血漿miR-1、RDW水平對高血壓并發心房顫動患者發生缺血性腦卒中的診斷價值

王 佳，徐李文靜，孫啟玉

承德醫學院附屬醫院檢驗科,河北承德 067000

心房顫動(AF)是最常見的持續性心律失常。基因、分子和環境與AF相關的因素也是心血管疾病患者的主要危險因素[1]。原發性高血壓(EH)是越來越年輕化、嚴重危害人類健康和生活水平的一種常見病及多發病，已成為我國致病率、致殘率最高的疾病之一[2]。EH并發AF后期發生心血管事件的概率倍增，并且嚴重時會影響患者的生活質量。隨著我國老齡化到來，預計EH并發AF的患病人數及總患病率在未來相當長時期內還會明顯增加。AF可導致心房血栓形成，進而導致以缺血性腦卒中為代表的血栓栓塞事件[3]。早診斷、早發現對臨床治療腦卒中至關重要。紅細胞分布寬度(RDW)是反映外周紅細胞體積異質性的參數，通常以紅細胞體積大小的變異系數來表示[4]。張梅花等[5]研究顯示，RDW增高與多種病癥死亡風險增加密切相關，包括心力衰竭、冠心病、腦卒中、肺動脈高壓等，可作為心血管疾病的危險標志物。microRNA-1(miR-1)在心肌中大量表達，在心臟發育和電活動中起作用。然而，miR-1表達失調會導致嚴重的心臟疾病，如心律失常、心臟肥大和心肌細胞增殖[6]。但是RDW和miR-1聯合檢測對EH并發AF的診斷預測價值報道較少，對此，本研究將探析RDW聯合miR-1檢測對EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的早期診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019年3月至2021年3月收治的EH并發AF患者156例作為觀察組，根據有無發生缺血性腦卒中再分為非腦卒中組和腦卒中組，其中非腦卒中組98例，腦卒中組 58例; 另選取同期EH未并發AF患者150例作為對照組。納入標準:(1)符合世界衛生組織制定的AF診斷標準[7-8];(2)首次就診的患者。排除標準:(1)先天性心臟病、心肌病、心肌炎、心臟瓣膜病等患者;(2)嚴重肝、腎、肺部疾病患者;(3)惡性腫瘤、炎癥性腸病及結締組織病患者;(4)血液系統疾病患者，如白血病，中、重度貧血等患者; (5)甲狀腺功能亢進患者;(6)風濕病活動期患者; (7)近期有外傷或手術史的患者。本研究經本院醫學倫理委員會批準，所有患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 臨床資料收集 目前研究評估了來自醫療記錄的人口統計數據，包括年齡、性別、吸煙狀況和記憶(如高血壓、糖尿病和腦血管疾病史)情況。入院時收集生命體征。入院后立即采用日本希森美康公司的XN3000血細胞分析儀及配套試劑盒檢測RDW、白細胞計數(WBC)、血小板分布寬度(PDW)、中性粒細胞計數(N)、血細胞比容(Hct)、總膽紅素(TBIL)、淋巴細胞計數(L)、單核細胞計數(MONO)。采用美國貝克曼庫爾特公司的UniCel Dxc 600 Synchron全自動生化分析儀及配套試劑盒檢測血清肌酐(SCr)、血糖(GLU)、 丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、血尿酸(UA)水平。

1.2.2 樣品收集和存儲 患者入院1 h后，采集5 mL靜脈血置于EDTA-K2抗凝管中。采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(qRT-PCR)檢測血漿miR-1的表達水平，使用2-ΔCt方法評估miR-1的表達水平。

1.2.3 超聲心動圖檢查 患者入院3 d采用超聲心動圖檢查左心房內徑(LAD)、左心室舒張末期內徑(LVEDD)和左室射血分數(LVEF)，探頭頻率為2.5 Hz。每個患者檢查3～5個心動周期，取平均值。

2 結 果

2.1 3組患者一般資料比較 3組患者Hct、RDW、TBIL、SCr、ALT、UA、冠心病、心力衰竭、LVEF比較，差異均有統計學意義 (P<0.05)。見表1。

