通 微 消 痔 顆 粒 的 藥 效 學(xué) 作 用▲

李開(kāi)雙 李燕婧 蘇 華 曾憲彪 鄧聿胤 鄭海平

(廣西中醫(yī)藥研究院中藥藥理所，南寧市 530022，電子郵箱：lks196410@163.com)

痔瘡是一種常見(jiàn)的肛腸疾病，表現(xiàn)為齒線部血管性肛墊發(fā)生病理性肥大、下移，以及肛周皮下血管出現(xiàn)擴(kuò)張瘀血、血栓或破裂所形成的團(tuán)塊。在臨床上，痔瘡一般分為內(nèi)痔、外痔和混合痔三種類(lèi)型[1-2]。痔瘡的發(fā)病誘因較多，不良生活習(xí)慣和如廁習(xí)慣、腸道疾病及外部環(huán)境的改變都能誘發(fā)痔瘡，痔瘡的患病率較高，不同年齡的人群均有可能發(fā)病[3-4]，故有“十人九痔”之說(shuō)。如果不及時(shí)有效地治療，痔瘡進(jìn)一步發(fā)展可能導(dǎo)致貧血、肛裂、肛瘺、肛周膿腫等，少數(shù)還有可能引起癌變[5]?？梢?jiàn)，痔瘡的發(fā)生和發(fā)展對(duì)患者的身體健康具有極大的危害，研究開(kāi)發(fā)安全有效的痔瘡治療藥物具有重要意義。

通微消痔顆粒是根據(jù)廣西民間的驗(yàn)方，結(jié)合現(xiàn)代中醫(yī)藥理論研制而成，其包含地桃花、倒扣草、地錦草、地榆四味藥材。本方是為濕熱下注、氣滯血瘀證的痔瘡而設(shè)，以清熱解毒，活血消腫、潤(rùn)腸通便為法，用于肛門(mén)腫痛、瘙癢、麻木、便血、痔核脫出等癥狀。為探明其臨床治療效果，我們對(duì)其進(jìn)行藥效學(xué)研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 320只無(wú)特定病原體級(jí)的KM小鼠(4周齡，體重18～22 g，其中雌性190只、雄性130只)和110只SD大鼠(6～7周齡，體重170～250 g，雌雄各半)均由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(湘)2019-0014；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK桂2017-0006]。小鼠、大鼠分性別飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)室溫度為(23±3)℃；相對(duì)濕度為40%～70%，喂食標(biāo)準(zhǔn)顆粒飼料，自由攝食飲水。

1.2 試驗(yàn)菌株 試驗(yàn)菌株包括金黃色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大腸桿菌[CMCC(B)44102]、銅綠假單胞菌[CMCC(B)10104]、枯草芽孢桿菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)98001]，均購(gòu)自廣西南寧生化藥品儀器有限公司。

1.3 藥物與試劑 通微消痔顆粒由廣西麥克健豐制藥有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：200402)；阿司匹林腸溶片由德國(guó)拜耳公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：BJ50920)；藥槐丸由李時(shí)珍醫(yī)藥集團(tuán)有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：201812002)；痔速寧片由江西藥都仁和制藥有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：210403)；新復(fù)方蘆薈膠囊由河北萬(wàn)邦復(fù)臨藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：1808107)；冰醋酸由西隴化工股份有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：190921)；活性炭由廣東光華科技股份有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：20161115)；復(fù)方地芬諾酯片由常州康普藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(生產(chǎn)批號(hào)：202005)；大鼠白細(xì)胞介素6(interleukin 6,IL-6) ELISA試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：F3066-A)、大鼠腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α) ELISA試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：F3056-A)均由上海泛柯實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)；HE染液由北京雷根生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)：0603A20)；胰酪胨大豆肉湯(trypticase soy broth，TSB)培養(yǎng)基(生產(chǎn)批號(hào)：201010)、沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基(生產(chǎn)批號(hào)：200927)均由陸橋技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)；巴豆油由廣西中醫(yī)藥研究院藥理所自制(生產(chǎn)批號(hào)：2019011)。

