復方麝香黃芪滴丸中7個活性成分在正常大鼠和腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內藥動學研究

李東紅，徐翠珊，韓德恩，王孟琰，張運克，賈永艷, 3*

復方麝香黃芪滴丸中7個活性成分在正常大鼠和腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內藥動學研究

李東紅1，徐翠珊1，韓德恩1，王孟琰1，張運克2*，賈永艷1, 3*

1. 河南中醫藥大學藥學院，河南 鄭州 450046 2. 河南中醫藥大學康復醫學院，河南 鄭州 450046 3. 河南省中藥特色炮制技術工程研究中心，河南 鄭州 450046

研究復方麝香黃芪滴丸中7個活性成分（-藁本內酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮、刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷、芍藥苷）在正常大鼠與腦缺血再灌注損傷模型大鼠的藥動學過程，探討其藥動學規律差異。SD大鼠ig復方麝香黃芪滴丸后采集不同時間點血漿，應用超高效液相色譜?四極桿/靜電場軌道阱高分辨質譜（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）測定血藥濃度，采用Kinetica 5.1藥動學軟件計算各給藥組中7個成分的藥動學參數，并使用SPSS單因素方差分析藥動學參數在ig低、中、高劑量復方麝香黃芪滴丸的正常大鼠和腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內是否存在顯著性差異。7個生物活性成分的某些藥動學參數在正常大鼠和腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內有顯著性差異。各劑量下的-藁本內酯的達峰濃度（max）均較正常組明顯升高，藥時曲線下面積（AUC）在低劑量時明顯增加；毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷和芍藥苷AUC有所降低；毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的半衰期有所增加。為進一步探討復方麝香黃芪滴丸治療腦缺血疾病的作用機制奠定基礎，為臨床制定科學合理的用藥策略提供參考。

復方麝香黃芪滴丸；腦缺血再灌注損傷；藥動學；-藁本內酯；芒柄花素；毛蕊異黃酮；刺芒柄花苷；毛蕊異黃酮葡萄糖苷；苦杏仁苷；芍藥苷

復方麝香黃芪滴丸是在經典名方補陽還五湯[1]的基礎上加麝香、冰片經提取加工而成的復方制劑，用于缺血性腦卒中的治療。其有效成分主要為黃芪的黃酮類組分、當歸和川芎的內酯組分、桃仁的苷類組分和白芍的萜類組分等，這些成分具有抗氧化、保護血管內皮細胞、預防并治療多種心血管并發癥、抗動脈粥樣硬化、抗炎、神經保護、心臟保護等作用[2-8]，是該制劑的主要藥效物質基礎。

中藥藥動學研究在促進中藥現代化中發揮著重要作用，生理及病理的差異會影響機體的內部環境，從而改變中藥在機體內的吸收、分布、代謝和排泄過程，導致藥動學參數的變化[9]。因此對于創新中藥來說，生理和病理狀態下的藥動學研究都是不可或缺的部分。復方麝香黃芪滴丸的藥效物質基礎多樣，藥理藥效顯著，但其在體內的吸收利用過程尚無研究支持。根據本課題組的前期研究，-藁本內酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮、刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷和芍藥苷同時存在于滴丸的體外制劑和體內血清中[10]，是復方麝香黃芪滴丸治療缺血性腦卒中的潛在藥效物質基礎。本研究擬選取復方麝香黃芪滴丸中-藁本內酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮、刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷和芍藥苷共7個代表性藥效物質，借助超高效液相色譜?四極桿/靜電場軌道阱高分辨質譜（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）技術，研究復方麝香黃芪滴丸在正常大鼠和腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內的藥動學過程，對比分析復方麝香黃芪滴丸在正常和疾病狀態下的藥動學規律差異，以期為該制劑治療腦缺血疾病的作用機制和制定科學合理的臨床用藥策略提供參考意義。

