丙酮酸脫氫酶E1α亞單位、轉(zhuǎn)錄激活反應(yīng)RNA 結(jié)合蛋白1 在表皮生長(zhǎng)因子受體突變晚期非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及對(duì)患者預(yù)后的影響

呂晶晶，鄒明雷，付培彪

河南理工大學(xué)第一附屬醫(yī)院/焦作市第二人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，河南 焦作4540000

肺癌是中國(guó)乃至全球惡性腫瘤死亡的主要原因，其中最常見的組織學(xué)類型為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）[1-2]。表皮生長(zhǎng)因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）突變能夠經(jīng)由多種通路增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移并抑制其凋亡，在NSCLC 患者中，EGFR突變患者達(dá)到了50%[3-4]。早期肺癌多無(wú)典型臨床癥狀，多數(shù)患者就診時(shí)腫瘤已發(fā)展至晚期，手術(shù)完整切除的難度較大，化療療效欠佳且不良反應(yīng)明顯，靶向治療逐漸成為臨床治療的首選，其中以吉非替尼為代表的酪氨酸激酶抑制劑（tyrosine kinase inhibitor，TKI）對(duì)EGFR突變的NSCLC 療效確切，且不良反應(yīng)相對(duì)較小[5-6]。盡管隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，NSCLC 的診斷及治療技術(shù)日益升高，但晚期NSCLC 患者的預(yù)后仍不理想，因此，研究參與肺癌細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)的主要基因及蛋白，探索其與患者預(yù)后的關(guān)系有重要的臨床價(jià)值。丙酮酸脫氫酶E1α 亞 單 位（pyruvate dehydrogenase complex E1α subunit，PDHA1）可促使有氧糖酵解轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸姿峄种颇[瘤的發(fā)生發(fā)展[7]。轉(zhuǎn)錄激活反應(yīng)RNA結(jié)合蛋白1（transcriptional activation RNA binding protein 1，TARBP1）可結(jié)合部分RNA干擾因子，調(diào)節(jié)磷酸化及抑癌基因的表達(dá)[8]。近年來(lái)，有研究報(bào)道PDHA1、TARBP1 與腫瘤發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但與EGFR突變NSCLC患者預(yù)后關(guān)系的研究卻較少[9-10]。本研究探討PDHA1、TARBP1 在EGFR突變NSCLC中的表達(dá)及對(duì)患者預(yù)后的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016 年5 月至2018 年5 月在焦作市第二人民醫(yī)院接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《NCCN 非小細(xì)胞肺癌臨床實(shí)踐指南》[11]中關(guān)于肺癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)纖維支氣管鏡獲取腫瘤組織，經(jīng)病理學(xué)檢查確診為NSCLC；②TNM 分期為Ⅲ～Ⅳ期；③基因檢測(cè)證實(shí)存在EGFR突變，接受靶向藥物治療；④入院前未接受過(guò)手術(shù)、放化療等任何抗腫瘤治療；⑤病歷資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①既往存在其他部位腫瘤；②合并嚴(yán)重感染、血液系統(tǒng)疾病及自身免疫性疾病；③合并嚴(yán)重的肝腎功能障礙、心血管系統(tǒng)等嚴(yán)重疾病；④未規(guī)律復(fù)診或隨訪失訪。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入95 例EGFR突變晚期NSCLC 患者，其中男52 例，女43 例；年齡51～76歲，平均（63.43±9.18）歲；病理類型：腺癌61 例，鱗狀細(xì)胞癌34 例；TMN 分期：Ⅲ期41 例，Ⅳ期54 例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移76 例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移19 例；基因檢測(cè)EGFR突變位點(diǎn)：E19del突變51例，L858R突變44例。

1.2 治療方法

所有患者均給予靶向藥物治療，吉非替尼250 mg口服，每天1 次，患者出現(xiàn)耐藥表現(xiàn)時(shí)，再次行基因檢測(cè)更換靶向藥物繼續(xù)治療；若患者出現(xiàn)腦轉(zhuǎn)移，予以輔助放療。