1.4 主要儀器 Multiskan GO型多功能酶標(biāo)儀為美國(guó)Thermo Scientific公司產(chǎn)品；EG1150 H型石蠟包埋機(jī)、RM2255型切片機(jī)、DM2500型顯微鏡均為德國(guó)徠卡公司產(chǎn)品；RB-200型智能熱板儀為成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品；BS224S型電子分析天平為北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 抗菌實(shí)驗(yàn)：參照相關(guān)文獻(xiàn)[6]，測(cè)定最低抑菌濃度(minimum inhibitory concentration，MIC)。采用試管內(nèi)稀釋法，用含吐溫的TSB培養(yǎng)基或含吐溫的沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基將1 ∶2濃度的通微消痔顆粒溶液進(jìn)行倍比稀釋，配成1 ∶4、1 ∶8、1 ∶16、1 ∶32、1 ∶64、1 ∶128、1 ∶256、1 ∶512等比例的稀釋供試液，第9管作為T(mén)SB培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基對(duì)照，第10管作為受試樣品對(duì)照。分別于第1～9管中加入相應(yīng)稀釋度的通微消痔顆粒溶液后再分別加入制備好的金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌(沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基)菌液0.1 mL，搖勻。檢測(cè)白色念珠菌時(shí)于28℃～30℃下培養(yǎng)24～48 h，其余菌株檢測(cè)時(shí)于33℃下培養(yǎng)24 h，觀察菌株的生長(zhǎng)情況，以不出現(xiàn)混濁的最小質(zhì)量濃度作為受試樣品的MIC。

1.5.2 小鼠耳郭腫脹實(shí)驗(yàn)：參照相關(guān)文獻(xiàn)[7]，觀察通微消痔顆粒對(duì)巴豆油致小鼠耳郭腫脹的影響。取50只KM小鼠，按體重分層隨機(jī)分為對(duì)照組、阿司匹林組和通微消痔顆粒高、中、低劑量組，每組10只(雌雄各半)。阿司匹林組給予0.2 g/kg的阿司匹林(按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予7.0 g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，藥物均使用蒸餾水配制，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，每天按照20 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)5 d。于末次給藥1 h后，用微量注射器取30 μL的2%巴豆油均勻涂于小鼠右耳，4 h后處死小鼠。立即用口徑為8 mm的打孔器，分別于小鼠左右耳郭相同部位打孔取材，然后分別稱重，以兩耳片重量(mg)的差值作為腫脹程度指標(biāo)，并計(jì)算腫脹抑制率(%)。腫脹抑制率(%)=(對(duì)照組平均耳腫脹度-給藥組平均耳腫脹度)/對(duì)照組平均耳腫脹度×100%。

1.5.3 大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)：參照相關(guān)文獻(xiàn)[8]，觀察通微消痔顆粒對(duì)雞蛋清致大鼠足趾腫脹的影響。取50只SD大鼠，按體重分層隨機(jī)分為對(duì)照組、痔速寧片組和通微消痔顆粒高、中、低劑量組，每組10只(雌雄各半)。痔速寧片組給予0.31 g/kg的痔速寧片(按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的5倍)灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予4.00 g/kg、2.00 g/kg、1.00 g/kg通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的6倍)灌胃，藥物均使用蒸餾水配制，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，每天按照10 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)5 d。于末次給藥1 h后，在每只大鼠右后足趾皮下注射10%新鮮雞蛋清溶液(0.1 mL/足)致炎，建成急性足趾腫脹模型。用軟尺分別測(cè)量致炎前及致炎后0.5 h、1 h、2 h、3 h、4 h、5 h的大鼠致炎足趾周徑，計(jì)算足趾腫脹度，腫脹度(mm) = 致炎后足趾周徑(mm)-致炎前足趾周徑(mm)。

