清解敗毒顆粒鎮咳、祛痰、平喘和抗炎的藥效學試驗

景慕嫻 ， 李連缺 ， 王志玲 ， 張寶元 ， 劉 明 ， 孟志敏

(1.石家莊江山動物藥業有限公司 ， 河北 石家莊 050200 ； 2.河北省口服獸藥制劑技術創新中心 ， 河北 石家莊 050200 ; 3.河北工程大學生命科學與食品工程學院 ， 河北 邯鄲 056000 ； 4.石家莊市牧工商開發總公司 ， 河北 石家莊 050000)

新獸藥制劑清解敗毒顆粒由麻黃、枇杷葉、苦杏仁、黃芩、柴胡、石膏、甘草等組成。此方源于《傷寒論》的名方麻杏石甘湯，具有清熱、宣肺、平喘的作用，對肺熱咳喘的療效顯著[1-2]。為進一步研發和申報新藥，推廣清解敗毒顆粒的臨床使用，根據國家3類新獸藥要求，對其主要藥效學進行試驗研究。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑 清解敗毒顆粒(批號20181026，規格：每1 g相當于原生藥1 g，100 g/袋)，購自石家莊江山動物藥業有限公司；麻杏石甘散(批號20180323)，購自河北新世紀藥業有限公司；復方甘草浙貝氯化銨片，購自浙江康恩貝制藥股份有限公司；氨水、二甲苯，均購自天津市科密歐化學試劑有限公司；酚紅，購自天津市風帆化學試劑科技有限公司；氨茶堿片，購自天津力生制藥股份有限公司；磷酸組織胺、氯化乙酰膽堿，均購自上海三思試劑有限公司；醋酸地塞米松片，購自浙江仙琚制藥股份有限公司。

1.2 儀器 小動物霧化給藥儀，購自江蘇賽昂斯生物科技有限公司；酶標儀，購自Bio-Rad公司；引喘儀，購自江蘇賽昂斯生物科技有限公司；電子天平，購自賽多利斯科學儀器(北京)有限公司。

1.3 動物 SPF級昆明小鼠，18～22 g，雌雄各半；SPF級豚鼠，雄性，體重150～200 g，均購自北京華阜康生物科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 鎮咳作用 釆用氨水誘咳法[3]。取小鼠120只，雌雄各半，隨機平均分為6組：清解敗毒顆粒高、中、低劑量組[16.20、8.10、4.05 g/(kg·bw)，相當于原生藥的6.0、3.0、1.5倍]；麻杏石甘散組[8.10 g/(kg·bw)，相當于原生藥的3倍]；復方甘草浙貝氯化銨片組[115.71 mg/(kg·bw)，相當于人用劑量的9倍]; 造模組(純化水)。小鼠灌胃給藥，1 次/d，連續給藥7 d，于末次給藥后1 h，將小鼠逐個放入5 L的干燥器內，用超聲霧化器向內噴入25%氨水溶液15 s，立即開始記錄小鼠的咳嗽潛伏期和3 min內咳嗽次數。

1.4.2 祛痰作用 采用氣管段酚紅排泄法[3]。精密稱取酚紅適量，用5%碳酸氫鈉溶液配置成不同濃度溶液，用酶標儀測定OD值，繪制標準曲線并計算出回歸方程。取小鼠120只，雌雄各半，隨機平均分為6組，組別及劑量同1.4.1。小鼠灌胃給藥，1次/d，連續給藥7 d，末次給藥后1 h，腹腔注射5%酚紅生理鹽水溶液0.2 mL/(10 g·bw)，30 min后將小鼠脫頸處死，仰位固定于手術板上，剪開頸部皮膚，分離氣管，取自甲狀軟骨處至氣管分叉處的氣管段，將氣管段放入1.5 mL 5%的碳酸氫鈉溶液中，充分振搖，靜置1 h，于酶標儀546 nm處測定OD值，根據回歸方程計算酚紅含量。

1.4.3 平喘作用 采用組胺引喘法[3]。取豚鼠60只，雌雄各半，隨機平均分為6組：清解敗毒顆粒高、中、低劑量組[1.62、3.24、6.48 g/(kg·bw)，相當于原生藥的0.6、1.2、2.4倍]；麻杏石甘散組[3.24 g/(kg·bw)，相當于原生藥的1.2倍]；氨茶堿片組[21.43 mg/(kg·bw)，相當于人用量的5倍]；造模組(純化水)。豚鼠灌胃給藥，1次/d，連續給藥3 d，末次給藥后1 h，按相同劑量再次給藥，30 min后將豚鼠至于連接有超聲波霧化器的倒置5 L干燥器內，持續噴霧2%氯化乙酰膽堿(Ach)和1%磷酸組胺等體積混合液15 s，觀察豚鼠的哮喘反應，以5 min內豚鼠跌倒翻滾開始，記錄引喘潛伏期，超過5 min以300 s計算，記錄豚鼠的平喘潛伏期。

