診為乙肝病毒感染患者；②患者基本資料完整；③患者了解本組研究全部內(nèi)容，并在知情同意書上簽字。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除合并心肺等臟器嚴(yán)重功能障礙患者；②排除資料不全者；③排除精神異常、意識不清者；④排除合并其他傳染病，或惡性腫瘤患者。

1.2 方法

標(biāo)本采集，患者在術(shù)前和輸血前分別抽取靜脈血，血樣取肘靜脈血，體積為5.0ml，給予離心處理后，收集血清標(biāo)本。血清標(biāo)本共兩份，一份用于丙型肝炎RNA檢測，一份在-20℃條件保存，用于乙肝肝炎抗體和乙肝肝炎核心抗原檢測。

電化學(xué)發(fā)光法，使用全自動免疫分析儀進(jìn)行檢測，試劑選擇原裝配套試劑。取患者外靜脈血標(biāo)本，給予離心處理，3000轉(zhuǎn)/min，離心10min，取上層血清進(jìn)行檢驗(yàn)，各項(xiàng)檢驗(yàn)操作嚴(yán)格遵守相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。如樣本A值與標(biāo)準(zhǔn)值對比高出，則表明為陽性。

酶聯(lián)免疫吸附法，使用全自動酶標(biāo)分析儀完成檢驗(yàn)，使用原裝配套試劑。取患者外靜脈血標(biāo)本，給予離心處理，3000轉(zhuǎn)/min，離心10min，取上層血清進(jìn)行檢驗(yàn)，各項(xiàng)檢驗(yàn)操作嚴(yán)格遵守相關(guān)規(guī)定進(jìn)行。如樣本A值與臨界值對比高出，則表明為陽性。

80例患者均接受電化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法檢驗(yàn)，兩組結(jié)果分別進(jìn)行對比。

1.3 觀察指標(biāo)

分別就兩組檢查結(jié)果進(jìn)行對比，檢測血清標(biāo)志物，包括HBeAg、HBsAg、HBeAb、HBcAb、HBsAb，計(jì)算診斷準(zhǔn)確率和陽性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

兩組診斷準(zhǔn)確率對比結(jié)果，見表1，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表1 兩組診斷準(zhǔn)確率對比表(n，%)

兩組血清標(biāo)志物陽性率對比結(jié)果，見表2，統(tǒng)計(jì)學(xué)有差異(P<0.05)。

表2 兩組血清標(biāo)志物陽性率對比表(n，%)

3 討論

乙型肝炎病毒是一種嗜肝DNA病毒科病毒，是乙型肝炎的病原體，包含正嗜肝DNA病毒屬和禽嗜肝DNA病毒屬兩個(gè)屬，前者可以引起人體感染。乙肝病毒感染是全球性的重大公共衛(wèi)生問題，近幾年隨著醫(yī)療事業(yè)不斷發(fā)展，以及乙肝疫苗的普及，乙肝病毒感染率已經(jīng)有下降的趨勢，但由于乙肝病毒的傳染途徑豐富、傳染面廣，乙肝仍是現(xiàn)代人健康的重要威脅[4]。乙型肝炎是乙型肝炎病毒導(dǎo)致的病毒性肝炎，一般分為急性、慢性兩類，臨床提到的乙肝主要是指慢性乙型肝炎。慢性乙型肝炎具體是指乙型肝炎病毒感染持續(xù)時(shí)間6個(gè)月以上，且肝臟已經(jīng)出現(xiàn)炎癥壞死，或肝纖維化病變的慢性疾病[5]。乙型肝炎病毒的流行是世界性流行，不同國家、不同地區(qū)的流行強(qiáng)度存在很大差異，根據(jù)世界衛(wèi)生組織相關(guān)數(shù)據(jù)，全球慢性乙型肝炎患者接近3億，其中進(jìn)70%的患者處于非洲和西太平洋地區(qū)，每年超過88萬人因乙型肝炎死亡。我國近幾年醫(yī)療事業(yè)發(fā)展迅速，乙肝疫苗普及良好，據(jù)中國疾病預(yù)防控制中心相關(guān)數(shù)據(jù)，在1～4歲、5～14歲、15～29歲人群中，目前乙肝的發(fā)病率已經(jīng)對比1992年下降了30.2倍、11.5倍和2.2倍。乙型肝炎在國內(nèi)的流星率約為5.0%～6.0%，我國慢性乙肝患者超過2000萬例[6]。總的來說，我國仍存在較高的乙肝風(fēng)險(xiǎn)，加強(qiáng)乙肝的早期診斷，提高早期診斷準(zhǔn)確率，對于保障感染患者健康安全，改善預(yù)后，具有積極的作用和意義。