1.5.4 熱板實(shí)驗(yàn)：參照相關(guān)文獻(xiàn)[7]進(jìn)行熱板實(shí)驗(yàn)。取60只雌性KM小鼠，將小鼠放在(55±1)℃熱板上，記錄小鼠自置于熱板上至其舔后足的時(shí)間(s)，并將其設(shè)為痛閾值，選擇痛閾值為5～30 s的小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，剔除過(guò)敏(<5 s)或反應(yīng)遲鈍(>30 s)的小鼠。24 h后選取符合條件的小鼠50只，按體重分層隨機(jī)分為對(duì)照組、痔速寧片組和通微消痔顆粒高、中、低劑量組，每組10只。痔速寧片組給予0.62 g/kg的痔速寧片(按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予7.0 g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，藥物均使用蒸餾水配制，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，每天按照20 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)3 d。分別于給藥前及末次給藥后30 min、60 min、120 min、180 min測(cè)定各組小鼠痛閾值，痛閾值超過(guò)60 s的按60 s計(jì)。

1.5.5 扭體實(shí)驗(yàn)：參照相關(guān)文獻(xiàn)[7]進(jìn)行扭體實(shí)驗(yàn)。取KM小鼠50只(雌雄各半)，按體重分層隨機(jī)分為對(duì)照組、阿司匹林組和通微消痔顆粒高、中、低劑量組，每組10只。阿司匹林組給予0.2 g/kg的阿司匹林(按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予7.0 g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，每天按照20 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)3 d。于末次給藥1 h后，每只小鼠按體重給予腹腔注射0.6%醋酸溶液10 mL/kg，立即觀察并記錄20 min內(nèi)小鼠的扭體次數(shù),以扭體次數(shù)作為痛反應(yīng)指標(biāo)。

1.5.6 小鼠小腸蠕動(dòng)抑制模型的制備和小腸運(yùn)動(dòng)功能的評(píng)估：參照相關(guān)文獻(xiàn)[9]，觀察通微消痔顆粒對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)功能的影響。取60只KM小鼠，按體重分層隨機(jī)分成空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、新復(fù)方蘆薈膠囊組和通微消痔顆粒高、中、低劑量組，每組10只(雌雄各半)。新復(fù)方蘆薈膠囊組給予新復(fù)方蘆薈膠囊0.20 g/kg(按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予7.0 g/kg、3.5 g/kg、1.75 g/kg通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，藥物均使用蒸餾水配制，空白對(duì)照組和模型對(duì)照組給予等體積蒸餾水灌胃，每天按照20 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)3 d。末次給藥前，各組小鼠禁食不禁水16 h。末次給藥后1 h，空白對(duì)照組按20 mL/kg給予蒸餾水灌胃，其他組按5 mg/kg給予20 mL/kg的體積復(fù)方地芬諾酯灌胃。給予復(fù)方地芬諾酯30 min后，各組分別按20 mL/kg給予墨汁灌胃。25 min后，立即脫頸椎處死小鼠，打開(kāi)腹腔分離腸系膜，剪取上端自幽門(mén)、下端至回盲部的腸管，置于托盤(pán)上，輕輕將小腸拉成直線，測(cè)量腸管長(zhǎng)度為小腸總長(zhǎng)度，從幽門(mén)至墨汁前緣為墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度。按以下公式計(jì)算墨汁推進(jìn)率。墨汁推進(jìn)率(%)=墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度(cm)/小腸總長(zhǎng)度(cm)×100%。

1.5.7 小鼠凝血功能的評(píng)估實(shí)驗(yàn)：參考相關(guān)文獻(xiàn)[10]，觀察通微消痔顆粒對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響。取50只KM小鼠，按體重分層隨機(jī)分成對(duì)照組、藥槐丸組和通微消痔顆粒高、中、低劑量，每組10只(雌雄各半)。藥槐丸組給予2.00 g/kg的藥槐丸(按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予7.00 g/kg、3.50 g/kg、1.75 g/kg的通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，每天按照20 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)3 d。末次給藥1 h后，用玻片法測(cè)定凝血時(shí)間，即對(duì)小鼠進(jìn)行眼眶取血，用棉球擦去第1滴血，再于載玻片兩端各滴1滴血，立即用秒表計(jì)時(shí)，每隔30 s用清潔針頭自血滴邊緣向里輕輕挑動(dòng)一次，并觀察有無(wú)血絲挑起。從采血開(kāi)始至挑起血絲止，所經(jīng)歷的時(shí)間即為凝血時(shí)間。