1.3 免疫組化法檢測(cè)PDHA1、TARBP1 蛋白表達(dá)情況

所有患者均經(jīng)纖維支氣管鏡取腫瘤組織，石蠟包埋，切片后脫蠟、水化，滴入檸檬酸緩沖液，微波加熱，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）洗滌，置于3%過(guò)氧化氫溶液中10 min 以阻斷非特異性染色，PBS 再次洗滌，山羊血清封閉。分別滴加PDHA1、TARBP1 一抗，室溫孵育1 h，滴加二抗，室溫孵育30 min。二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復(fù)染，脫水、透明后封片觀察。將相同濃度且與相應(yīng)抗體同源的非特異性球蛋白作為陰性對(duì)照，將已知的陽(yáng)性表達(dá)的切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

由2 名病理科主任醫(yī)師進(jìn)行結(jié)果判定。PDHA1 主要定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)黃色顆粒判定為陽(yáng)性細(xì)胞，依據(jù)染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例進(jìn)行評(píng)分：無(wú)著色計(jì)0 分，淡黃色染色計(jì)1 分，中等黃色染色計(jì)2 分，棕黃色染色計(jì)3 分；無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例≤10%計(jì)1 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為11%～50%計(jì)2 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例為51%～80%計(jì)3 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＞80%計(jì)4 分；將染色強(qiáng)度評(píng)分和陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分相乘，0～4 分判定為PDHA1 表達(dá)陰性，5～12 分為PDHA1 表達(dá)陽(yáng)性。TARBP1 主要定位于細(xì)胞質(zhì)，細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色判定為陽(yáng)性，否則判定為陰性。

1.4 隨訪

患者出院后進(jìn)行為期3 年的隨訪，2 年內(nèi)每3個(gè)月到院復(fù)查1 次，2 年后每6 個(gè)月到院復(fù)查1 次，以患者死亡或隨訪結(jié)束為隨訪終點(diǎn)，記錄患者的總生存率。復(fù)查內(nèi)容包括患者主訴、體征、血清腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)、胸腹部CT 檢查、頭部CT 或MRI 檢查，必要時(shí)行全身骨顯像檢查等。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0 軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier 法繪制生存曲線，組間比較采用Log-rank 檢驗(yàn)；NSCLC 患者預(yù)后的影響因素采用Cox 風(fēng)險(xiǎn)比例回歸模型分析；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PDHA1、TARBP1 表達(dá)情況的比較

95例NSCLC患者腫瘤組織中，PDHA1陽(yáng)性表達(dá)率為45.26%（43/95），PDHA1 陰性表達(dá)率為54.74%（52/95）；TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)率為74.74%（71/95），TARBP1 陰性表達(dá)率為25.26%（24/95）。

2.2 不同臨床特征NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 表達(dá)情況的比較

不同性別、年齡、TMN 分期、病理類型、EGFR突變位點(diǎn)NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。分化程度為中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陽(yáng)性表達(dá)率分別低于高分化和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.805、7.743，P＜0.05）；分化程度為中低分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移NSCLC 患者腫瘤組織中TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)率分別高于高分化和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.915、23.429，P＜0.05）。（表1）

表1 不同臨床特征NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 表達(dá)情況的比較（n=95）

2.3 不同PDHA1、TARBP1 表達(dá)情況NSCLC 患者預(yù)后情況的比較

至隨訪結(jié)束，95 例NSCLC 患者病死67 例，生存28 例。PDHA1 陽(yáng)性表達(dá)患者總生存率為44.2%，明顯高于PDHA1 陰性表達(dá)患者的17.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.875，P=0.005）。TARBP1陽(yáng)性表達(dá)患者的總生存率為18.3%，明顯低于TARBP1 陰性表達(dá)患者的62.5%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=13.744，P=0.000）。（圖1、圖2）

圖1 PDHA1陽(yáng)性表達(dá)（n=43）和PDHA1陰性表達(dá)（n=52）NSCLC患者的總生存曲線

圖2 TARBP1陽(yáng)性表達(dá)（n=71）和TARBP1陰性表達(dá)（n=24）NSCLC患者的總生存曲線

2.4 NSCLC 患者預(yù)后影響因素的單因素和多因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，年齡、TNM 分期均可能與NSCLC 患者的預(yù)后無(wú)關(guān)（P＞0.05），分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、吉非替尼耐藥情況、PDHA1 表達(dá)情況、TARBP1 表達(dá)情況均可能與患者的預(yù)后有關(guān)（P＜0.05）。多因素Cox 回歸分析結(jié)果顯示，分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達(dá)陰性、TARBP1 表達(dá)陽(yáng)性均是NSCLC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表2）

