COX-2、HRH1、PTGS2 在腺性膀胱炎中的表達及其臨床意義

洪濤 陶逸然 樸松哲 柯莽

溫州醫科大學附屬臺州醫院泌尿外科，浙江臺州 317000

腺性膀胱炎是一種以膀胱黏膜與黏膜上尿路上皮腺上皮化為特征的惡性疾病，在我國，腺性膀胱炎發病率為0.9%～1.9%。腺性膀胱炎主要表現為血尿、尿失禁等癥狀。環氧化酶2（cyclooxygenase2，COX-2）屬于完整膜結合蛋白，是花生四烯酸合成前列腺素過程中生成的限速酶。組胺是一種炎癥介質，由左旋組氨酸脫去羧基后生成，其生成后儲存在嗜堿性粒細胞中，在嗜堿性粒細胞中以肝素結合形式存在，當釋放到細胞外時，組胺與肝素分離后發揮活性作用。過氧化物合酶2（peroxide synthase 2，PTGS2）是機體內花生四烯酸合成前列腺素酶的前提。本文旨在研究COX-2、HRH1、PTGS2 在腺性膀胱炎中的表達及其臨床意義，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

整群隨機化法選取2019 年1 月～2021 年1 月溫州醫科大學附屬臺州醫院收治的腺性膀胱炎患者88例為腺性膀胱炎組，同期選取膀胱炎患者88 例為對照組。納入標準：①符合《腺性膀胱炎臨床診斷和治療中國專家共識》診斷標準；②無嚴重心肺臟器功能不全者；③無精神疾病、意識障礙者。排除標準：①合并其他腫瘤放化療者；②合并其他嚴重臟器疾病者；③有藥物過敏史者。兩組的臨床基線資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。見表1。本研究經溫州醫科大學附屬臺州醫院醫學倫理委員會批準，患者及家屬均知情并簽署知情同意書。

表1 兩組臨床基線資料比較

1.2 方法

抽取兩組患者靜脈血5 ml，2000 r/min 離心處理5 min，-20℃保存于低溫箱中待檢。

1.2.1 檢測兩組患者的COX-2、HRH1 水平 免疫組化染色法檢測COX-2、HRH1 水平。免疫組化方法：二甲苯脫蠟2 次，100%、90%和80%乙醇梯度水化，蒸餾水、PBS 浸泡，微波修復抗原20 min，自然冷卻后置于3%溶液以阻斷內源性過氧化物酶活性，PBS 清洗3次，滴加抗體GRP94、AKR1B10 置于濕盒內4℃中孵育過夜，PBS 洗3 次，滴加IgC 二抗，溫室孵育30 min，加鏈霉素生物素蛋白-過氧化物，PBS 洗3 次，DAB 顯色鏡下觀察顯色結果，適時終止反應，使用蘇木素進行復染，80%、90%、100%乙醇梯度脫水、晾干，二甲苯透明，封片。觀察統計數據并記錄。

1.2.2 檢測兩組患者的PTGS2 水平 實時熒光定量法PCR 檢測兩組的PTGS2 水平。采集兩組的外周血核細胞，Trizol 試劑提取總RNA，將總RNA 通過逆轉錄合成cDNA。配制樣本液反應體系主要包括使用2.5μl RNA 樣本液，RT、5RT 緩沖液為0.8 μl，dntps、mmlv 各為2.2 μl、4.3 μl，以上溶液相互反應25 min，溫度保持在15℃。建立RT-PCR 反應檢測體系cDNA、無核酸酶水均為1.36 μl，探針混合物、通用混合物各為7.59 μl、0.12 ml，肌動蛋白用作內參基因。PTGS2上游引物：5′-GATGTGTATCCTCAGAGCTTTG-3′，下游引物：5′-CGATGACAGAGATATCCCAG-3′；PTGS2上游引物：5′-ACACTCCAGCTGGGATCA CATTG -CCAGG-3′，下游引物：5′-CTCAACTGGTGTGCGTGGAG-TCGGCAATTCAGTTGAGGGTAATCC-3′，在92℃下進行化學反應，持續時間20 min，之后62℃下反應3 min，重復36 次，PTGS2 表達量用2計算得到。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 兩組的COX-2、HRH1、PTGS2 水平比較