表1 3組患者一般資料比較或n(%)]

組別nTBIL(μmol/L)GLU(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)CK-MB(U/L)PLT(×109/L)對照組15012.48±4.895.89±1.823.77±0.941.69±1.1515.72±11.70195.00±61.58非腦卒中組9817.94±5.915.68±2.783.99±1.091.90±1.7815.20±10.87208.90±68.30腦卒中組5810.04±3.877.07±2.104.25±1.192.04±1.8116.10±9.87219.33±66.14P0.0320.2390.0890.1120.8120.053

組別nSCr(μmol/L)ALT(U/L)UA(μmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)抽煙史對照組15069.81±20.1217.85±8.60313.86±83.181.19±0.342.33±0.7446(30.67)非腦卒中組9889.66±16.4329.08±15.53388.58±104.101.09±0.352.17±0.8833(33.67)腦卒中組5893.15±14.1236.74±17.71486.47±162.410.79±0.252.31±1.1917(29.31)P0.0090.0010.0080.0700.0700.721

組別n飲酒史冠心病心力衰竭LVEF(%)LAD(mm)LVEDD(mm)對照組15049(32.67)26(17.33)10(6.67)63.26±4.7035.12±6.8050.84±5.87非腦卒中組9822(22.45)27(27.55)18(18.37)56.43±8.5341.13±8.2350.63±6.36腦卒中組5817(29.31)24(41.38)14(24.14)53.40±10.7943.53±6.4350.94±6.02P0.8540.0010.0010.0020.2580.787

2.2 3組患者血漿miR-1和RDW水平比較 對照組、非腦卒中組和腦卒中組患者miR-1平均水平分別為0.88±0.34、1.50±0.61和1.79±0.84,3組患者miR- 1相對表達水平均逐漸增加，3組間兩兩比較，差異均有統計學意義(P<0.05)。對照組、非腦卒中組和腦卒中組患者RDW平均水平分別為(41.77±3.02)%、(44.13±3.44)%和(46.55±3.83)%,3組間兩兩比較,差異均有統計學意義(P<0.05)。

2.3 EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的影響因素分析 將所有相關指標納入回歸方程進行單因素分析發現，腦卒中組和非腦卒中組患者Hct、RDW、GLU、SCr、ALT、UA、抽煙史、miR-1比較，差異均有統計學意義(P<0.05)，見表2。將單因素分析結果中差異有統計學意義的指標作為校正因素，納入多因素 Logistic回歸分析，結果顯示，經校正后，RDW(OR=2.154，95%CI：1.376～3.156，P=0.013)和miR-1水平(OR=4.123，95%CI：1.593～10.671,P=0.034)是EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的影響因素。見表3。

表2 單因素Logistic回歸分析或n(%)]

組別nGLU(mmol/L)TC(mmol/L)TG(mmol/L)CK-MB(U/L)PLT(×109/L)SCr(μmol/L)非腦卒中組985.68±2.783.99±1.091.90±1.7815.20±10.87208.90±68.3089.66±16.43腦卒中組587.07±2.104.25±1.192.04±1.8116.10±9.87219.33±66.1493.15±14.12P<0.050.1670.4330.0550.070<0.05

組別nALT(U/L)UA(μmol/L)HDL-C(mmol/L)LDL-C(mmol/L)抽煙史飲酒史冠心病心力衰竭非腦卒中組9829.08±15.53388.58±104.101.09±0.352.17±0.8833(33.67)22(22.45)27(27.55)18(18.37)腦卒中組5836.74±17.71486.47±162.410.79±0.252.31±1.1917(29.31)17(29.31)24(41.38)14(24.14)P<0.05<0.050.0510.244<0.050.5360.5360.218

組別nLVEF(%)LAD(mm)LVEDD(mm)miR-1非腦卒中組9856.43±8.5341.13±8.2350.63±6.361.43±0.48腦卒中組5853.40±10.7943.53±6.4350.94±6.022.69±0.89P0.2330.1340.0750.035