1.5.8 小鼠出血時(shí)間的評(píng)估實(shí)驗(yàn)：參考相關(guān)文獻(xiàn)[10]，觀察通微消痔顆粒對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響。取50只KM小鼠，按體重分層隨機(jī)分成對(duì)照組、藥槐丸組和通微消痔顆粒高、中、低劑量組，每組10只(雌雄各半)。藥槐丸組給予2.00 g/kg藥槐丸(按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予7.00 g/kg、3.50 g/kg、1.75 g/kg通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的10倍)灌胃，藥物均使用蒸餾水配制，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，每天按照20 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)3 d。末次給藥1 h后，用斷尾法測(cè)定出血時(shí)間，即固定小鼠尾巴，用剪刀剪去尾尖約1 cm，使血液自行溢出，每隔30 s用濾紙輕輕吸取血滴，以人工形成創(chuàng)面血液自行溢出到出血停止所用的時(shí)間為出血時(shí)間。

1.5.9 大鼠肛門(mén)腫脹模型的建立和通微消痔顆粒的干預(yù)作用：參考相關(guān)文獻(xiàn)[11]，觀察通微消痔顆粒對(duì)巴豆油致大鼠肛門(mén)腫脹的影響。取SD大鼠60只，按體重分層隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、痔速寧片組和通微消痔顆粒高、中、低劑量組，每組10只(雌雄各半)。除正常對(duì)照組外，其他各組用巴豆油混合劑(巴豆油混合液由1份蒸餾水、4份吡啶、5份乙醚和10份6%巴豆油乙醚溶液配制而成)制作大鼠肛門(mén)腫脹模型。制備模型時(shí)把浸吸16 μL巴豆油混合液的棉球(直徑4 mm)插入用乙醚淺麻醉的大鼠肛門(mén)30 s，同時(shí)慢速旋轉(zhuǎn)5圈，建立大鼠肛門(mén)巴豆油腫脹模型。建模后當(dāng)天痔速寧片組給予0.31 g/kg痔速寧片灌胃，通微消痔顆粒高、中、低劑量組分別給予4.0 g/kg、2.0 g/kg、1.0 g/kg的通微消痔顆粒(高劑量按體重?fù)Q算相當(dāng)于人用劑量的6倍)灌胃，藥物均使用蒸餾水配制，正常對(duì)照組給予等體積蒸餾水灌胃，每天按照10 mL/kg的體積灌胃，1次/d，連續(xù)5 d。末次給藥1 h后，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血3 mL，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)的步驟測(cè)定血清炎性因子IL-6和TNF-α水平；切取自肛門(mén)皮毛緣起長(zhǎng)20 mm 的直腸組織，稱重，計(jì)算直腸肛門(mén)系數(shù)：直腸肛門(mén)系數(shù)=直腸組織重量/體重×100 g；然后用10%中性福爾馬林緩沖溶液固定組織,脫水,石蠟包埋，制作切片，行HE染色，光鏡下觀察。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以(x±s)表示，總體數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩兩比較方差齊時(shí)采用LSD-t法，方差不齊時(shí)采用Tamhane′s T2。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 通微消痔顆粒對(duì)5種菌株的體外抗菌作用 通微消痔顆粒對(duì)5種菌株均具有體外抗菌作用，其中對(duì)白色念珠菌的抗菌效果最好，見(jiàn)表1。

表1 通微消痔顆粒對(duì)5種菌株的體外抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果(g藥材/mL)

2.2 通微消痔顆粒對(duì)巴豆油致小鼠耳郭腫脹的影響 阿司匹林和通微消痔顆粒各劑量均可抑制巴豆油所致小鼠耳郭腫脹，其中阿司匹林的腫脹抑制率最高，通微消痔顆粒劑量越大，腫脹抑制率越高。但各組的耳郭腫脹度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 5組小鼠耳郭腫脹情況的比較

2.3 通微消痔顆粒對(duì)雞蛋清致大鼠足趾腫脹的影響 致炎后3 h，痔速寧片組和通微消痔顆粒高劑量組大鼠的足趾腫脹度均小于對(duì)照組(均P<0.05)，但痔速寧片組和通微消痔顆粒高劑量組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 5組大鼠足趾腫脹度的比較(x±s,mm)