1 材料

1.1 藥品與試劑

對照品芒柄花素（批號wkq19013002）、毛蕊異黃酮（批號wkq19011810）、毛蕊異黃酮葡萄糖苷（批號wkq19011506）、苦杏仁苷（批號wkq19012401）、芍藥苷（批號wkq20041008）購自四川省維克奇生物科技有限公司，質量分數均≥98%；對照品-藁本內酯（批號MUST-20041005，質量分數≥98%）、刺芒柄花苷（批號MUST-20041101，質量分數為98.54%）均購自成都曼斯特有限公司；卡馬西平對照品（批號H07J9L63102，質量分數≥98%）購自上海源葉生物科技有限公司；注射用青霉素鈉（批號F9058606）購自華北制藥股份有限公司；復方麝香黃芪滴丸（批號20210101）為本實驗室自制，-藁本內酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮、刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷和芍藥苷的質量分數分別為0.18、0.02、0.08、0.18、0.24、0.21、0.14 mg/g；質譜級甲醇購自美國TEDIA公司；質譜級甲酸購自美國Thermo Fisher Scientific公司；水為自制超純水。

1.2 儀器

Vanquish-Orbitrap Fusion高效液相色譜質譜聯用儀系統、Xcalibur工作站、Heraeus Multifuge X1R型冷凍臺式高速離心機（美國Thermo Fisher Scientific公司）；AE240型十萬分之一天平（德國梅特勒公司）；BSA224S-CW型萬分之一天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；Milli-QPOD型超純水制備器（美國Millipore公司）；ANPEL DC-24型氮吹儀（上海安譜科學儀器有限公司）；勻漿器（上海科哲生化科技有限公司）；SHA-C型水浴振蕩器（鞏義市予華儀器有限責任公司）。

1.3 動物

SPF級雄性SD大鼠，體質量（240±20）g，8周齡，購自濟南朋悅實驗動物繁育有限公司，許可證號SCXK（魯）20190003。動物飼養1周以適應新環境，晝夜各半循環照明，自由飲水，實驗前禁食12 h。動物實驗經河南中醫藥大學實驗動物倫理委員會審核（編號DWLL202103143），實驗過程符合動物實驗的倫理要求。

2 方法與結果

2.1 給藥與樣品采集

2.1.1 正常大鼠給藥及樣品采集 雄性SD大鼠24只，適應性飼養7 d后開始實驗。實驗前所有大鼠禁食12 h，自由飲水，隨機分為空白組及復方麝香黃芪滴丸低、中、高劑量（7.8、15.6、31.2 g/kg，分別相當于1、2、4倍臨床劑量）組，各劑量相當于單體給藥量見表1。復方麝香黃芪滴丸加水，50～60 ℃水浴加熱使溶解，配制成質量濃度為1 g/mL的溶液。各給藥組ig相應藥物，空白組ig水；在給藥后0.083、0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、9、12、24 h時間點通過眼眶靜脈取血，每次采血量0.5 mL，收集在含肝素的1.5 mL離心管中。全血靜置30 min后，4 ℃、4000 r/min離心10 min，分取上層血漿，即得血漿樣品，于?80 ℃冰箱中保存。

表1 各成分的給藥劑量

2.1.2 腦缺血再灌注損傷模型的建立、給藥及樣品采集 取27只雄性SD大鼠，適應性飼養7 d后開始實驗。造模前所有大鼠禁食12 h，自由飲水。參照Zea-Longa改良線栓法制備腦缺血再灌注損傷大鼠模型[11-12]。造模24 h后，采用Zea Longa評分標準[11]對腦缺血再灌注損傷大鼠進行神經功能學評分，評分為2.4±0.5，表明造模成功。制備正常大鼠和模型大鼠大腦的冠狀切片，使用2% TTC染色，多聚甲醛固定，腦梗死區域呈白色，正常區域呈紅色，進一步驗證模型的可靠性，見圖1。造模成功大鼠共23只，隨機分為空白組（5只）及復方麝香黃芪滴丸低、中、高劑量（7.8、15.6、31.2 g/kg，分別相當于1、2、4倍臨床劑量，每組6只）組，各給藥組ig相應藥物，空白組ig水。血漿樣品采集按“2.1.1”項下方法處理。

圖1 正常大鼠和模型大鼠腦切片染色結果

2.2 血漿樣品處理

分別精密吸取血漿樣品200 μL于2 mL離心管中，加入內標卡馬西平溶液（14.12 ng/mL）50 μL和甲醇800 μL，渦旋1 min，置于振蕩器上振蕩15 min，再以12 000 r/min離心10 min，取上清液，氮吹儀吹干，殘渣加入初始流動相100 μL，渦旋使溶解，12 000 r/min離心10 min，取上層溶液，作為供試品溶液，取5 μL進樣分析。

