馬爾尼菲籃狀菌致血小板計數假性升高1例

江鴻雅，鄺美華，陳 星，陳意珊

廣州醫科大學附屬市八醫院檢驗科,廣東廣州 510000

血小板計數是臨床實驗室血液學常用的檢測指標，對某些疾病的診斷、治療和預后判斷有重要作用。血細胞分析儀是目前檢測血小板的主要方法，具有檢測速度快、重復性好、準確性高等優點，但也受諸多因素的影響[1]。本科室在常規檢驗工作中發現1例馬爾尼菲籃狀菌致血小板計數結果假性升高的病例，現報道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 患者，男，30歲，因“咳嗽、咳痰半月，皮疹1周，發熱1 d”，于2021年3月20日入住本院。入院查體：體溫38.2 ℃，皮膚黏膜蒼白，頭面部散在臍凹樣皮疹，雙下肢散在瘀點、瘀斑，左手背可見3.0 cm×3.0 cm皮下血腫，左頸部可觸及一枚1.5 cm×1.5 cm腫大淋巴結，雙肺呼吸音粗，雙下肺可聞及濕啰音，左下肺為甚，雙下肢中度水腫。

1.2 實驗室檢查 入院當天查血常規顯示，白細胞計數(WBC)5.56×109/L，嗜中性粒細胞絕對值(NEU)5.07×109/L,淋巴細胞絕對值(LYM)0.34×109/L，單核細胞絕對值(MONO)0.07×109/L，紅細胞計數(RBC)2.46×1012/L，血紅蛋白(Hb)70.00 g/L，血小板計數(PLT)49×109/L，有核紅細胞(NRBC)3.48×109/L，血涂片鏡檢復核見可疑馬爾尼菲籃狀菌。馬爾尼菲籃狀菌抗原檢查陽性。人類免疫缺陷病毒(HIV)初篩酶聯免疫吸附試驗陽性。入院第3天查血常規顯示，WBC 3.45×109/L，NEU 1.61×109/L,LYM 1.61×109/L，RBC 2.56×1012/L，Hb 75.00 g/L，PLT 285×109/L，NRBC 8.22×109/L。血細胞形態學檢查顯示，白細胞數量減少，可見10%幼稚粒細胞，部分粒細胞細胞質顆粒增多增粗，部分細胞吞噬疑似馬爾尼菲籃狀菌，可見大量散在分布的疑似馬爾尼菲籃狀菌；有核紅細胞376個/100個白細胞，成熟紅細胞輕度大小不一，部分細胞中央淡染區擴大；血小板少見，散在分布，偶見大血小板。外周血真菌培養檢測出馬爾尼菲籃狀菌。HIV核酸檢測陽性。

分析入院第3天血常規和血細胞形態結果發現，血小板儀器計數結果與鏡下結果不相符，回顧入院當天血小板檢測方法是電阻抗法(PLT-I)與光學法(PLT-O)，2個通道血小板檢測結果基本一致，PLT直方圖右下曲線呈輕度鋸齒狀，PLT-O散點圖左下區域散點過于分散，儀器出現“RET散點圖異常，紅細胞碎片？血小板聚集？”報警信息。

