硫磺菌培養料原料篩選及配方優化試驗

張園園 丁 建 張 晶 王 勇 李 悅 樊玉萍 韓寶康 周高新

（1陜西省安康市農業科學研究所，陜西安康 725021；2陜西省長青林業局，陜西漢中 723000；3 陜西省咸陽市農業科學研究院，陜西咸陽 712000）

硫磺菌Laetiporus cremieporus，又名雞冠菌、鮭魚菌，隸屬擔子菌門Basidiomycota、傘菌亞綱Agaricomycetes、多孔菌目Polyporales、擬層孔菌科Fomitopsidaceae、硫磺菌屬Laetiporus，是一種食藥兼用的野生珍稀真菌，具有較高的營養價值和藥用價值[1-2]。硫磺菌主要生長在落葉松等針葉、櫟樹等闊葉樹干的基部，會引起樹干基部腐朽，產生塊狀褐色。硫磺菌菌蓋肉質呈扇形至半圓形，大部分重疊生長，直徑可達30~40 cm，單個菌蓋直徑達5~20 cm，厚度1~2 cm；菌蓋顏色為鮮朱紅色或帶黃的朱紅色[3]。硫磺菌主要分布于我國新疆、西藏、四川、陜西、河北、福建等省區，屬于中、低溫型菌類。大量研究表明，硫磺菌具有抗腫瘤、增強人體免疫力等功效[4-5]?；诖?，硫磺菌栽培研究顯得尤為重要。

關于硫磺菌生理特性、深層培養、活性成分等研究已有報道[6-10]，但有關栽培硫磺菌的培養料研究較少。因此，筆者通過引入菌絲生長指數的概念[11]和偏相關分析方法，全面考察硫磺菌菌絲生長速度、產量及生物學效率，篩選出適宜的培養料原料及優化配方，以期為硫磺菌的人工馴化栽培研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試硫磺菌菌株LS-AK405，由安康市農科院食用菌研究所提供，現保藏于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為CGMCC No.18155。

1.2 供試培養料

供試原料：7 種主料為木屑、玉米芯、玉米稈、麥稈、谷殼、棉籽殼、葛根渣，3 種輔料為玉米粉、豆粕、麩皮。主料篩選試驗時，輔料為麩皮，主輔料比例為4∶1；輔料試驗時，主料為木屑，主輔料比例為4∶1。

1.3 試驗方法

1.3.1 硫磺菌培養料原料篩選

分別稱取供試培養料100 g，放入盒內，用清水浸泡，使其充分吸收水分后，裝入直徑為90 mm的培養皿中，高壓滅菌1 h，冷卻至室溫后，接種一粒麥粒菌種于裝有培養料的培養皿中央，置（18±2）℃恒溫箱中暗培養。每個處理重復3 次。采用劃線培養法，每隔1 d 標記一次菌落直徑，培養6 d。最后，利用十字交叉法測定菌落直徑，對其菌絲長勢進行評分，并計算菌絲生長速度和菌絲生長指數。菌絲長勢評分標準：5 分代表菌絲長勢濃密，顏色為橙黃色；4分代表菌絲長勢較濃密，顏色橙黃色；3分代表菌絲長勢較濃密，顏色淡黃色；2 分代表菌絲長勢較稀疏，顏色淡黃色；1 分代表菌絲長勢稀疏，顏色淡黃色。

1.3.2 配方優化試驗

根據1.3.1篩選得到的主料和輔料進行配比，配方優化設計見表1。

表1 硫磺菌培養料配方優化設計 單位：%

母種、原種和栽培種按照常規方法制備[12]。采用規格為17 cm×58 cm×0.006 cm 的耐高溫聚乙烯折角塑料袋裝料，每袋裝料量折合干料1.2 kg。料袋高壓滅菌（121 ℃，2.5 h），待料溫冷卻后接栽培種。每個配方100 袋。接種后料袋置16~18 ℃培養室避光培養，空氣相對濕度60%~65%，每天通風換氣，保證培養室內空氣新鮮。菌絲滿袋后移入出菇棚，采用層架式出菇方式。出菇溫度18~20 ℃，空氣相對濕度85%~90%。待子實體邊緣變薄，菌蓋邊緣呈現波浪狀即可采收。

