食品中誘惑紅測定方法驗證

張艷紅，董 浩

（石河子質量與計量檢測所，新疆石河子 832000）

關鍵字：方法驗證；誘惑紅；檢出限；準確度；精密度

誘惑紅，國際染料索引稱為食用紅色17，它是由4-氨基-5-甲氧基-2-甲基苯磺酸經重氮化后與6-羥基-2-萘磺酸鈉耦合而成的合成染料。誘惑紅是我國在1990 年批準的一批食品著色劑。人工合成色素作為食品添加劑常被用于食品生產加工，它可以增加食品美觀和提高人們的食欲，但使用過量會對人體產生有害作用，因此我國規(guī)定了誘惑紅使用限量和檢測方法[1-4]。

《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）規(guī)定了汽水、硬糖、糕點和冰淇淋中誘惑紅的測定方法，其測定原理是誘惑紅在酸性條件下被聚酰胺粉吸附，而在堿性條件下解吸附，再用紙色譜法進行分離后，與標準比較定性、定量[5]。

方法驗證是指實驗室通過核查，提供客觀有效的證據(jù)證明自身滿足檢測方法規(guī)定要求的過程，即證實該實驗室現(xiàn)有的設施設備、環(huán)境、人員等條件能滿足該方法，適用于實驗室新引入的標準方法[6]。方法驗證過程中關鍵的參數(shù)取決于方法的特性和可能測到的樣品基質的檢測范圍，至少應測定準確度和精密度。對于痕量化學分析實驗室，實驗室還應確保獲得適當?shù)臋z出限和定量限。通常情況下定量分析方法驗證的參數(shù)包括但不限于選擇性、線性范圍、檢出限、定量限、精密度（重復性和再現(xiàn)性）及準確度。

1 材料與方法

1.1 材料與設備

誘惑紅標準物質，批號C10125000，純度80.0%（德國LGC Labortion）。

UV1750 紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

1.2 方法

1.2.1 標準工作曲線的測定

稱取誘惑紅標準物質0.012 5 g，用水溶解后定容至100 mL，濃度為100 μg/mL，分別吸取0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL 和1.0 mL于10 mL 比色管中，加水稀釋至刻度，其濃度分別為0 μg/mL、2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、6.0 μg/mL、8.0 μg/mL 和10.0 μg/mL， 于500 nm 下 測 定 吸光值[5]。

1.2.2 空白值測定及方法檢出限的計算

依據(jù)《環(huán)境監(jiān)測分析方法標準制訂技術導則》（HJ 168—2020）[7]檢出限的一般確定方法如下。

按照樣品分析的全部步驟，重復n（≥7）次空白試驗，將各測定結果換算為樣品中的濃度或含量，計算n次平行測定的標準偏差，按公式計算方法檢出限：

式中：MDL為方法檢出限，μg/mL；n為樣品的平行測定次數(shù)；t為自由度為n-1、置信度為99%時的t分布值（單側）；S為n次平行測定的標準偏差。其中，當自由度為n-1，置信度為99%時的t值可參考表1 取值。

表1 t 值表

1.2.3 精密度的測定

吸取濃度為100 μg/mL 的誘惑紅標準溶液0.5 mL 于10 mL 比色管中，加水稀釋至刻度，溶液的濃度為5.0 μg/mL，此濃度配制成10 個樣品，于500 nm 下測定吸光值，按下式計算其平均值、標準偏差和變異系數(shù)（精密度）：

1.2.4 準確度的測定

按照《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標準規(guī)定的方法對樣品進行處理，在該樣品中加入100 μg/mL 誘惑紅標準溶液0.2 mL，按照樣品處理方法進行處理，與原樣品一同在500 nm 下測定其吸光值，根據(jù)標準工作曲線回歸方程計算樣品中的濃度，然后根據(jù)加入標準濃度，計算其回收率。

2 結果與分析

根據(jù)《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017）、《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）對本實驗的線性范圍、檢出限、精密度和準確度進行相關評價。

2.1 線性范圍

根據(jù)《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017）標準規(guī)定準確定量的方法，線性回歸方程的相關系數(shù)不低于0.99，本實驗按照《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標準規(guī)定的測定條件進行測定，其線性回歸方程為y=0.058 8x+0.004 9，相關系數(shù)為0.999 7，線性范圍為0 ～10.0 μg/mL，符合標準規(guī)定的要求。標準工作曲線如圖1 所示。

圖1 標準工作曲線

2.2 檢出限

根據(jù)《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）規(guī)定，食品中誘惑紅的檢出限為取樣量為10 g 時，檢出限為25 mg/kg，本實驗誘惑紅的檢出限為0.013 μg/mL，符合標準方法要求。檢出限結果見表2。

表2 空白值的測定結果及方法檢出限的計算結果

2.3 精密度

根據(jù)《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017）規(guī)定，被測組分含量1 μg/kg 時，實驗室內變異系數(shù)為30%，10 μg/kg 時，實驗室內變異系數(shù)為21%；根據(jù)《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）規(guī)定，在重復條件下獲得的2 次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%[5]。本實驗測得誘惑紅的相對標準偏差（變異系數(shù)）為1.35%， 符合標準方法要求。精密度結果見表3。

表3 試樣精密度測定結果

2.4 準確度

根據(jù)《合格評定 化學分析方法確認和驗證指南》（GB/T 27417—2017）規(guī)定，當濃度水平為1 ～100 mg/kg 時，回收率為90%～110%。根據(jù)方法條件，本實驗測定的加標回收率為93.7%～101.6%，平均值為97.3%，其結果在GB/T 27417—2017 標準規(guī)定的范圍內，說明本實驗條件可行有效。準確度結果見表4。

表4 準確度測定結果

3 結論

按照《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標準方法規(guī)定，對誘惑紅標準工作曲線線性范圍、空白值最低檢出限、精密度、加標回收率的驗證，表明該實驗室現(xiàn)有的設施設備、環(huán)境、人員等條件能滿足《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標準規(guī)定的方法，因此本所實驗室對《食品安全國家標準 食品中誘惑紅的測定》（GB 5009.141—2016）標準規(guī)定范圍的產品可按照標準規(guī)定方法開展檢測。另外，對其他用分光光度法測定的項目也可按照本文的驗證方法進行方法評價，以此確定該項目實驗室能否開展。