1.4.4 抗炎作用 采用小鼠二甲苯耳腫脹法[4]。取小鼠60只，雌雄各半，隨機平均分為6組：清解敗毒顆粒高、中、低劑量組(劑量同1.4.1)；麻杏石甘散組(劑量同1.4.1)；醋酸地塞米松片組[0.19 mg/(kg·bw)，相當于人用量的9倍]；造模組(純化水)。小鼠灌胃給藥，1次/d，連續給藥7 d，末次給藥30 min后，小鼠右耳前后均勻涂抹致炎劑二甲苯(20 μL/只)致炎，30 min后頸椎脫臼處死小鼠，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑6 mm的打孔器打下雙耳同一部位耳片，用分析天平稱質量，兩耳質量之差即為腫脹度(mg)，并計算腫脹抑制率(%)。腫脹抑制率/%=(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度×100%。

2 結果

2.1 鎮咳作用 結果如表1所示，與造模組比較，復方甘草浙貝氯化銨片組、麻杏石甘散組及清解敗毒顆粒高、中、低劑量組可明顯延長小鼠咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數(P<0.01或P<0.05)；與復方甘草浙貝氯化銨片組比較，清解敗毒顆粒各組小鼠咳嗽潛伏期和咳嗽次數無顯著差異(P>0.05)；與麻杏石甘散組比較，清解敗毒顆粒各組小鼠咳嗽潛伏期明顯變短、咳嗽次數明顯減少(P<0.05)。

表1 清解敗毒顆粒對氨水引咳小鼠的影響

2.2 祛痰作用 酚紅的標準曲線相關性良好，回歸方程為Y=0.029 7X+0.039 6，R2=0.998 8。同造模組相比，復方甘草浙貝氯化銨片組、麻杏石甘散組及清解敗毒顆粒高、中、低劑量組小鼠氣管酚紅的排泄量顯著增加(P<0.01或P<0.05)；與復方甘草浙貝氯化銨片組比較，清解敗毒顆粒低劑量組及麻杏石甘散組排泄量明顯變少(P<0.05)，高、中劑量組效果無顯著差異(P>0.05)；與麻杏石甘散組比較，高、中劑量組排泄量明顯增加(P<0.05)，低劑量組無顯著差異(P>0.05)，結果見表2。

表2 清解敗毒顆粒對小鼠氣管酚紅排泌量的影響

2.3 平喘作用 與造模組比較，氨茶堿片組、麻杏石甘散組及清解敗毒顆粒高、中、低劑量組豚鼠的引咳潛伏期顯著延長(P<0.01)；與氨茶堿片組或麻杏石甘散組比較，清解敗毒顆粒各組的引咳潛伏期無顯著差異(P>0.05)，結果見表3。

表3 清解敗毒顆粒對豚鼠引喘潛伏期的影響

2.4 抗炎作用 與造模組比較，醋酸地塞米松片組、麻杏石甘散組及清解敗毒顆粒高、中、低劑量組可顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹度(P<0.01或P<0.05)；清解敗毒顆粒各組的抗炎效果與醋酸地塞米松片組比較無顯著差異(P>0.05)，與麻杏石甘散組比較差異顯著(P<0.05)。清解敗毒顆粒低、中、高劑量組的抑制率分別為24.80%、49.21%、72.44%，即隨劑量的增加抑制率增高，但均高于麻杏石甘散組(20.08%)，其中高劑量組腫脹抑制率略高于醋酸地塞米松片組(64.96%)，見表4。

表4 清解敗毒顆粒對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響

3 討論

肺熱咳喘是家禽養殖中一種常見的呼吸道疾病，臨床表現為高熱、咳嗽、喘鳴、呼吸困難等，常因氣管水腫使氣道狹窄，被炎性滲出物堵塞而導致窒息死亡，造成更為嚴重的損失。目前，西醫主要采用對癥治療，配以抗生素，但無法根治，且長期反復使用抗生素易產生耐藥性，使得病情反復發生；而中獸醫治療肺熱咳喘，崇尚標本兼治，整體調節，見效快，不良反應少，是一種十分有效和可行的途徑[5-7]。

清解敗毒顆粒為復方制劑，該處方是在麻杏石甘散的基礎上研究多年而成的加減方[8-10]。處方由麻黃、石膏、黃芩等七味藥組成，具有清熱化痰、止咳、平喘之功效。方中麻黃辛散苦泄、宣肺平喘、利水消腫，石膏清熱瀉火、生津止渴，兩者配伍，清解肺熱而不涼遏，又是相制為用，共為君藥[11]；苦杏仁降利肺氣而平喘，枇杷葉降逆化痰而止咳[12]，兩者協同麻黃以平喘化痰止咳，為臣藥；柴胡清解寒邪、疏解氣機，配以黃芩清泄郁熱、解表泄熱，兩者共為佐藥而作向導借以牽制麻黃辛溫之性而轉為辛涼清熱之用[13]；甘草補脾益氣、祛痰止咳、緩急止痛、調和諸藥，為使藥；全方配伍，有散有清，有宣有降，對表邪(風熱、風寒均可)化熱犯肺，無論有汗無汗，均可應用[14]。

本試驗表明，清解敗毒顆粒可顯著延長小鼠咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數，增加小鼠氣管酚紅排泄量，延長豚鼠的引咳潛伏期，對二甲苯致小鼠的耳腫脹具有抑制作用。尤其在延長小鼠咳嗽潛伏期、減少咳嗽次數和增加小鼠氣管酚紅的排泄量方面，效果優于基礎方麻杏石甘散。綜上所述，清解敗毒顆粒具有良好的鎮咳、祛痰、平喘及抗炎作用。