為探明原因，重新用入院當天的血常規標本上機檢測和鏡檢復查，此血常規標本為乙二胺四乙酸二鉀抗凝血，外觀無異常，無可見凝塊。血細胞分析儀型號為Sysmex XN-1000，儀器檢測狀態正常，室內質控均在控，分別采用PLT-I、PLT-O、熒光法(PLT-F)進行檢測，PLT結果依次是277×109/L、297×109/L、42×109/L，三者PLT直方圖右下曲線均呈輕度鋸齒狀，PLT-O散點圖左下區域散點過于分散，儀器出現“RET散點圖異常，紅細胞碎片？血小板聚集？”報警信息，與入院第3天檢測出現的報警信息一致。PLT-F散點圖左下區域散點分為兩群，且出現“血小板減少、血小板散點圖異常”報警信息。參照《全國臨床檢驗操作規程》第4版[2]進行血涂片鏡檢和手工血小板計數，采用瑞氏-吉姆薩染色試劑染色，使用光學顯微鏡觀察血涂片體尾交界處紅細胞分布且細胞間無重疊區域，估算血小板數量[3]。血涂片鏡檢結果顯示，血小板少見，均勻散在分布，無異常聚集，偶見大血小板，PLT估算值為45×109/L；可見大量游離于細胞外的馬爾尼菲籃狀菌，約10個/油鏡，另有部分馬爾尼菲籃狀菌被中性粒細胞或單核細胞吞噬(圖1)。紅細胞大小形態大致正常，未見小紅細胞和紅細胞碎片，部分細胞中央淡染區擴大，有核紅細胞382個/100個白細胞。手工PLT 50×109/L。

圖1 血涂片中散在的馬爾尼菲籃狀菌(瑞氏-吉姆薩染色，×1 000)

由以上結果可知，PLT-F測得的PLT結果與血涂片鏡檢估算結果、手工PLT結果更相近，入院第3天所測的PLT結果假性升高。

2 討 論

由于血細胞分析儀檢測血小板受諸多因素的影響，例如儀器、試劑質量、抗凝劑、標本溶血與否、紅細胞和白細胞碎片、小紅細胞及血小板體積等[4-5]，當出現報警信息時，應結合鏡檢結果分析。本例患者由于感染嚴重，病情未得到有效控制，外周血存在越來越多游離于細胞外的馬爾尼菲籃狀菌，并且因檢測血小板時選用方法的問題，在血涂片鏡檢復查時未評估血小板數量，從而導致PLT結果假性升高。

馬爾尼菲籃狀菌曾被命名為馬爾尼菲青霉菌[6]，屬細胞內寄生真菌。在東南亞地區和我國南方，馬爾尼菲籃狀菌是艾滋病患者最常見的機會性感染病原菌之一[7]。目前，臨床上公認的診斷金標準是真菌培養，根據其具有雙相性，可通過菌落形態、真菌-酵母轉換相及顯微鏡下形態進行菌株鑒別[8]。瑞氏-吉姆薩染色菌體形態為類圓形、長圓形或臘腸形，大小不一，2～8 μm，細胞膜不甚清楚，有1～2個紫紅色小核，漿淡藍色[9]。

Sysmex XN-1000血細胞分析儀檢測PLT有3種方法，分別是PLT-I、PLT-O和PLT-F，其原理和檢測所用通道各不相同。PLT-I是以非導電顆粒的大小作為主要參數，間接區分紅細胞和血小板。當血液中存在小紅細胞、紅細胞碎片或大血小板時，PLT會出現偏差。PLT-O則是利用熒光染料對細胞內核酸進行染色，用前向散色光強度反映細胞大小，熒光強度反映細胞內核酸物質水平，能準確區分含有少量核酸的血小板和不含核酸的成熟紅細胞及紅細胞碎片，也能識別大血小板。PLT-F是利用血小板特異熒光染料針對核糖體RNA和線粒體DNA進行染色，根據熒光強度和前向散射光強度不同準確計算血小板，能正確區分非血小板物質[10-12]。由于馬爾尼菲籃狀菌大小為2～8 μm，與血小板大小相近，同時菌體內也含有核酸物質，由此推測PLT-I和PLT-O不能正確區分二者，誤把馬爾尼菲籃狀菌當作血小板而計數。而PLT-F只針對血小板核酸染色，對馬爾尼菲籃狀菌核酸難以染色，因而此法能正確區分二者。PLT-F散點圖左下區域散點分為兩群，觸發儀器報警，所得PLT結果比PLT-I和PLT-O更準確。

因此，當發現外周血存在大量游離于細胞外的馬爾尼菲籃狀菌時，對血小板的檢測應進行血涂片鏡檢估算和手工PLT，有條件者可采用PLT-F檢測，以獲得準確的PLT結果。