脂肪血制備洗滌紅細胞的可行性探討

杜明儀 余培瓊 盧少芬 龍海燕 張琦 梁熒

隨著醫療技術的不斷發展,輸血醫學在治療過程也發揮了重要的作用,應用日趨廣泛,使用生理鹽水與洗滌紅細胞進行混懸,保存期至多為24 h,而患者有急需時還需要采用預約制度,這在很大程度上也限制了洗滌紅細胞的使用,不僅會耽誤患者的最佳治療時間,而且在急需用血時也加重了血站的工作量［1］。我國在2012 年重新制定和實施的《全血成分血質量要求》以及血站操作技術詳細流程中都明確規定使用紅細胞保存液制備的懸浮細胞可以放置在2～6℃低溫冰箱中進行保存,保存期限≤5 周［2］。如果全血在密閉系統中進行充分洗滌再與紅細胞保存液進行混懸后,洗滌紅細胞的保存期就可以延長到5 周,與懸浮紅細胞的保存期限基本一致,這就為MAP 混懸洗滌紅細胞制備提供了依據,同時也能大大減輕臨床血站的工作壓力,患者有急需時可以迅速調動血庫滿足臨床需要［3］。血站將人體乳糜血分為不同程度,去除血漿后將生理鹽水與洗滌紅細胞進行混懸,減少血液資源的浪費,提高制備效率,但是血液中的主要成分是紅細胞,如果乳糜程度較高,會對紅細胞產生造成很大程度的影響,制備時去除乳糜顆粒也會損傷紅細胞,因此本研究探討不同程度的脂肪血制備洗滌紅細胞的可行性,現將相關結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與材料 萬瑞血球計數儀；萬瑞半自動生化分析儀；游離紅總蛋白試劑盒,722 光柵分光光度；無菌接駁機；大容量低溫離心機；分漿夾；低溫操作臺；五聯洗滌套裝：生理鹽水、紅細胞保存液、一次性使用塑料血袋,均經過檢驗審批合格,放置于2～6℃低溫冰箱中進行保存［4］。

1.2 血液分類 隨機抽取人體脂肪血標本56 份,檢測MAP 混懸洗滌紅細胞制備前的脂肪血中的乳糜指數,乳糜指數越大血液乳糜程度越重［5］,根據乳糜指數不同分為對照組(正常全血)、輕度乳糜組(乳糜指數≤2)、中度乳糜組(2＜乳糜指數≤5)、重度乳糜組(乳糜指數＞5),每組14 份。

1.3 制備方法 將體采科采集的全血放置于大容量低溫離心機中離心并分離出懸浮紅細胞,在細胞保存期限內均可以制備MAP 混懸洗滌紅細胞。通過無菌接管機將五聯洗滌套裝的無菌生理鹽水與懸浮紅細胞連接并在密閉系統中洗滌3 次,這種做法能夠有效去除98%以上的血漿、90%以上的白細胞和血小板,同時還能夠去除在保存過程中產生的乳酸、鉀、氨等代謝產物,保留了80%以上的紅細胞,最后加入到紅細胞保存液中混勻即可,并留標本置于低溫冰箱進行保存［6］。

1.4 檢測方法 在儲存2、7、14、21、28、35 d 時測定制備洗滌紅細胞混懸液中的血細胞比容、游離Hb濃度、總Hb 濃度、計算儲存期末溶血率,并且記錄分析四組不同儲存時間紅細胞溶血率。

1.5 統計學方法 采用SPSS20.0 統計學軟件處理數據。計量資料以均數±標準差()表示,采用t檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 四組MAP 混懸洗滌紅細胞儲存期末各項指標對比 對照組總Hb濃度為(195.8±8.6)g/L,血細胞比容為(0.54±0.02),游離Hb濃度為(0.68±0.11)g/L,儲存期末溶血率為(0.16±0.03)%；輕度乳糜組總Hb 濃度為(192.4±10.5)g/L,血細胞比容為(0.52±0.04),游離Hb濃度為(0.73±0.15)g/L,儲存期末溶血率為(0.18±0.05)%；中度乳糜組總Hb 濃度為(180.3±10.4)g/L,血細胞比容為(0.47±0.06),游離Hb 濃度為(1.24±0.18)g/L,儲存期末溶血率為(0.24±0.06)%；重度乳糜組總Hb 濃度為(169.5±10.7)g/L,血細胞比容為(0.41±0.05),游離Hb濃度為(1.48±0.25)g/L,儲存期末溶血率為(0.48±0.13)%。對照組與輕度乳糜組MAP 混懸洗滌紅細胞儲存期末總Hb 濃度、血細胞比容、游離Hb 濃度、儲存期末溶血率比較,差異均無統計學意義(P＞0.05)。中度乳糜組和重度乳糜組的總Hb 濃度、血細胞比容均低于對照組和輕度乳糜組,游離Hb 濃度、儲存期末溶血率均高于對照組和輕度乳糜組,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 四組MAP 混懸洗滌紅細胞儲存期末各項指標對比 ()