2.3 對照品及內標溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 分別精密稱取-藁本內酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮、刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷、芍藥苷對照品適量，加甲醇分別配制得到含-藁本內酯0.500 mg/mL、芒柄花素0.594 mg/mL、毛蕊異黃酮0.514 mg/mL、刺芒柄花苷0.440 mg/mL、毛蕊異黃酮葡萄糖苷0.212 mg/mL、苦杏仁苷0.588 mg/mL、芍藥苷0.240 mg/mL的對照品溶液，4 ℃保存備用。

2.3.2 內標溶液的制備 精密稱取卡馬西平對照品適量，加甲醇溶解，制成0.706 mg/mL卡馬西平內標對照品貯備液，4 ℃保存備用。

2.4 測定條件

2.4.1 色譜條件 Accucore TM C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，2.6 μm）；流動相為0.1%甲酸水溶液（A）-甲醇（B），梯度洗脫：0～2 min，20%～42% B；2～5 min，42%～45% B；5～7 min，45%～62% B；7～9 min，62%～72% B；9～11 min，72%～85% B；11～14 min，85%～100% B；體積流量為0.2 mL/min；柱溫為30 ℃；進樣量為5 μL。

2.4.2 質譜條件 離子源為電噴霧離子化源（ESI）；載氣為氮氣；鞘氣體積流量4.09 L/min；輔助氣體積流量6.4 L/min；掃氣體積流量0 L/min；噴霧電壓＋3.50 kV、?2.50 kV；離子傳輸管300 ℃；氣化溫度275 ℃；掃描方式采用正負離子Full MS/dd-MS2模式，其中一級全掃描（分辨率為120 000），二級掃描（分辨率為15 000），碰撞能量35%，正、負離子掃描范圍均為/100～1000。除正、負離子掃描方式外采用選擇離子掃描模式（分辨率為60 000），待測成分及內標化合物的離子基本信息見表2。

2.5 方法學考察

2.5.1 專屬性考察 取加入混合對照品溶液的空白血漿樣品、大鼠ig復方麝香黃芪滴丸后的含藥血漿樣品和空白血漿樣品，按照“2.2”項下的生物樣品處理方法處理后，按“2.4”項下色譜-質譜條件進樣，記錄色譜圖，見圖2。結果表明-藁本內酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮、刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷、芍藥苷的保留時間分別為10.44、7.30、9.24、5.68、3.81、2.69、3.50 min，分離度良好且儀器響應度高。血漿內源性物質及其他物質均不干擾大鼠體內各待測成分的含量測定。

表2 待測成分及內標化合物離子基本信息

A-質控樣品 B-含藥血漿 C-空白血漿

2.5.2 線性范圍與定量限考察 精密吸取各對照品溶液適量，混合均勻，采用甲醇梯度稀釋的方法分別稀釋成一定質量濃度梯度的混合對照品溶液，取空白血漿200 μL，加入各質量濃度梯度的混合對照品溶液和卡馬西平內標溶液各50 μL，制得一系列不同質量濃度的血漿樣品，按“2.2”項下血漿樣品處理方法進行處理，按“2.4”項下方法測定，應用Xcalibur軟件以內標法對各成分進行分析。以血漿中實際被測物的質量濃度為橫坐標（），以血漿中被測物與內標物的峰面積比值為縱坐標（），進行線性回歸計算，求得回歸方程，建立標準曲線，血漿樣品中各成分線性內的最低質量濃度的信噪比均大于10，將其最低質量濃度作為定量下限。對照品質量濃度梯度、回歸方程、線性范圍及相關系數見表3。

表3 對照品質量濃度梯度、回歸方程、線性范圍及相關系數

2.5.3 精密度與準確度 精密取大鼠空白血漿，分別加入高、中、低3個不同質量濃度的混合對照品溶液，按“2.2”項下生物樣品處理方法，每個質量濃度平行制備6份，制成高、中、低3個質量濃度的質控樣品，每個質量濃度日內平行測定3次及連續測定3 d，計算質控樣品的質量濃度，計算高、中、低3個質量濃度的日內精密度及日間精密度，計算準確度及精密度。結果表明精密度不超過10%，準確度在±10%以內，說明該測定方法準確，可用于大鼠血漿化合物測定。