表3 多因素Logistic回歸分析

2.4 RDW和miR-1診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的ROC曲線分析 miR-1和RDW診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的AUC分別為0.614 (95%CI:0.516～0.713)和0.690(95%CI:0.596～0.783)。當血清miR-1水平為0.565時，診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的靈敏度為75.40%，特異度為54.70%。當RDW水平為43.35%時，診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的靈敏度為64.30%，特異度為66.00%。RDW和miR-1聯合檢測的AUC為0.734 (95%CI:0.621～0.997)，大于二者單項檢測。見圖1。

圖1 RDW和miR-1診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的ROC曲線

3 討 論

AF是臨床上最常見的心律失常，導致許多并發癥，如腦卒中和血栓栓塞事件[9]。據統計,非瓣膜性AF患者比其他患者患缺血性腦卒中的風險高5倍左右[10]。同時,EH也是心腦血管疾病、腦卒中、腎病最重要和最常見的危險因素[11]。因此，對于 EH并發AF患者來講，早期準確診斷缺血性腦卒中和及時治療至關重要。

miR-1在心肌中大量表達，對心臟發育和電生理活動有一定作用。然而，miR-1表達失調也可能發生嚴重的心臟病。此外，miR-1致心律失常的潛能與缺血性心臟病相關[12]。 有研究認為，鉀通道基因的靶向下調放大了AF的持續時間和發病率，該研究證明了miR-1與AF電重構的密切聯系，以及miR-1作為AF治療藥物的臨床重要性[13]。有研究表明，miR-1參與了缺血性腦卒中的缺血后適應及神經系統的再生過程?？娹盵14]通過構建小鼠腦缺血再灌注損傷模型發現,miR-1、miR-let-7、miR-19a、miR-124 可能與腦缺血后適應保護機制相關；顧蕓等[15]通過研究 miR-1 對原代培養的施萬細胞的影響發現,miR-1可能通過降低Edn1表達抑制施萬細胞增殖，從而提高神經系統的再生能力。本研究發現，對照組、非腦卒中組、腦卒中組患者miR-1相對表達水平均呈上升趨勢，并且miR-1診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的靈敏度為75.40%，特異度為54.70%，AUC為0．614，進一步證明了miR-1對EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的診斷價值。但是，miR-1如何與EH并發AF患者發生缺血性腦卒中相關的機制尚不清楚，且具體發病機制仍不明確，仍需一些大型的前瞻性研究證實miR-1診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的有效性。

RDW是評價紅細胞體積的重要指標，在出現氧化應激、炎癥等情況時，可導致RDW水平增高[16]。近年來有研究發現，RDW對AF的發生、發展、預后等亦有重要預測價值[17-19]。RDW水平升高與心血管疾病、血栓栓塞疾病等密切相關[16]。因此，有研究對陣發性AF患者長期隨訪研究提示，RDW水平升高會增加血栓栓塞風險，表明RDW可能與陣發性AF患者左心房血栓形成有關。SALIBA等[20]在一項納入140例非瓣膜性AF患者，以腦卒中為終點事件的隊列研究發現，高水平RDW增加患腦卒中的發生率。本研究發現，3組患者RDW相對表達水平呈上升趨勢，并且RDW診斷EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的靈敏度為64.30%，特異度為66.00%，AUC為0．690，進一步將miR-1和RDW聯合檢測，其AUC為0．734，大于二者單項檢測。

綜上所述，miR-1和RDW可能成為EH并發AF患者發生缺血性腦卒中有前景的候選診斷標志物，二者聯合檢測診斷效果更佳。miR-1和RDW可能是EH并發AF患者發生缺血性腦卒中的獨立預測因子，可為臨床診斷、鑒別和選擇治療方案提供有價值的線索。本研究也存在不足，其樣本量較小，收集資料有限,需要更大規模、設計更為嚴謹的臨床研究加以證實；隨著miRNAs檢測技術的不斷進步和改善，將會擁有更加精準、高效、便宜的檢測方法。