表2 NSCLC 患者預(yù)后影響因素的單因素和多因素分析

3 討論

隨著環(huán)境惡化及人們生活習(xí)慣的改變，肺癌的發(fā)病率日益增長(zhǎng)[12-13]。多數(shù)患者就診時(shí)肺癌已進(jìn)展至晚期，NSCLC 是其中最常見的類型，且多數(shù)患者合并EGFR突變[14]。臨床主要采用TKI 治療EGFR突變的晚期NSCLC 患者，其療效顯著，且不良反應(yīng)相對(duì)較輕[15]。盡管如此，多數(shù)晚期NSCLC患者的預(yù)后仍不盡如人意。惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展與細(xì)胞增殖、浸潤(rùn)相關(guān)的主要基因及蛋白的表達(dá)密切相關(guān)，由此可見，研究與EGFR突變晚期NSCLC 相關(guān)的生物學(xué)指標(biāo)對(duì)評(píng)估患者的預(yù)后有重要價(jià)值。寧瑞玲等[16]研究顯示，血清糖類抗原125、癌胚抗原水平可為接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC 患者的預(yù)后提供可靠參考依據(jù)。

本研究結(jié)果顯示，95 例NSCLC 患者腫瘤組織中，PDHA1 陽(yáng)性表達(dá)率為45.26%，陰性表達(dá)率為54.74%；TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)率為74.74%，陰性表達(dá)率為25.26%。表明EGFR突變的NSCLC 患者以PDHA1 陰性表達(dá)和TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)為主。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，性別、年齡、病理類型、TNM分期、EGFR突變位點(diǎn)均可能與NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1、TARBP1 的表達(dá)無(wú)關(guān)，而分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陽(yáng)性表達(dá)率較低、TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)率較高。提示腫瘤組織中PDHA1 陰性表達(dá)、TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)患者的惡性程度更高，且此類患者的預(yù)后較差。本研究選取患者均為晚期，數(shù)據(jù)具有一定偏倚，PDHA1、TARBP1 表達(dá)與可反映腫瘤惡性程度的另一指標(biāo)TNM分期未見明顯相關(guān)性。

本研究結(jié)果顯示，PDHA1 陽(yáng)性表達(dá)患者總生存率為44.2%，明顯高于PDHA1 陰性表達(dá)患者的17.3%；TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)患者的總生存率為18.3% ，明顯低于TARBP1 陰性表達(dá)患者的62.5%。表明PDHA1 陰性表達(dá)、TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)患者的預(yù)后較差。機(jī)體正常細(xì)胞獲取能量的途徑是線粒體氧化磷酸化及糖酵解，而腫瘤細(xì)胞的明顯特征之一就是以有氧糖酵解為主，PDHA1可促使有氧糖酵解轉(zhuǎn)變?yōu)檠趸姿峄瑢?duì)腫瘤新生血管生成有一定的抑制作用，當(dāng)PDHA1 表達(dá)及活性下調(diào)時(shí)，腫瘤細(xì)胞將快速分裂，更具有侵襲性[17]。此外，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，PDHA1基因可能參與了腫瘤細(xì)胞線粒體呼吸鏈e 相關(guān)反應(yīng)，進(jìn)而誘發(fā)細(xì)胞死亡[18]。TARBP1 可通過(guò)JNK/促分裂原活化的蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）通路調(diào)控其相關(guān)蛋白磷酸化，同時(shí)可結(jié)合干擾素誘導(dǎo)的雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）活化蛋白激酶來(lái)調(diào)節(jié)其激活基因與腫瘤抑制基因的表達(dá)[19]。近年來(lái)，有研究在人類惡性腫瘤中檢測(cè)出了TARBP1突變[20]。同時(shí)，本研究結(jié)果顯示，分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達(dá)陰性、TARBP1 表達(dá)陽(yáng)性均是NSCLC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。表明腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、PDHA1 表達(dá)和TARBP1 表達(dá)均與患者的預(yù)后密切相關(guān)，腫瘤分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達(dá)陰性、TARBP1 表達(dá)陽(yáng)性患者的生存時(shí)間可能相對(duì)較短。

綜上所述，接受靶向治療的EGFR突變晚期NSCLC 患者腫瘤組織中PDHA1 陰性表達(dá)率較低、TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)率較高，且PDHA1 陰性表達(dá)、TARBP1 陽(yáng)性表達(dá)患者的預(yù)后較差，分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、PDHA1 表達(dá)陰性、TARBP1表達(dá)陽(yáng)性均是NSCLC 患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。