膠質母細胞瘤組織RBM8A表達與病人預后及替莫唑胺化療敏感性的關系

王張立 吳曉旭 崔 陽 王丹妹 包春艷

膠質母細胞瘤（glioblastoma multiforme，GBM）是顱內常見的惡性腫瘤，易復發，預后差，平均生存時間僅17 個月左右。腫瘤增殖快、侵襲性強及高耐藥性是GBM 預后差的主要原因。近年來，探索GBM 的生物學標志物成為研究的熱點。RBM8A 是高度保守的RNA結合基序（RNA inding motif，RBM）家族成員之一，在無義介導的mRNA 降解（nonsense-mediated mRNA decay，NMD）、基因的可變剪接、細胞周期調控等過程中起重要作用。研究發現，RBM8A 可以調控信號轉導及轉錄激活蛋白3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）通路、核轉錄因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）信號通路和MAPKs 通路等，參與多種腫瘤的發生、發展。本文探討GBM 組織RBM8A 表達與病人預后及替莫唑胺（temozolomide，TMZ）化療敏感性的關系。

1 資料與方法

1.1 標本來源 選取2015 年6 月至2020 年6 月手術切除的、經術后病理確診的130例GBM組織，其中男78 例，女52 例；年齡20～77 歲，平均（55.01±10.02）歲。術前均未接受放/化療。130 例種，78 例術后接受替TMZ化療。選取顱腦損傷減壓術中切取的非腫瘤腦組織20 例為對照，其中男12 例，女8 例；年齡29～58歲，平均（54.88±8.97）歲。

1.2 免疫組化染色檢測組織RBM8A 的表達10%甲醛溶液固定標本，石蠟包埋并制備切片（4 μm）。根據免疫組化試劑盒（北京索萊寶科技有限公司）說明書進行操作。先脫蠟，隨后用檸檬酸鈉抗原修復液進行抗原修復，再用封閉液封閉2 h。加入兔抗人RBM8A（1:500，上海柯雷生物科技有限公司）溫室孵育2 h，PBS 洗滌2 次，加入二抗。DAB 顯色、蘇木精復染，顯微鏡下觀察RBM8A 表達（圖1）。每張切片隨機選擇5個高倍鏡（×200）視野觀察。染色評分由染色強度評分（無著色0 分、淺棕色1 分、中棕色2分、深棕色3分）和染色細胞百分比評分（無染色為0分；<25%為1 分；25%～75%為2 分；>75%為3 分）相乘得出，4～9分為高表達。

圖1 免疫組化染色檢測組織RBM8A 表達（EnVision 二步法，×200）

1.3 術后隨訪 術后進行門診和電話隨訪，隨訪截止2021 年6 月，隨訪時間3～50 個月，中位隨訪時間為12個月。記錄病人腫瘤復發、生存情況。

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0軟件分析；采用單因素和多因素Cox 回歸模型分析生存預后的影響因素；生存曲線分析RBM8A表達水平與TMZ化療敏感性的關系；

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<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 GBM 組織RBM8A 的 表達GBM 組織RBM8A 高表達率[86.15%（112/130）]明顯高于對照組[20%（4/20）；

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<0.05]。2.2 GBM 病人生存預后的影響因素 隨訪期間死亡98例，失訪2例。單因素Cox回歸分析顯示，年齡、術前KPS評分、腫瘤切除程度、術后TMZ化療、RBM8A表達水平與GBM 病人預后有關（

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<0.05）。多因素Cox 回歸分析顯示，年齡≥60 歲、術前KPS 評分<80分、腫瘤未全切除、術后未行TMZ化療、RBM8A高表達是GBM 生存預后不良的獨立危險因素（

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<0.05）。見表1。

表1 本文130例膠質母細胞瘤生存預后的Cox比例風險回歸模型分析

危險因素年齡（≥60歲/<60歲）性別（男/女）腫瘤直徑（>3 cm/≤3cm）術前KPS評分（<80分/≥80分）腫瘤切除程度（未全切除/全切除）替莫唑胺化療（否/是）RBM8A（高表達/低表達）單因素風險比1.212 1.118 1.241 1.523 1.259 2.970 1.782 95%置信區間1.055～1.821 0.692～1.500 0.537～1.672 1.149～3.213 1.014～2.230 1.723～6.034 1.605～2.512 P值0.005 0.813 0.527 0.002 0.024<0.001 0.007多因素風險比1.205 95%置信區間1.036～2.452 P值0.008 1.457 1.520 2.105 1.251 1.026～2.124 1.102～2.561 1.674-4.562 1.412～3.471<0.001<0.001 0.006 0.005

2.3 RBM8A 表達與GBM 病人生存預后及TMZ 化療敏感性的關系 生存曲線分析顯示，RBM8A 高表達GBM 病人中位無復發生存時間和中位總生存時間明顯低于低表達病人（

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<0.05）。RBM8A 低表達GBM病人中，術后TMZ化療病人無復發生存時間明顯高于未化療病人（

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<0.05），術后TMZ 化療病人總體生存時間明顯高于未化療病人（

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<0.05）。RBM8A高表達GBM病人，TMZ化療與病人無復發生存時間和總生存時間無明顯關系（

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>0.05）。見圖2。

圖2 生存曲線分析RBM8A表達與膠質母細胞瘤病人生存預后及替莫唑胺化療敏感性的關系

3 討論

RBM8A 基因位于人染色體1q21.1，是高度保守的RBM 蛋白家族成員之一。研究發現RBM8A 參與RNA 的轉錄翻譯、細胞凋亡調控及細胞周期調控。NMD 是一種mRNA 監控機制，可防止有害蛋白質的產生。抑癌基因在轉錄過程中容易產生無義mRNA，引發NMD，進而導致抑癌基因的翻譯提前終止，最終導致腫瘤的發生。由于RBM8A是NMD過程中所必須的蛋白，因此RBM8A可能參與腫瘤的發生、發展。研究發現RBM8A與肝細胞癌和胃癌等發生、發展有關。RBM8A參與腫瘤形成的機制尚未完全明確，可能與RBM8A 調控STAT3 通路、NF-κB信號通路、MAPKs通路和P53信號通路等有關。有研究發現，GBM 組織RBM8A 高表達，通過Notch/STAT3信號通路促進腫瘤細胞增殖和侵襲。

GBM 預后受多種因素的影響。本文多因素分析顯示TMZ化療和RBM8A表達水平是GNM病人預后密切相關。研究發現，RBM8A與多種腫瘤的不良生存預后有關。本文也發現RBM8A高表達病人的無復發生存時間及總體生存時間均模型低于低表達病人。有報道顯示，RBM8A 與化療敏感性有關，例如奧沙利鉑。TMZ 是廣譜抗腫瘤藥物，可以通過血腦屏障。GBM 病人在放療基礎上聯合應用TMZ，可以提高存活率。但是，有些GBM病人并未從TMZ治療中獲益。本文發現，對于RBM8A低表達病人，TMZ 化療病人無復發生存時間和總體生存時間均明顯高于未化療病人；但是對于RBM8A高表達病人，TMZ 化療并不會影響病人的無方法生存時間和總體生存時間。這提示RBM8A 對預測TMZ 的療效有一定價值。

綜上所述，RBM8A 高表達與GBM 病人不良生存預后及TMZ化療敏感性有關。