百合利咽茶治療肺腎陰虛型慢喉痹的療效及其網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)機(jī)制探討

李逸雪， 劉恒瑞， 付文洋

（1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第四臨床醫(yī)學(xué)院，深圳市中醫(yī)院，廣東深圳 518000；2.深圳市逗點(diǎn)生物有限公司，廣東深圳 518000）

慢喉痹即是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的“慢性咽炎”[1-2]，其臨床表現(xiàn)主要為咽部異物感、疼痛感、干燥感、癢感等癥狀，咽喉部查體可見(jiàn)咽后壁色暗紅，伴隨不同程度的腫脹[3]。病情時(shí)輕時(shí)重，且易因言語(yǔ)過(guò)多、飲食不當(dāng)、胃食管反流[4]、空氣污染[5]等刺激性因素誘發(fā)反復(fù)。目前，西醫(yī)在急性期使用抗生素治療，效果較好，但對(duì)于慢性期的遺留癥狀，暫無(wú)明確的特效靶向藥，其療效存在一定的局限性[6-7]。而中醫(yī)基于臨床辨證論治理論，在慢性期使用中醫(yī)藥治療，不僅能改善患者的口干、異物感等癥狀，提高患者生活質(zhì)量，還能減少?gòu)?fù)發(fā)率[8]。

喉痹在臨床很常見(jiàn)[9]。根據(jù)相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查，慢喉痹的患病人群正日益擴(kuò)大，且有越來(lái)越年輕化的趨勢(shì)。慢喉痹中的“慢”字體現(xiàn)了該病患病日久，非一日之功，易使肺腎兩臟虛損，其中肺為標(biāo)，腎為本。腎陰不足不僅不能上行滋補(bǔ)肺陰，還致使虛火上犯，耗氣傷津；而咽喉為上焦，屬肺之門(mén)戶(hù)，邪氣來(lái)襲，首當(dāng)其沖，導(dǎo)致肺臟陰虛更甚；而金水相生，肺陰虧虛累及腎陰，導(dǎo)致肺腎陰虛，日久而發(fā)為慢喉痹?；?020年深圳市中醫(yī)院耳鼻喉科門(mén)診患者的慢喉痹辨證觀察，發(fā)現(xiàn)肺腎陰虛型患者占慢喉痹患者總數(shù)的絕大部分。因此，本研究選取85例肺腎陰虛型慢喉痹患者作為研究對(duì)象進(jìn)行百合利咽茶的臨床療效觀察。但由于百合利咽茶的藥效成分和療效機(jī)制尚未明確，為了解百合利咽茶的潛在治療機(jī)制，本研究還進(jìn)行了生物信息學(xué)分析，運(yùn)用系統(tǒng)生物信息學(xué)理論來(lái)預(yù)測(cè)中藥配伍作用機(jī)制[10-14]，以便更好地指導(dǎo)臨床工作?，F(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象及分組選取2021年4月至2021年7月在深圳市中醫(yī)院耳鼻咽喉科門(mén)診就診且明確診斷為肺腎陰虛型慢喉痹的患者，共85例。由非本研究的其他人員應(yīng)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件產(chǎn)生隨機(jī)數(shù)字，根據(jù)就診先后順序，將患者隨機(jī)分為2組，其中觀察組45例，對(duì)照組40例。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求并通過(guò)深圳市中醫(yī)院倫理委員會(huì)的審核批準(zhǔn)；同時(shí)，所有入選患者均在本研究開(kāi)始前簽署了知情同意書(shū)。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華人民共和國(guó)中醫(yī)藥行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《中醫(yī)內(nèi)科病證診斷療效標(biāo)準(zhǔn)》中有關(guān)慢喉痹（慢性咽炎）的中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)[15]。①以口咽干，咽部異物感但不伴有吞咽困難，伴或不伴咽痛、咽癢等為主要癥狀；②病程較長(zhǎng)，至少半年以上的慢喉痹病史，且咽部不適癥狀時(shí)輕時(shí)重；③常有慢喉痹急性反復(fù)發(fā)作史，常因使用嗓音過(guò)度或不當(dāng)、飲食不當(dāng)、胃食管反流、空氣污染等導(dǎo)致發(fā)?。虎苎什繖z查：咽后壁黏膜腫脹，或有暗紅色斑塊狀、樹(shù)枝狀充血，以及淋巴濾泡增生。肺腎陰虛型的辨證標(biāo)準(zhǔn)：咽干口干，頻頻求飲，伴或不伴有咽部灼熱感，多言之后口干、咽痛等癥狀加重，伴或不伴有腰酸乏力，午后及黃昏時(shí)癥狀更甚。咽部充血呈暗紅色，黏膜較干燥，或有淋巴濾泡增生，色偏暗紅。舌紅，苔薄黃，脈細(xì)數(shù)。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)①符合上述慢喉痹（慢性咽炎）的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②中醫(yī)證型為肺腎陰虛型；③經(jīng)過(guò)西藥治療后，病情仍有反復(fù)發(fā)作；④入選本研究時(shí)處于慢性咽炎發(fā)作期；⑤依從性好，自愿參加本研究并簽署知情同意書(shū)的患者。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)①平時(shí)需要使用激素及其他可能影響療效觀察的藥物治療的患者；②合并有其他咽喉部疾病的非單純性慢喉痹患者；③已知有重大全身性嚴(yán)重疾?。ㄈ缟窠?jīng)系統(tǒng)疾病、肌肉骨骼疾病和自身免疫性疾?。?，以及需對(duì)嚴(yán)重慢性疾?。ㄈ绨┌Y）進(jìn)行持續(xù)治療的患者；④依從性差，未按規(guī)定進(jìn)行治療的患者。