乙肝病毒感染是慢性乙型肝炎的根本病因，乙肝病毒具有對低溫、高溫、干燥、紫外線、一般濃度消毒劑的良好耐受能力，抵抗力強(qiáng)，可通過血液、母嬰、性接觸、皮膚黏膜等途徑傳播，乙型肝炎患者和乙肝病毒攜帶者是乙型肝炎的主要傳染源[7]。乙肝病毒不會通過消化道和呼吸道傳播，一些吸血昆蟲，如蚊子、臭蟲等也基本不會傳播乙肝病毒。血液、體液傳播是乙肝病毒的主要傳播渠道，如果受污染的血液或體液進(jìn)入健康人體內(nèi)，及時(shí)劑量極少，也會導(dǎo)致乙肝病毒感染。近幾年，我國在獻(xiàn)血員管理方面采取了諸多有效措施，通過嚴(yán)格篩查，血液傳播導(dǎo)致的乙肝病毒感染已經(jīng)明顯減少，但血液傳播以及風(fēng)險(xiǎn)注射仍是乙肝病毒傳播的主要途徑。母嬰傳播是血液傳播外第二大傳播途徑，包括宮內(nèi)感染、圍生期傳播、分娩后傳播等。從癥狀來看，慢性乙型肝炎患者在發(fā)病早期各項(xiàng)癥狀并不明顯，一般以頭暈、乏力、食欲減退為主，隨著癥狀的加重，患者可能出現(xiàn)蜘蛛痣、肝掌、肝脾重大等癥狀，如病情進(jìn)一步惡化，還會出現(xiàn)失代償期肝硬化、肝功能嚴(yán)重?fù)p害等癥狀。具體來說，乙型肝炎在輕度階段，癥狀一般較輕，且不具有典型性，常見癥狀包括食欲減退、乏力、頭暈、尿黃、肝區(qū)不適等，部分患者會有失眠、睡眠質(zhì)量下降、肝區(qū)輕微觸痛等癥狀。如果癥狀發(fā)展至重度階段，患者則會有明顯的肝炎癥狀，包括食欲減退、乏力、尿黃、腹脹、稀便等。面容會有臉色發(fā)黑、面色暗沉、皮膚干燥粗糙、嚴(yán)重者還會有古銅色表現(xiàn)。肝掌，患者手掌會有明顯變大表現(xiàn)，存在紅色斑點(diǎn)，按壓后會變白。蜘蛛痣，中心為紅色，周邊會有放射性狀的毛細(xì)血管癥狀，整體形狀與蜘蛛類似[8]。鑒于乙型肝炎的危害性和危險(xiǎn)性，在乙型肝炎早期加強(qiáng)診斷對于疾病控制具有積極的意義，但由于乙型肝炎早期癥狀不明顯，其臨床診斷也存在著一定的困難。