2.5.4 提取回收率和基質效應 共配制3組樣品，每組樣品高、中、低3個質量濃度，每個質量濃度平行6個樣本（來自不同供體）。3組樣品分別為對照品溶液（A）；空白基質加對照品溶液制備質控樣品，再按“2.2”項下處理樣品（B）；空白基質經“2.2”項下樣品前處理后再加入對照品溶液（C）。將3組樣品進樣分析，通過每組樣品的峰面積計算提取回收率（B/C）和基質效應（C/A）。待測成分的平均基質效應為83.87%～105.93%，表明該方法對大鼠血漿中待測成分的測定沒有明顯干擾；待測成分的平均提取回收率為83.79%～102.22%，表明樣品在制備過程中待測成分沒有顯著損耗，基質效應和提取回收率的RSD均在10%以內，符合生物樣本分析的規定。

2.5.5 穩定性試驗 分別制備高、中、低3個質量濃度的質控樣品，每個質量濃度平行測定9份，分別考察以下3種情況的穩定性：①短期穩定性：將處理好待分析的樣品在4 ℃樣品盤放置12 h；②凍融穩定性：將處理后的樣品在?20 ℃冰箱中反復凍融3次；③長期穩定性：將待分析的樣品在?80 ℃凍存15 d。待測成分的短期穩定性、凍融穩定性和長期穩定性良好，各成分高、中、低質量濃度的均值與標示濃度的偏差絕對值均≤6.73%，符合生物樣本分析的規定。

2.6 藥動學研究

大鼠ig復方麝香黃芪滴丸后，按照上述所建立的方法測定各時間點的血藥濃度，以時間為橫坐標（），血藥質量濃度為縱坐標（）繪制平均血藥質量濃度-時間曲線，見圖3。采用Kinetica 5.1藥動學軟件以非房室模型分析法計算各給藥組各個成分的藥動學參數，包括藥時曲線下面積（AUC）、平均滯留時間（MRT）、達峰濃度（max）、達峰時間（max）、半衰期（1/2）等，所有參數以表示，并用SPSS單因素方差分析各個藥動學參數在ig低、中、高劑量復方麝香黃芪滴丸的正常大鼠和模型大鼠體內是否存在顯著性差異。如表4所示，與正常大鼠相比，在腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內，-藁本內酯的C在各劑量組中均明顯升高（＜0.01），T無明顯改變，而AUC在低劑量組中明顯增加（＜0.01）；毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷和芍藥苷的AUC有所降低（＜0.05、0.01）；毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的半衰期有所增加。

圖3 7種活性成分正常大鼠(A) 及模型大鼠(B) 體內的藥時曲線

表4 7種活性成分在正常大鼠和模型大鼠血漿中的藥動學參數(, n = 6)

Table 4 Pharmacokinetic parameters of seven active ingredients in plasma of normal rats and model rats (, n = 6)

表4 7種活性成分在正常大鼠和模型大鼠血漿中的藥動學參數(, n = 6)