1.5 治療方法對(duì)照組在第1 周至第4 周給予口服養(yǎng)陰清肺湯的中藥湯劑（方藥組成：生地黃20 g、麥冬15 g、玄參15 g、貝母15 g、牡丹皮15 g、白芍15 g、甘草10 g、薄荷10 g）治療，每日1 劑，煎取400 mL，分2 次于早晚飯后20～30 min服用，每次200 mL，共治療4 周；在第5 周至第8 周不再進(jìn)行任何藥物治療和干預(yù)。觀察組在第1 周至第4 周給予口服養(yǎng)陰清肺湯中藥湯劑（湯劑的組成、用法與對(duì)照組相同），并加上口服百合利咽茶（方藥組成：百合2 g，菊花1 g，陳皮1 g，甘草1 g）治療，每日1劑，每次用300 mL開(kāi)水沖泡后服用，每日3 次，于早中晚飯后1 h 服用；在第5 周至第8 周，停用養(yǎng)陰清肺湯，繼續(xù)使用百合利咽茶治療（使用方法及劑量不變）。2組患者均在治療8 周后評(píng)價(jià)療效。

1.6 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法為了獲得可靠的慢喉痹病理基因列表，我們對(duì)比較毒理基因組學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)（CTD）及GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)中慢喉痹相關(guān)基因交叉應(yīng)用得到基因集G1，其中相關(guān)分?jǐn)?shù)＞80，P值＜0.05。同時(shí)，對(duì)百合利咽茶的中藥成分，基于BATMAN-TCM 數(shù)據(jù)庫(kù)，進(jìn)行活性成分及作用靶點(diǎn)進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，得到基因集G2，G1 和G2 交集后得到G3，即為百合利咽茶治療慢喉痹的基因靶點(diǎn)，再將G3 導(dǎo)入String 網(wǎng)站，構(gòu)建治療靶基因的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖；與此同時(shí)，對(duì)G3 在GO 和KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行富集分析，以分析百合利咽茶的主要分子生物過(guò)程或信號(hào)通路，并繪制高級(jí)氣泡圖、輸出基因-概念網(wǎng)絡(luò)圖。

1.7 臨床療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)根據(jù)局部癥狀與體征量化計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)（見(jiàn)表1），在患者首次治療前、治療第4 周和治療第8周后進(jìn)行臨床癥狀與體征量化評(píng)分，計(jì)算出治療前、治療第4周和治療第8周后的各項(xiàng)癥狀與體征評(píng)分及總積分，再根據(jù)治療前后癥狀與體征總積分的變化情況判定療效。計(jì)算公式如下：癥狀與體征總積分減少率（療效指數(shù)）=（治療前總積分-治療后總積分）/治療前總積分×100%。顯效：療效指數(shù)≥80%；有效：40%≤療效指數(shù)＜80%；無(wú)效：療效指數(shù)＜40%?？傆行?（顯效例數(shù)+有效例數(shù)）/總病例數(shù)×100%。

表1 慢喉痹癥狀與體征具體量化計(jì)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Specific quantitative scoring criteria for symptoms and signs of chronic pharyngitis

1.8 統(tǒng)計(jì)方法應(yīng)用SPSS 26.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率或構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)（即采用GraphPad Prism 8 中的Contingency 方法計(jì)算組間差異）。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者基線(xiàn)資料比較觀察組45例患者中，男27例，女18例；年齡24～67歲，平均（45.07±10.96）歲；病程6 個(gè)月～5年。對(duì)照組40例患者中，男23例，女17例；年齡24～66歲，平均（37.9±10.30）歲；病程8 個(gè)月～4年。2組患者的性別、年齡、病程、嚴(yán)重程度等基線(xiàn)資料比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明2組患者的基線(xiàn)特征基本一致，具有可比性。