兩組的COX-2、HRH1、PTGS2 水平比較，腺性膀胱炎組均高于對照組，差異有統計學意義（均P＜0.05）。見表2。

表2 兩組的COX-2、HRH1、PTGS2 比較（）

2.2 腺性膀胱炎患者的COX-2、HRH1、PTGS2 與臨床特征關系

COX-2、HRH1、PTGS2 指標水平與腺性膀胱炎患者的性別、年齡（31～90 歲）無關，差異無統計學意義（均P＞0.05）；COX-2、HRH1、PTGS2 指標表達水平與腺性膀胱炎患者的梗阻、感染、結石有關，差異有統計學意義（均P＜0.05）；有梗阻患者的COX-2、HRH1、PTGS2 水平高于無梗阻患者，有感染患者的COX-2、HRH1、PTGS2 水平高于無感染患者，有結石患者的COX-2、HRH1、PTGS2 水平高于無結石患者，差異有統計學意義（均P＜0.05）。見表3。

表3 腺性膀胱炎患者的COX-2、HRH1、PTGS2 與臨床特征關系（n=88，）

2.3 COX-2、HRH1、PTGS2 對腺性膀胱炎的診斷價值

ROC 分析COX-2、HRH1、PTGS2 診斷腺性膀胱炎的曲線下面積低于三項聯合，差異有統計學意義（均P＜0.05）；三項聯合檢測的敏感度、準確度高于COX-2、HRH1、PTGS2 表達單一檢測，差異有統計學意義（均P＜0.05）。見表4。

表4 COX-2、HRH1、PTGS2 對腺性膀胱炎的診斷價值[%（n/N）]

3 討論

腺性膀胱炎屬于常見炎癥疾病，其發病機制尚不明確，多認為是膀胱尿路上皮受長期慢性刺激所導致。也被認為是在慢性炎癥、梗阻、結石等刺激因素作用下，經歷腺體形成等系列變化進而導致腺性膀胱炎出現。當下臨床中缺乏對腺性膀胱炎的研究，因此本研究旨在探討COX-2、HRH1、PTGS2 在腺性膀胱炎中的表達及聯合檢測的意義。

圖1 COX-2、HRH1、PTGS2 對腺性膀胱炎的診斷價值

COX-2 具有抑制免疫細胞凋亡的功能。研究顯示COX-2 水平升高可導致機體免疫細胞表達降低，增加疾病發生風險。本研究結果提示腺性膀胱炎患者的COX-2 呈現高度表達，可用于預測腺性膀胱炎。HRH1 以異染性顆粒形式存儲在機體肥大細胞內，組胺在表皮或基膜中表達能使機體產生瘙癢感，而當組胺在真皮層中則可使機體產生疼痛，造成血管性水腫等癥狀。本研究對腺性膀胱炎、膀胱炎患者體內的HRH1 水平進行分析，結果顯示腺性膀胱炎患者體內的HRH1 水平高于膀胱炎患者，提示腺性膀胱炎患者的HRH1 水平普遍較高，HRH1 可作為腺性膀胱炎早期診斷的輔助標志物。

研究指出，PTGS2 在腺性膀胱炎中水平顯著升高，提示腺性膀胱炎中PTGS2 表達呈現較高水平，其參與腺性膀胱炎的發展，PTGS2 在腺性膀胱炎中的作用機制：通過炎性細胞激活刺激血管平滑肌細胞遷移與增殖，增加血管通透性并發揮作用。本研究結果顯示，三項聯合檢測腺性膀胱炎的敏感度、準確度均高于單一檢測，說明聯合檢測比單項檢測的應用價值更高，能有效提高診斷準確度與敏感度，對腺性膀胱炎患者的治療及預后具有重要診斷價值。

綜上所述，COX-2、HRH1、PTGS2 表達異常與梗阻、感染、結石相關，且三者聯合檢測對腺性膀胱炎診斷價值更高，為腺性膀胱炎早期診斷提供借鑒指導。