表1 四組MAP 混懸洗滌紅細胞儲存期末各項指標對比 ()

注：與對照組對比,aP＜0.05 ；與輕度乳糜組對比,bP＜0.05

2.2 四組不同儲存時間紅細胞溶血率 隨著儲存時間增加,四組紅細胞溶血率升高,且同儲存時間對照組、輕度乳糜組、中度乳糜組、重度乳糜組紅細胞溶血率逐漸升高。見表2。

表2 四組不同儲存時間紅細胞溶血率(%)

3 討論

脂肪血也稱為乳糜血,人類攝入脂肪含量較高的食物,如肥肉、花生、油條等,脂肪就會進入血液形成乳糜微粒,血漿呈現渾濁狀,近年來血站采集乳糜血的量呈現逐年上升趨勢,收集乳糜血液量占總采集量的5%～6%,盡管血站定期都會進行獻血知識的宣傳,但是為了能夠確保血液供應量充足,權衡利弊后一般不臨時淘汰,容易打擊獻血者的積極性,且給血液采集工作增加了難度［7］。研究表明乳糜血如果輸入人體會產生很多不良影響,例如導致受血者出現發熱、脂肪栓塞、神經水腫等,而且重度乳糜血會增加紅細胞膜的脆性,呈現牛奶狀,分離血液成分也相當困難,在實驗過程中不利于篩查病毒抗體、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)等,因此在臨床實際應用過程中,尤其是血液供應緊張的情況下,高效利用脂肪血具有重要的意義［8］。

研究表明,在利用制備脂肪血時需要去除大量白細胞,靜置離心后就可以明顯觀察到乳糜顆粒上浮,在底部血液中殘存量較少,因此制備洗滌紅細胞時需要使用生理鹽水將其充分洗滌干凈,離心后完全去除乳糜顆粒和其他代謝產物。紅細胞保存液混懸洗滌紅細胞在我國廣泛應用于保存新鮮血液,MAP 液的組成成分包括葡萄糖、磷酸鹽、氯化鈉、枸櫞酸、枸櫞酸鈉以及甘露醇等,葡萄糖和甘露醇的生理作用是為洗滌后的紅細胞提供能量,改善pH 值,降低溶血率［9］。本實驗采取不同濃度的脂肪血制備洗滌紅細胞,在實驗過程中是否會造成紅細胞的損傷以及對于紅細胞質量的影響才是應該關注的重點。而溶血則是檢查紅細胞儲存過程中質量的重要指標,當紅細胞膜破損后,Hb逸出是血液儲存過程中最容易發生的現象,對于受血者的生命安全構成了威脅［10］。我國全血質量要求中明確規定MAP 混懸洗滌紅細胞溶血率應該控制在紅細胞總質量的0.8%之內,隨著儲存時間的延長,儲存期末的溶血率也逐漸上升,血細胞比容以及總Hb 濃度都有小范圍的上升幅度。而且乳糜程度的提高也會導致儲存期末溶血率上升,本實驗結果可以明顯看出不同乳糜程度、儲存時間均會影響洗滌紅細胞儲存期末溶血率［11］。

綜上所述,使用輕中度乳糜血制備洗滌紅細胞乳糜指數明顯低于重度乳糜血,儲存期末溶血率以及其他各項指標也符合國家標準,臨床使用后注入人體未見明顯不良反應,紅細胞保存液混懸洗滌紅細胞保存期限有效延長,血站可以根據臨床實際用血量適時調整血液庫存量,滿足臨床需求,縮短急需用血患者等待的時間,但是本實驗也存在一定程度大的局限性,如樣本量較小,可能會存在實驗誤差,因此需要加大樣本量進一步驗證實驗結果準確性。