2.2 2組患者治療4周后和治療8周后臨床療效比較表2結(jié)果顯示：治療4周后，觀察組的總有效率為82.2%（37/45），高于對(duì)照組的65.0%（26/40），但組間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療8 周后，觀察組的總有效率為91.1%（41/45），明顯高于對(duì)照組的70.0%（28/40），組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表2 2組慢喉痹患者治療4周后和治療8周后的臨床療效比較Table 2 Comparison of clinical efficacy between the two groups of patients with chronic pharyngitis after 4 and 8 weeks of treatment [例（%）]

2.3 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析結(jié)果在CTD 及GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)找到慢喉痹病理基因1008個(gè)，在BATMANTCM 中篩選了153 個(gè)與百合利咽茶相關(guān)的基因靶點(diǎn)，兩者交集后有21 個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)（見(jiàn)圖1-A）；將21 個(gè)相關(guān)靶點(diǎn)提交至String 網(wǎng)站，生成蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。圖中節(jié)點(diǎn)表示蛋白質(zhì)，兩個(gè)節(jié)點(diǎn)之間，線(xiàn)條越密集則表示關(guān)聯(lián)度越大，其中GGT1和GSR、PGR和ESR1、CHRNA5和CHRNA7的關(guān)聯(lián)度較大（見(jiàn)圖1-B），在KEGG 和GO 富集結(jié)果中，百合利咽茶的顯著治療靶點(diǎn)在細(xì)胞修飾的氨基代謝通路和谷胱甘肽代謝。在KEGG富集結(jié)果中，基因及通路相關(guān)的基因放射比主要集中在0.23左右，最顯著的值約為0.35；在GO 富集結(jié)果中，基因及通路相關(guān)的基因放射比主要集中在0.25，最顯著的值是0.30。結(jié)果見(jiàn)圖2～圖3。

圖1 慢喉痹與百合利咽茶的基因韋恩圖（A）和相交靶點(diǎn)的蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)圖（B）Figure 1 Gene Venn diagram and protein-protein interaction network of intersecting targets of chronic pharyngitis and Baihe Liyan Tea

圖2 GO和KEGG富集氣泡分析圖Figure 2 GO and KEGG enrichment bubble analysis graph

圖3 GO和KEGG輸出基因-概念網(wǎng)絡(luò)圖Figure 3 GO and KEGG output gene-concept network diagram

2.4 百合利咽茶的中藥性能分析結(jié)果中藥都具有一定的藥性和藥味，即四氣五味，這是藥物性能的一個(gè)重要方面。對(duì)百合利咽茶中的藥物進(jìn)行分析，得出該方四氣以寒為主，占60.0%，五味以甘為主，占70.0%，歸經(jīng)以歸肺經(jīng)為主，占45.0%。結(jié)果見(jiàn)圖4。

圖4 百合利咽茶中藥成分的四氣五味歸經(jīng)圖Figure 4 Graphs of four properties，five flavors and meridian tropism of Chinese herbal ingredients of Baihe Liyan Tea

2.5 不良反應(yīng)2組患者在治療過(guò)程中均未發(fā)生相關(guān)的任何不良事件。

3 討論

3.1 中醫(yī)對(duì)慢喉痹病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)痹者，閉也，指阻塞不暢的意思[16]?！端貑?wèn)·陰陽(yáng)別論》最早提出喉痹的概念，曰：“一陰一陽(yáng)結(jié)，謂之喉痹”?！秹凼辣Ｔ穭t曰：“一陰者，手少陰君火，心之脈氣也。一陽(yáng)者，手少陽(yáng)相火，三焦之脈氣也。二脈并絡(luò)于喉，氣熱則內(nèi)結(jié)，結(jié)甚即腫脹，腫脹甚則痹?！盵17]這里明確提出了喉痹的概念。而該病日久，反復(fù)發(fā)作，則可導(dǎo)致“慢喉痹”。有關(guān)慢喉痹的病因病機(jī)，《景岳全書(shū)》曰：“格陽(yáng)喉痹，由火不歸元，則無(wú)根之火客于咽喉而然，其證則上熱下寒，全非火證。”[18]意思即肺為標(biāo)，腎為本，腎陰不足，腎水不能制火，則虛火上犯咽喉而發(fā)為喉痹；且腎陰不足，不僅不能上行滋補(bǔ)肺陰，還可致虛火上犯，耗氣傷津，而咽喉為上焦，屬肺之門(mén)戶(hù)，邪氣來(lái)襲，首當(dāng)其沖，導(dǎo)致肺臟陰虛更甚，而金水相生，肺陰虧虛累及腎陰不足，日久則發(fā)而為慢喉痹。