2.4 通微消痔顆粒對(duì)小鼠痛閾值的影響 給藥后120 min及180 min，與對(duì)照組比較，痔速寧片組、通微消痔顆粒高、中、低劑量組有提高小鼠痛閾值趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 5組小鼠痛閾值的比較(x±s，s)

2.5 通微消痔顆粒對(duì)小鼠扭體次數(shù)的影響 與對(duì)照組比較，阿司匹林組和通微消痔顆粒各劑量組的小鼠扭體次數(shù)均減少，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。見(jiàn)表5。

表5 5組小鼠扭體次數(shù)的比較 (x±s，次)

2.6 通微消痔顆粒對(duì)小鼠小腸運(yùn)動(dòng)功能的影響 與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組的墨汁推進(jìn)率降低(P<0.05)，說(shuō)明小腸蠕動(dòng)抑制模型制備成功。與模型對(duì)照組比較，新復(fù)方蘆薈膠囊組和通微消痔顆粒高劑量組的墨汁推進(jìn)率升高(均P<0.05)，但新復(fù)方蘆薈膠囊組和通微消痔顆粒高劑量組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

表6 6組小鼠墨汁推進(jìn)率的比較(x±s，%)

2.7 通微消痔顆粒對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響 與對(duì)照組比較，藥槐丸組和通微消痔顆粒高、中劑量組小鼠凝血時(shí)間均縮短，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，見(jiàn)表7。

表7 5組小鼠凝血時(shí)間的比較 (x±s，s)

2.8 通微消痔顆粒對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響 與對(duì)照組比較,藥槐丸組和通微消痔顆粒各劑量組小鼠的出血時(shí)間均縮短(均P<0.05)；且通微消痔顆粒高劑量組的出血時(shí)間短于藥槐丸組(P<0.05)。見(jiàn)表8。

表8 5組小鼠出血時(shí)間的比較 (x±s，s)

2.9 通微消痔顆粒對(duì)巴豆油致大鼠肛門(mén)腫脹的影響 與空白對(duì)照組比較,模型對(duì)照組大鼠的直腸肛門(mén)系數(shù)、炎性因子IL-6及TNF-α水平增高(均P<0.05)。與模型對(duì)照組比較，痔速寧片組和通微消痔顆粒中、低劑量組大鼠直腸肛門(mén)系數(shù)降低(均P<0.05)，痔速寧片組和通微消痔顆粒高劑量組血清炎性因子IL-6及TNF-α水平降低(均P<0.05)，見(jiàn)表9。

表9 6組大鼠直腸肛門(mén)系數(shù)和血清炎性因子水平的比較 (x±s)

由圖1可見(jiàn)，空白對(duì)照組大鼠結(jié)直腸區(qū)結(jié)構(gòu)正常，肛管直腸區(qū)上皮細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞分布排列整齊，黏膜下層微血管無(wú)充血現(xiàn)象；模型對(duì)照組大鼠結(jié)直腸區(qū)黏膜增厚、鱗狀上皮化生、周?chē)M織可見(jiàn)出血；痔速寧片組大鼠結(jié)直腸區(qū)黏膜增厚現(xiàn)象減輕，黏膜下層微血管無(wú)充血；通微消痔高劑量組大鼠結(jié)直腸區(qū)結(jié)構(gòu)正常，肛管直腸區(qū)上皮細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞分布排列整齊，黏膜下層微血管無(wú)充血；通微消痔中、低劑量組大鼠結(jié)直腸區(qū)黏膜增厚、鱗狀上皮化生、黏膜下層微血管充血。

圖1 各組大鼠結(jié)直腸組織形態(tài)學(xué)(HE染色，×100)