化合物參數正常大鼠模型大鼠 復方麝香黃芪滴丸7.8 g·kg?1復方麝香黃芪滴丸15.6 g·kg?1復方麝香黃芪滴丸31.2 g·kg?1復方麝香黃芪滴丸7.8 g·kg?1復方麝香黃芪滴丸15.6 g·kg?1復方麝香黃芪滴丸31.2 g·kg?1 Z-藁本內酯Cmax/(ng·mL?1)34.13±1.1957.67±1.79113.93±9.2865.01±4.13**89.06±2.21**162.83±19.05** Tmax/h0.75±0.000.75±0.000.71±0.100.71±0.100.75±0.000.75±0.00 AUC0～t/(ng·h·mL?1)177.16±7.78372.79±15.23691.45±14.18312.16±29.69**341.02±18.29687.47±17.42 AUC0～∞/(ng·h·mL?1)188.92±10.24403.33±13.20738.21±15.83322.08±27.95**358.39±16.80741.15±29.03 t1/2/h6.07±0.616.41±0.516.06±0.304.16±0.46**5.02±0.60**6.89±1.06* MRT0～t/h6.19±0.277.00±0.146.83±0.265.27±0.30**5.24±0.20**6.20±0.47** MRT0～∞/h7.83±0.629.00±0.418.48±0.476.05±0.62**6.51±0.45**8.21±1.18 CL/(L·h?1)1.91±0.101.79±0.061.96±0.041.04±0.10**1.86±0.091.80±0.07 Vss/L14.96±0.8816.13±1.0416.57±0.876.33±1.14**12.14±1.28**14.73±1.69* 芒柄花素Cmax/(ng·mL?1)17.87±1.9037.66±5.0393.36±6.4933.08±1.46**34.76±4.3479.75±11.33** Tmax/h0.50±0.000.29±0.100.33±0.130.25±0.00**0.42±0.200.42±0.13 AUC0～t/(ng·h·mL?1)69.99±3.26144.39±20.86369.04±21.90102.97±5.00140.67±18.25357.38±54.76 AUC0～∞/(ng·h·mL?1)76.09±3.01160.87±25.39415.10±30.52107.41±5.72155.10±18.40402.49±62.33 t1/2/h5.93±0.687.77±1.368.95±0.954.83±1.237.64±1.588.35±1.26 MRT0～t/h5.87±0.176.69±0.546.08±0.314.68±0.31**6.06±0.62*6.59±0.46 MRT0～∞/h8.02±0.499.59±1.369.49±1.015.77±0.56**8.82±1.849.90±0.45 CL/(L·h?1)0.48±0.020.46±0.070.35±0.030.31±0.02**0.44±0.05**0.34±0.05** Vss/L3.86±0.334.39±0.503.34±0.231.81±0.17**3.88±1.003.37±0.49

續表4

與同等劑量正常組比較：*＜0.05**＜0.01

*< 0.05**< 0.01normal group at the same dose

3 討論

本研究通過預實驗對7個成分進行正、負離子掃描模式測定進行比較分析，各個成分在正離子模式下響應更好，確定均在正離子模式下檢測，芍藥苷[M＋Na]+比[M＋H]+響應好，故芍藥苷采用[M＋Na]+離子峰進行檢測，其余成分均采用[M＋H]+進行檢測；選用卡馬西平為內標，該內標物性質穩定，檢測信號強，且能與被測物質完全分離；血漿樣品的處理中考察了甲醇、乙腈、甲醇-乙腈（1∶1）沉淀蛋白，結果表明選用甲醇沉淀蛋白法，內源性物質干擾小，基質效應、提取回收率更佳。

藥動學研究表明，此7個成分在正常大鼠和腦缺血再灌注損傷模型大鼠中均能在1 h內達峰；刺芒柄花苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷和芍藥苷在腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內的達峰時間均有不同程度的縮短，表明復方麝香黃芪滴丸可以提高部分藥效成分在患病個體體內的吸收速度；與現有文獻相比，復方麝香黃芪滴丸中-藁本內酯、芒柄花素、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷和芍藥苷的達峰時間較其他制劑均有大幅度縮短[13-17]，表明滴丸較其他傳統劑型可以提高藥效成分的吸收速度，達到起效迅速的目的[18]；但1 h內取樣點不夠密集，藥時曲線無法看到清楚的吸收階段，有待進一步的研究。