乙肝病毒血清標(biāo)志物與機(jī)體免疫反應(yīng)之間有著密切的聯(lián)系。HBsAg是乙肝病毒外殼蛋白，不具備傳染性，如患者感染乙肝病毒，則HBsAg水平明顯升高，因此該指標(biāo)也常用于乙肝病毒感染的診斷[9]。HBsAg會在患者感染乙肝病毒后2周內(nèi)出現(xiàn)，一般在6個(gè)月內(nèi)會有明顯的升高表現(xiàn)，多數(shù)患者會有持續(xù)的陽性狀態(tài)。受HBsAg升高影響，HBsAb水平也會明顯升高，該物質(zhì)可與HBsAg相結(jié)合，通過一系列免疫過程清除乙肝病毒，進(jìn)而完成對乙肝病毒感染的控制。HBsAb是一種中和抗體，其水平高低可以評估機(jī)體感染乙肝病毒后的免疫情況，如HBsAb水平升高，證明機(jī)體受乙肝病毒感染后免疫力存在，血清HBsAg轉(zhuǎn)陰后約兩周可以檢出。HBeAg是乙肝病毒核心顆粒可溶性蛋白質(zhì)，存在于HBcAg內(nèi)，后者在裂解后，HBeAg可以融入血清內(nèi)。HBeAg也是乙肝病毒感染的重要評判標(biāo)準(zhǔn)，其檢測結(jié)果為陽性，則正在此時(shí)的傳染性強(qiáng)，是乙肝病毒的活躍期。HBeAg證明乙肝病毒的復(fù)制已經(jīng)處于相對靜止?fàn)顟B(tài)，傳染性降至較低水平，病情得到一定控制。HBcAb是肝細(xì)胞在乙型肝炎核心抗原刺激作用下產(chǎn)生的免疫球蛋白，與乙肝病毒復(fù)制活躍度正相關(guān)，無保護(hù)機(jī)體的作用，水平升高則表明病毒傳染性增強(qiáng)[10]。通過以上分析可知，乙肝病毒血清標(biāo)志物與乙肝病毒感染關(guān)系密切，由此可了解機(jī)體感染和免疫情況。

現(xiàn)階段，血清標(biāo)志物的臨床檢測和診斷主要采用電化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫吸附法兩種方法。酶聯(lián)免疫吸附法又稱酶標(biāo)抗體法，是借助酶對抗原和抗體進(jìn)行標(biāo)注，并實(shí)施檢測的一種免疫學(xué)標(biāo)記技術(shù)。促使目標(biāo)抗體或抗原與固相載體表面結(jié)合，保留其免疫活性，以酶活性作為目標(biāo)抗體的檢測信號，是酶聯(lián)免疫吸附法的基本操作原理。這種技術(shù)的優(yōu)勢在于靈敏度高、特異性好，檢測速度快，在大批量樣本檢測應(yīng)用中有著優(yōu)異表現(xiàn)。電化學(xué)發(fā)光法是分子發(fā)光光譜分析法的一種，是借助化學(xué)檢測體系包含的待測物濃度，與體系化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度在某種條件下呈現(xiàn)線性定量關(guān)系理論，通過儀器對待測物含量進(jìn)行測定的痕量分析方法。與酶聯(lián)免疫吸附法相比，電化學(xué)發(fā)光法更為先進(jìn)，在臨床檢驗(yàn)準(zhǔn)確率方面更具有優(yōu)勢，并且具有自動重復(fù)、自動稀釋等優(yōu)勢技術(shù)，可在提高檢測準(zhǔn)確率的基礎(chǔ)上，縮短檢測時(shí)間。

本組研究結(jié)果顯示，診斷準(zhǔn)確率方面，研究組準(zhǔn)確率高達(dá)92.5%，而對照組僅有72.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。研究組在HBeAg陽性率、HBsAg陽性率和HBeAb陽性率方面高于對照組，差異統(tǒng)計(jì)學(xué)有意義P<0.05，而在HBcAb陽性率和HBsAb陽性率方面兩組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P>0.05。

4 結(jié)語：

乙肝病毒感染免疫檢驗(yàn)中，電化學(xué)發(fā)光法對比酶聯(lián)免疫吸附法具有更高的準(zhǔn)確率，HBeAg陽性率、HBsAg陽性率和HBeAb陽性率明顯優(yōu)于后者，值得臨床推廣和應(yīng)用。