3 討 論

祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)痔瘡的研究已有悠久的歷史，也取得了較大的成效。中醫(yī)認(rèn)為，痔瘡的發(fā)病機(jī)制為陰陽(yáng)失調(diào)，臟腑氣血虛損，再加濕、熱、風(fēng)、燥等邪的作用，以及情志內(nèi)傷、飲食不節(jié)等多方面的影響，致使氣血失調(diào)、絡(luò)脈阻滯，瘀血濁氣流注于肛門(mén)，聚集成塊成痔。痔瘡的病因病機(jī)可分虛實(shí)兩種。實(shí)證多為大便不規(guī)律、飲食不節(jié)、憂思過(guò)度等原因，導(dǎo)致外感風(fēng)熱，風(fēng)熱下迫，灼傷腸絡(luò)，擦傷痔核血絡(luò)，則下血或呈噴射狀；或脾胃受損，胃陰虧虛，胃腸積熱，傷津耗液，燥屎內(nèi)結(jié)，氣機(jī)不暢，血脈不通，排便時(shí)損傷直腸內(nèi)壁，筋脈受損，迫血妄行；或因濕熱下注，濕熱毒邪聚集胃腸，耗傷津液，筋脈失養(yǎng)，筋脈弛縱，而生痔瘡。虛證多為久坐久立、長(zhǎng)期勞累、大便不規(guī)律、年老體虛、婦人生產(chǎn)等原因，導(dǎo)致脾虛氣虧，不能統(tǒng)血，血不循經(jīng)而溢于脈外，筋脈失養(yǎng)，而生痔瘡[12]。多種原因可致本病的發(fā)生，本病初起多為實(shí)證，日久則為虛證，因此虛實(shí)夾雜是本病的基本病機(jī)[13]。實(shí)證所致的痔瘡常伴有熱邪內(nèi)盛之象、熱積腸道而迫血妄行，或濕熱內(nèi)蘊(yùn)、氣血瘀滯而腫脹疼痛，治療當(dāng)以清熱祛濕、止血活血、消腫止痛為基本治法。虛證所致的痔瘡常伴有正氣不足、筋脈失養(yǎng)而血溢脈外，或正氣不固、氣血瘀滯而痔核突出，治療當(dāng)以補(bǔ)益正氣、活血化瘀為基本治法[14]。因此，對(duì)于痔瘡的治療當(dāng)兼顧虛實(shí)，以清熱解毒、活血消腫為主要治法，祛除邪氣，恢復(fù)正氣，使氣機(jī)調(diào)達(dá)，則痔瘡可治。痔瘡的中醫(yī)藥治療，主要有內(nèi)治法、外治法、針灸治療、枯痔療法等[2]。廣西壯族民間對(duì)痔瘡的治療也有豐富的經(jīng)驗(yàn)[15-16]。很多壯醫(yī)的驗(yàn)方用于痔瘡的預(yù)防和治療均有較好的效果。

痔瘡患者的主訴癥狀有腫痛、出血、便秘等，此外可因皮膚黏膜破損出現(xiàn)肛周感染等。本研究結(jié)果顯示，通微消痔顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌均具有體外抗菌作用，提示其有助于防治痔瘡并發(fā)的感染。針對(duì)痔瘡的主要臨床表現(xiàn)，我們采用抗菌實(shí)驗(yàn)、巴豆油致小鼠耳郭腫脹實(shí)驗(yàn)、雞蛋清致大鼠足趾腫脹實(shí)驗(yàn)、熱板實(shí)驗(yàn)、扭體實(shí)驗(yàn)、玻片法凝血功能評(píng)估實(shí)驗(yàn)、剪尾法出血時(shí)間評(píng)估實(shí)驗(yàn)、復(fù)方地芬諾酯片致小鼠小腸運(yùn)動(dòng)功能障礙模型、巴豆油致大鼠肛門(mén)腫脹模型，觀察通微消痔顆粒的藥效學(xué)作用。研究結(jié)果顯示，通微消痔顆粒對(duì)5種不同菌株均具有體外抗菌作用，可減輕小鼠耳郭腫脹度和大鼠足趾腫脹，提高小鼠的痛閾值并減少扭體次數(shù)，升高墨汁推進(jìn)率，縮短小鼠凝血時(shí)間和出血時(shí)間，降低大鼠直腸肛門(mén)系數(shù)、血清炎性因子IL-6及TNF-α水平，且采用高劑量干預(yù)時(shí)效果最為明顯，提示該藥物具有較好的抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛、止血作用，并能改善小腸運(yùn)動(dòng)功能，對(duì)痔瘡有很好的治療作用。但部分指標(biāo)差異并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，考慮與樣本量較少有關(guān)。