-藁本內酯、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷和苦杏仁苷在正常大鼠體內符合線性藥動學過程，毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷和芍藥苷在模型大鼠體內符合線性藥動學過程，說明這些成分在相應的生理病理狀態下，其生物半衰期與給藥劑量無關，一次給藥情況下，AUC、尿藥排泄量與給藥劑量分別成正相關[19]；在腦缺血再灌注損傷模型大鼠體內，各個劑量組-藁本內酯max均較正常組明顯升高，而-藁本內酯能呈劑量相關性地促進核因子E2相關因子2（nuclear factor erythroid 2-related factor 2，Nrf2）的核轉錄及其下游基因血紅素加氧酶-1（heme oxygenase-1，HO-1）表達，并抑制Nrf2抑制劑Kelch樣環氧氯丙烷相關蛋白1（Kelch-1ike ECH-associated protein l，Keap1）表達，從而減少細胞內活性氧（reactive oxygen species，ROS）水平[20]，提示-藁本內酯max升高可以更好地減少模型大鼠細胞內的ROS水平；max無明顯改變，AUC在低劑量組中明顯增加，而-藁本內酯可以劑量相關性地提高內源性抗氧化劑谷胱甘肽過氧化物酶活性，增加缺血皮質凋亡抑制蛋白B淋巴細胞瘤2（B-cell lymphoma 2，Bcl-2）的表達，并抑制Bcl-2相關X蛋白（Bcl-2 associated X protein，Bax）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（cystein-asparate protease-3，Caspase-3）的活性，從而減少腦梗死體積；抑制過氧化物酶5（peroxiredoxin 5，Prx5）和Prx6表達及其下游Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）/核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）信號傳導，從而減輕缺血性腦卒中的神經元丟失、星形膠質細胞和小膠質細胞/巨噬細胞活化[20]，提示低劑量時-藁本內酯可能通過此2種機制減少腦梗死體積，中、高劑量組AUC無明顯改變，表明腦缺血再灌注病理狀態下，-藁本內酯吸收速度變化較小，吸收量和體內暴露水平有所增大。芒柄花素和刺芒柄花苷在腦缺血病理狀態下吸收量和體內暴露水平沒有明顯差異，說明大鼠的腦缺血再灌注病理條件對芒柄花素和刺芒柄花苷的吸收影響不大，芒柄花素具有神經保護和抑制炎性反應的作用，可以對局部腦缺血進行保護[21]，刺芒柄花苷可以通過抗自噬、抗凋亡、抗炎等對急性腦缺血發揮神經保護作用[22]。毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、苦杏仁苷和芍藥苷AUC有所降低，說明吸收量和體內暴露水平有所降低，但毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷的半衰期有所增加，說明其消除減慢，在體內的滯留時間更長，毛蕊異黃酮可以通過抗炎、抗氧化應激、保護大腦神經元以及保護血腦屏障等作用，對腦卒中等疾病起到一定的腦保護作用[23]。復方麝香黃芪滴丸7個生物活性成分的某些藥動學參數在正常給藥和模型給藥大鼠體內有顯著性差異，表明生理和病理狀態下機體對藥物的吸收代謝有所影響。總體來說，復方麝香黃芪滴丸較傳統制劑可以較大提高部分藥效成分的吸收速度，在模型組中更為明顯；可以提高部分藥效成分的最大血藥濃度、生物利用度和體內滯留時間，對缺血性腦卒中的治療可以起到顯著影響。

-藁本內酯、芒柄花素、刺芒柄花苷、苦杏仁苷和芍藥苷的max、AUC0～t相對較大，為主要的入血成分[24]。-藁本內酯可以通過激活多個轉錄因子Nrf2下游基因，保護血管內皮細胞免受氧化應激，挽救高脂飲食誘導的動脈粥樣硬化[25]，還通過抑制NOD樣受體家族3（NOD-like receptor family 3，NLRP3）炎癥小體活化和焦亡，保護BV2小膠質細胞抵抗氧糖剝奪/復氧誘導的損傷[26]；芒柄花素可以保護前腦缺血再灌注損傷中的血腦屏障并抑制神經炎癥[27]；苦杏仁苷可以抑制低密度脂蛋白受體（low-density lipoprotein receptor，LDLR）?/?小鼠動脈粥樣硬化[28]；芍藥苷對腦缺血再灌注損傷大鼠具有神經保護作用，其機制可能與抑制NLRP3炎癥體信號通路分子的表達、減輕炎癥反應相關；刺芒柄花苷的母核刺芒柄花素具有清除氧自由基、減少細胞脂質過氧化物、降低膽固醇等作用[29]。

總之，本研究首次對復方麝香黃芪滴丸中7個代表性藥效物質進行了藥動學研究，對比分析了7個成分在正常和疾病狀態下的藥動學規律差異，為進一步探究該制劑治療腦缺血疾病的作用機制奠定基礎，為臨床制定科學合理的用藥策略提供一定參考意義。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 清·王清任撰. 醫林改錯 [M]. 新1版. 上海: 上海科學技術出版社, 1966: 31.

[2] 張瑞華, 張靜文, 劉玲, 等. 黃芪及其有效組分藥理作用與臨床應用現狀 [J]. 陜西中醫, 2021, 42(8): 1138-1141.

[3] 侯騰飛, 陳媛媛, 張群群, 等. 3類16味臨床常用抗動脈粥樣硬化中藥的作用機制研究 [J]. 中國藥房, 2018, 29(17): 2432-2438.