1.4 數據處理

由于硫磺菌對培養料有較強的選擇性，使其在不同培養料上菌絲長勢及菌絲生長速度有較明顯差異。為了便于比較，引入菌絲生長指數[11]概念。

菌絲生長指數=菌絲長勢評分×菌絲生長速度（mm/d）。碳氮比[13]=（碳源物質中的C+氮源物質中的C）/（碳源物質中N+氮源物質中的N）。

采用Microsoft Excel 2003、SPSS 軟件對試驗數據進行統計分析。

2 結果與分析

2.1 硫磺菌培養料原料篩選結果

由表2 和圖1 可以看出，硫磺菌在7 種主料和3種輔料培養基上均可生長。但在不同培養基上，菌絲長勢評分、生長速度及生長指數差異明顯。分別以谷殼、木屑為主料時，硫磺菌菌絲長勢評分較高，以葛根渣為主料時，菌絲長勢評分最低；以玉米粉為輔料時，菌絲長勢評分較高。分別以7 種主料培養硫磺菌時，菌絲生長快慢為谷殼＞棉籽殼＞麥稈＞玉米芯＞木屑＞玉米稈＞葛根渣；以3種輔料培養硫磺菌時，菌絲生長快慢為玉米粉＞麩皮＞豆粕。從菌絲生長指數來看，硫磺菌菌絲生長較佳的主料為谷殼、木屑、棉籽殼，最佳輔料為玉米粉。

表2 供試配方硫磺菌長勢、產量及生物學效率

表2 供試原料對硫磺菌菌絲生長的影響

圖1 硫磺菌菌絲生長情況

由表3可知，在不進行變量控制的情況下，菌絲長勢評分與菌絲生長速度呈正相關，與菌絲生長指數呈強正相關；控制變量為菌絲長勢評分時，菌絲生長速度與菌絲生長指數呈強正相關；控制變量為菌絲生長速度時，菌絲長勢評分與菌絲生長指數也呈強正相關。

表3 不同指標間偏相關分析研究

2.2 配方優化試驗結果

由表4可知，供試配方對硫磺菌菌絲長勢、產量及生物學效率影響較大。配方4 菌絲滿袋時間最短，為28 d，其次是配方5，為29 d；配方5和配方6菌絲長勢評分最高，其次是配方4；配方6 的袋均產量最高，為0.92 kg，但與配方5（0.89 kg）差異不顯著。配方5、配方6 的生物學效率較高，且兩者差異不顯著。綜合各項指標，選擇配方5為最佳配方，培養料最佳碳氮比為（70~80）∶1。

3 小結

硫磺菌對供試10 種原料（7 種主料、3 種輔料）均能利用，但在不同主料和輔料培養基上，菌絲生長情況差異較大。從菌絲生長指數來看，谷殼培養基最佳，其次是木屑、棉籽殼，葛根渣不適合用作栽培硫磺菌原料。這是因為添加谷殼可以增加培養基松散度，料有一定的空隙增加含氧量，所以有利于菌絲的生長，但考慮原料持續性營養供給特性，選擇木屑和棉籽殼為最佳栽培原料，最佳輔料為玉米粉。通過對木屑和棉籽殼的配比進行優化，結果表明硫磺菌栽培的最佳配方為木屑70%，棉籽殼20%，玉米粉8%，石灰1%，石膏1%（配方5），培養料最佳碳氮比為（70~80）∶1。碳氮比是指食用菌原料配制時碳元素和氮元素的總量之比。碳素或氮素過低，會導致營養供給不足，影響產量；碳素或氮素過多，不但造成浪費，還會因碳氮比不適宜影響出菇，也會導致病蟲害發生。因此，適宜的碳氮比是提高硫磺菌產量的關鍵因素。