該方為廣西民間壯醫(yī)驗(yàn)方，方中以地桃花為君藥，倒扣草、地錦草為臣藥，地榆兼為佐使藥。(1)地桃花的主要成分包括木脂素、黃酮、酚酸和大柱香波龍烷等，為通微消痔顆粒方中抗菌、抗炎主藥。Mazumder等[17]報(bào)告，地桃花根甲醇提取物對(duì)枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、 表皮葡萄球菌、 藤黃微球菌、 大腸埃希菌、 肺炎克雷伯菌、 痢疾志賀氏菌、 霍亂弧菌均具有一定的抑制活性；陳勇等[18]發(fā)現(xiàn)地桃花地上部分水提物對(duì)大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、普通變形桿菌、金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌均有抑制活性。此外，在抗炎作用方面，Yang等[19]發(fā)現(xiàn)，地桃花地上部分水提液可顯著降低金黃色葡萄球肺炎小鼠體內(nèi)IL-6、IL-10的水平， 明顯減輕肺組織的炎癥損傷；蒙小菲等[20]的研究表明地桃花水提物可有效減輕二甲苯致小鼠耳郭腫脹和對(duì)角叉菜膠致小鼠足趾腫脹，可能與抑制炎性介質(zhì)釋放、 減少炎性滲出等有關(guān)；黃春等[21]發(fā)現(xiàn)地桃花水提物可有效減輕小鼠棉球肉芽組織增生，并降低腹腔炎癥沖洗液的前列腺素E2含量。(2)倒扣草具有活血化瘀、利尿通淋、清熱消腫之功，對(duì)跌打損傷、關(guān)節(jié)腫痛、外感發(fā)熱、疔瘡癰腫等疾病均具有較好的療效，但相關(guān)現(xiàn)代藥理學(xué)研究報(bào)告較少。因倒扣草兼有強(qiáng)筋壯骨之功，因此能緩解正氣不足、氣虛不固所致的肛門(mén)腫痛、痔核突出等癥狀，其與地桃花合用，能增強(qiáng)清熱、消腫的功效，從而可改善肛門(mén)腫痛等癥狀。(3)地錦草的有效部位作用于紅色毛癬菌后，可明顯改變其形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)，通過(guò)影響真菌細(xì)胞膜麥角甾醇的生物合成發(fā)揮抗真菌作用[22]。此外，梁生林等[23]報(bào)告地錦草醇提物對(duì)小鼠熱板法和醋酸扭體法致痛有非常顯著的鎮(zhèn)痛作用。由此推測(cè)，地錦草為通微消痔顆粒方中發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的主藥。(4)地榆富含鞣質(zhì)、皂苷類(lèi)及黃酮類(lèi)與甾體類(lèi)化學(xué)成分，在止血、抗腫瘤、抗過(guò)敏、抗炎消腫、改變血液系統(tǒng)等方面發(fā)揮著重要作用[24]。張斌等[25]發(fā)現(xiàn)地榆水提物對(duì)臨床耐藥菌株具有抗菌活性。以上諸藥合用，共奏清熱解毒，活血消腫、生肌止血，通絡(luò)止痛、潤(rùn)腸通便之功，因此用于治療濕熱下注、氣滯血瘀證的痔瘡具有較好的效果。

通微消痔顆粒具有抗菌、消炎、鎮(zhèn)痛、止血、改善小腸運(yùn)動(dòng)的功能，對(duì)痔瘡有很好的治療作用。本研究將為該藥用于痔瘡的治療提供了理論依據(jù)和藥效基礎(chǔ)。但今后需擴(kuò)大樣本量進(jìn)一步驗(yàn)證該藥物的作用，并開(kāi)展臨床實(shí)驗(yàn)以了解其對(duì)人體的實(shí)際藥效作用。