3.2 研究結(jié)果分析

3.2.1 臨床療效結(jié)果分析 本研究結(jié)果顯示，治療4 周后，觀察組的總有效率較對(duì)照組有所提高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明百合利咽茶在慢喉痹急性發(fā)作時(shí)的療效有限，具有一定的治療局限性，但第1～4周的治療并不影響第5～8周的治療結(jié)果，第5～8 周的治療結(jié)果偏差較小，可信度較高。治療8周后，觀察組的總有效率較對(duì)照組明顯提高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），說(shuō)明在慢喉痹急性發(fā)作治療后還遺留的口干、異物感等癥狀，用百合利咽茶作為輔助治療，可以大大提高患者的生活質(zhì)量，減少患者的疾病痛苦。

3.2.2 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果分析 在CTD及GeneCards數(shù)據(jù)庫(kù)找到慢喉痹的病理基因和在BATMAN-TCM中篩選與百合利咽茶相關(guān)的基因靶點(diǎn)，兩者交集后有21 個(gè)顯著相關(guān)靶點(diǎn)，說(shuō)明百合利咽茶極有可能通過(guò)此21 個(gè)顯著的相關(guān)靶點(diǎn)，對(duì)慢喉痹起到輔助治療作用和日常咽喉保健作用；再通過(guò)百合利咽茶復(fù)方化合物-靶點(diǎn)-慢喉痹疾病網(wǎng)絡(luò)與GO、KEGG富集分析，顯示出“細(xì)胞修飾的氨基代謝通路”和“谷胱甘肽代謝”是顯著的治療通路和靶點(diǎn)。有研究[19]表明，谷胱甘肽是一種小分子活性肽，在生物體內(nèi)具有顯著的抗氧化功能，在對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)展和緩解方面發(fā)揮重要作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激是一種細(xì)胞狀態(tài)，由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中未折疊或錯(cuò)誤折疊蛋白的超載引起，如果未正確解決，可導(dǎo)致細(xì)胞死亡[20]。雖然暫未有研究表明慢喉痹疾病與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有顯著相關(guān)，但通過(guò)本研究，可預(yù)測(cè)百合利咽茶治療慢喉痹可能是通過(guò)影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的發(fā)展和緩解而發(fā)揮作用。由此可見(jiàn)，本研究可進(jìn)一步揭示百合利咽茶對(duì)慢喉痹的輔助治療效果和日常咽喉保健療效的具體機(jī)制，以及從生物基因水平論證了中醫(yī)藥在治療復(fù)雜疾病方面的有效性，為中醫(yī)藥治療慢喉痹提供了新的思路與方法[21]。

3.2.3 百合利咽茶的中藥性能結(jié)果分析 從古至今的中醫(yī)文獻(xiàn)，在論述每一種藥物時(shí)，首先標(biāo)明其性味與歸經(jīng)，這有助于我們認(rèn)識(shí)各種藥物的共性和個(gè)性，以此來(lái)指導(dǎo)臨床用藥。本研究結(jié)果顯示，百合利咽茶的四氣中寒性占比為60.0%，雖寒性占比最大，但還有40.0%是溫性和平性，寒溫并用，溫能制寒，故百合利咽茶中剩余的寒性，只有寥寥；五味中，甘的占比最大，達(dá)70.0%，甘性溫補(bǔ)，但又過(guò)于平和，只能緩緩發(fā)之，不適用于急性期的治療；歸經(jīng)中，肺經(jīng)占比最大，占45.0%。本研究中，除肺陰虧虛外，腎陰亦虧損，而該方在治療時(shí)未能兼顧先天之本，故百合利咽茶在慢喉痹急性發(fā)作時(shí)，只能起到輔助治療作用，而待急性期治療過(guò)后，堅(jiān)持繼續(xù)服用，取其甘性以緩緩補(bǔ)之，對(duì)咽喉的保健作用具有顯著療效。

3.3 結(jié)論百合利咽茶在肺腎陰虛型慢喉痹的輔助治療及治療后的預(yù)防保健中可發(fā)揮顯著的療效。基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)，百合利咽茶活性成分對(duì)慢喉痹疾病相關(guān)的多個(gè)靶點(diǎn)和多條信號(hào)通路的調(diào)控是提高慢喉痹治療有效率的重要作用機(jī)制，由此可見(jiàn)，百合利咽茶治療慢喉痹具有一定的生物學(xué)理論基礎(chǔ)。

（致謝：感謝劉毅先生提供的計(jì)算機(jī)語(yǔ)言支持?。?/p>