[4] 張來賓, 呂潔麗, 陳紅麗, 等. 當歸中苯酞類成分及其藥理作用研究進展 [J]. 中國中藥雜志, 2016, 41(2): 167-176.

[5] 蔣希成, 李曉瑩, 陳陽燕, 等.川芎治療缺血性腦卒中的研究進展[J]. 中華中醫藥學刊, 2022, 40(5): 4-7.

[6] 何樹苗, 陳元堃, 曾奧, 等. 藁本內酯藥理作用及機制研究進展 [J]. 廣東藥科大學學報, 2021, 37(2): 152-156.

[7] 張妍妍, 韋建華, 盧澄生, 等. 桃仁化學成分、藥理作用及質量標志物的預測分析 [J]. 中華中醫藥學刊, 2022, 40(1): 234-241.

[8] 張育貴, 張淑娟, 邊甜甜, 等. 芍藥苷藥理作用研究新進展 [J]. 中草藥, 2019, 50(15): 3735-3740.

[9] 鞏仔鵬, 陳穎, 張瑞杰, 等. 疾病狀態下的中藥藥代動力學研究進展 [J]. 中國中藥雜志, 2015, 40(2): 169-173.

[10] 李東紅, 胥芷靈, 徐翠珊, 等. 復方麝香黃芪滴丸的體外及體內血清化學成分分析 [J]. 中國醫院藥學雜志, 2022, 42(6): 582-589.

[11] Longa E Z, Weinstein P R, Carlson S,. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats [J]., 1989, 20(1): 84-91.

[12] 張運克, 車志英, 李可. 補陽還五湯聯合骨髓間充質干細胞對腦缺血大鼠血腦屏障通透性的影響 [J]. 中華中醫藥學刊, 2019, 37(7): 1548-1553.

[13] 孫國明, 郭小藤, 趙睜睜, 等. 芎湯超臨界提取部位中藁本內酯、洋川芎內酯A、正丁基苯酞在大鼠體內的藥動學研究 [J]. 中草藥, 2014, 45(22): 3302-3307.

[14] 林青, 李媛, 譚曉梅, 等. LC-MS/MS同時測定大鼠血漿中黃芪成分芒柄花素、毛蕊異黃酮和異鼠李素的濃度及其藥動學研究 [J]. 中藥材, 2013, 36(4): 589-593.

[15] 吳磊, 居文政, 戴國梁, 等. 芪雪浸膏劑中大黃素、大黃酸和毛蕊異黃酮在大鼠體內的藥動學研究 [J]. 中國藥房, 2018, 29(21): 2935-2938.

[16] 張瑜, 張富賡, 張博凱, 等. 芪藶強心膠囊中黃芪甲苷、毛蕊異黃酮葡萄糖苷和芒柄花素在大鼠體內藥動學研究 [J]. 中草藥, 2019, 50(16): 3891-3896.

[17] 孫寒, 梁笑, 黃宇哲, 等. 排膿散中桔梗對柚皮苷和芍藥苷大鼠體內藥動學的影響 [J]. 中草藥, 2018, 49(12): 2897-2901.

[18] 米楠. 復方丹蛭片體內化學成分及藥代動力學研究 [D]. 上海: 中國醫藥工業研究總院, 2019.

[19] 劉建平. 生物藥劑學與藥物動力學 [M]. 第4版. 北京: 人民衛生出版社, 2011: 185.

[20] 高娟, 蘇剛, 劉驥飛, 等. 藁本內酯對缺血性腦卒中的神經保護作用研究進展 [J]. 中國新藥與臨床雜志, 2021, 40(9): 609-613.

[21] 姜慈靜, 吳秋慧, 任倩瑤, 等. 芒柄花黃素對大鼠局部腦缺血再灌注損傷保護作用的初步研究 [J]. 中國醫藥導報, 2017, 14(32): 8-10.

[22] 吳丘玲, 成彥瓊, 劉愛軍, 等. 4個黃芪異黃酮類化合物對PC 12細胞分化的影響 [J]. 藥學實踐雜志, 2020, 38(3): 232-236.

[23] 陳雨菡, 石小鵬, 馬善波, 等. 黃芪中毛蕊異黃酮的腦保護作用研究進展 [J]. 中國急救醫學, 2021, 41(11): 1004-1008.

[24] 孫晶晶, 殷瑋, 凌珊, 等. 復方丹參制劑中7種成分在大鼠血漿中的藥動學研究 [J]. 中成藥, 2021, 43(8): 1983-1988.

[25] Zhu Y, Zhang Y J, Huang X,.-Ligustilide protects vascular endothelial cells from oxidative stress and rescues high fat diet-induced atherosclerosis by activating multiple NRF2 downstream genes [J]., 2019, 284: 110-120.

[26] Hu J, Wei J, Zeng C,.-Ligustilide protects BV-2 microglial cells against oxygen-glucose deprivation/ reoxygenation-induced injury by inhibiting NLRP3 inflammasome activation and pyroptosis [J]., 2020, 18: 205873922093492.

[27] 顧民華, 洪文, 唐傳其, 等. 芒柄花素保護前腦缺血再灌注損傷中的血腦屏障并抑制神經炎癥 [J]. 暨南大學學報: 自然科學與醫學版, 2015, 36(1): 34-39.

[28] 雷甜甜. 苦杏仁苷抑制LDLR?/?小鼠動脈粥樣硬化的作用及機制研究 [D]. 成都: 電子科技大學, 2020.

[29] 王健, 孫瑜, 陳磊, 等. 芒柄花素的現代研究進展 [J]. 山西中醫學院學報, 2017, 18(5): 74-76.

Pharmacokinetics study of seven active ingredients of Compound Shexiang Huangqi Dropping Pills in normal rats and rats with cerebral-ischemia reperfusion injury

LI Dong-hong1, XU Cui-shan1, HAN De-en1, WANG Meng-yan1, ZHANG Yun-ke2, JIA Yong-yan1, 3

1. Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China 2. School of Rehabilitation Medicine, Henan University of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China 3. Henan Research Center for Special Processing Technology of Chinese Medicine, Zhengzhou 450046, China

To study the effects of seven active components (-ligustilide, formononetin, verbasin, formononetin, verbasin glucoside, amygdalin, and paeoniflorin) in Compound Shexiang Huangqi Dropping Pills (復方麝香黃芪滴丸) in normal rats and rats with cerebral-ischemia reperfusion injury, and explore its difference in the pharmacokinetics.The plasma of SD rats was collected at different time points after ig Compound Shexiang Huangqi Dropping Pills, plasma concentrations were determined by ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole/electrostatic field orbitrap high-resolution mass spectrometry (UHPLC-Q-Orbitrap HRMS). Kinetica 5.1 pharmacokinetic software was used to calculate the pharmacokinetic parameters of seven components in each administration group, and SPSS One-way ANOVA was used to analyze whether there was a significant difference of pharmacokinetic parameters in normal rats and rats with cerebral ischemia-reperfusion injury after ig low-, medium-and high-dose Compound Shexiang Huangqi Dropping Pills.Some pharmacokinetic parameters of seven bioactive components were significantly different between normal rats and rats with cerebral ischemia-reperfusion injury. Compared with normal group, peak concentration (max) of-ligustilide at each dose was significantly increased, area under the curve (AUC) was significantly increased at low-dose; AUC of mullein, mullein glucoside, amygdalin and paeoniflorin were decreased; Half-life of mullein and mullein glucoside were increased.It lays a foundation for further exploring the mechanism of Compound Shexiang Huangqi Dropping Pills in the treatment of cerebral ischemia, and provides a reference for formulating scientific and rational drug use strategies in clinical practice.

Compound Shexiang Huangqi Dropping Pills; cerebral-ischemia reperfusion injury; pharmacokinetics;-ligustilide; formononetin; verbasin; formononetin; verbasin glucoside; amygdalin; paeoniflorin

R285.61

A

0253 - 2670(2022)15 - 4746 - 09

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.15.018

2022-02-21

國家自然科學基金資助項目（81974564）；中原英才計劃—科技創新領軍人才項目（224200510027）；河南省高等學校重點科研項目（20B360003）；河南中醫藥大學校級科研項目（2019KYCX019）

李東紅，碩士研究生，研究方向為藥物制劑新劑型、新技術及新藥。E-mail: 1923598428@qq.com

通信作者：賈永艷，教授，研究方向為藥物制劑新劑型、新技術及新藥。E-mail: hnzyjyy@126.com

張運克，教授，研究方向為中醫藥防治腦血管病。E-mail: henanzyk@126.com

[責任編輯 李亞楠]