CD138在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義

白 雪，程 珍，嚴(yán) 敏，潘湘濤

（蘇州大學(xué)附屬太倉(cāng)醫(yī)院，江蘇 太倉(cāng) 215400）

彌漫大B 細(xì)胞淋巴瘤（Diffuse large B-cell lymphoma，DLBCL）是一類侵襲性高、異質(zhì)性強(qiáng)的淋巴瘤。國(guó)際預(yù)后指數(shù)（International prognostic Index，IPI）是目前臨床上評(píng)估DLBCL 患者預(yù)后最重要的指標(biāo)。近期有研究發(fā)現(xiàn)，包括CD138 在內(nèi)的一系列新型指標(biāo)進(jìn)一步從蛋白水平判斷了分子亞型在DLBCL患者治療及生存方面的作用，具有一定的臨床指導(dǎo)意義「1-3］。CD138 又稱多配體聚糖1，是Syndecans家族成員之一，其余3 位成員分別是Syndecan-2、Syndecan-3、Syndecan-4， 目 前 研 究 最 多 的 是CD138/Syndecan-1。CD138 表達(dá)于正常淋巴細(xì)胞的不同階段，主要表達(dá)于抗原活化的B 細(xì)胞，預(yù)示著B 細(xì)胞處于向漿細(xì)胞方向分化的終末階段，包括免疫母細(xì)胞、漿母細(xì)胞和漿細(xì)胞。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，CD138在淋巴瘤中也有表達(dá)[4]，甚至在乳腺癌、胃腸道腫瘤等實(shí)體腫瘤中也有表達(dá)的報(bào)道[5-6]。但關(guān)于CD138 的實(shí)際陽(yáng)性率及其臨床意義并不十分明確，特別是在DLBCL 中有關(guān)CD138 表達(dá)的研究較少。因此，本研究應(yīng)用免疫組化（IHC）技術(shù)檢測(cè)了94 例淋巴瘤患者病變組織中CD138 的表達(dá)，并對(duì)其中的60 例DLBCL患者進(jìn)行了相關(guān)臨床生物學(xué)及預(yù)后分析，以期深入了解CD138 在DLBCL 中的表達(dá)特點(diǎn)及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 基線資料

選取2010 年7 月至2020 年1 月期間蘇州大學(xué)附屬太倉(cāng)醫(yī)院收治的淋巴瘤患者94 例作為研究對(duì)象，其中DLBCL 患者有60 例。在60 例DLBCL 患者中，有男32 例，女28 例；其年齡為23 ～86 歲，平均年齡為63.5 歲。這些患者的病情均經(jīng)組織病理學(xué)檢查、免疫組化分析等得到確診。淋巴瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)采用2016 年修訂的第4 版WHO 淋巴瘤分類標(biāo)準(zhǔn)，淋巴瘤的分期診斷采用2014 年Lugano 會(huì)議修訂的標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 方法

1.2.1 CD138 在淋巴瘤中的表達(dá)對(duì)94 例淋巴瘤患者進(jìn)行IHC 檢測(cè)，以了解CD138 在淋巴瘤中的表達(dá)情況，嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行各項(xiàng)檢測(cè)操作。

1.2.2 CD138 的表達(dá)與DLBCL 的關(guān)系將60 例DLBCL患者根據(jù)CD138 的表達(dá)情況分為CD138 陽(yáng)性組和CD138 陰性組，分析CD138 的表達(dá)與患者的年齡、性別、臨床分期、淋巴瘤癥狀分組、IPI 及血液學(xué)指標(biāo)、預(yù)后等臨床生物學(xué)特征的關(guān)系。

1.2.3 IHC 實(shí)驗(yàn)方法 1）將標(biāo)本置于防脫載玻片（ZLI-9506）上，石蠟切片3μm。2）72℃烤片1h。3）二甲苯脫蠟2 ～3 缸，10min/ 每缸，梯度酒精100%、100%、95%、75%，2min/ 每缸。4）PBS 清洗5 次，2min/ 次（PBS 中加入1‰的Tween 20）。5）高壓修復(fù)：高壓鍋內(nèi)預(yù)熱修復(fù)液，沸騰后將置于塑料染色架上的玻片放入修復(fù)液中，必須完全覆蓋組織，待限壓閥轉(zhuǎn)動(dòng)噴氣后開始計(jì)時(shí)2.5min，計(jì)時(shí)的同時(shí)將電磁爐從高火調(diào)至中火，計(jì)時(shí)結(jié)束后離開熱源，冷水沖涼至室溫，注意不要將冷水注入高壓鍋內(nèi)。6）PBS 清洗3 ～5 次，2min/每次（PBS 中加入1‰的Tween 20）。7）加入3% 的過氧化氫，室溫孵育10min。8）用蒸餾水清洗干凈，用PAP 筆畫圈（畫圈時(shí)離組織2 ～3mm）。9）PBS 清洗3 ～5 次，2min/ 次（PBS 中加入1‰的Tween 20）。10）滴加適量一抗，37℃1 h（加一抗時(shí)需將切片上的水甩干凈，注意不能干片）。11）PBS清洗3 ～5 次，2min/ 次（PBS 中加入1‰的Tween 20）。12）滴加適量的一步法檢測(cè)系統(tǒng)（PV-8000/6000，37℃ 30min，加二抗時(shí)需將切片上的水甩干凈，注意不能干片）。13）PBS 清洗3 ～5 次，2min/ 次。14）二管DAB（ZLI-9018）顯色，現(xiàn)配現(xiàn)用，6 ～8min，不需鏡下控制顯色，自來水終止并沖洗3 ～5min。15）蘇木素復(fù)染，切忌復(fù)染顏色過深（根據(jù)蘇木素的新舊調(diào)整復(fù)染時(shí)間）。16）自來水沖洗。17）鹽酸酒精分化（根據(jù)蘇木素復(fù)染的情況靈活掌握時(shí)間）。18）根據(jù)實(shí)際情況，可選用已使用過的EDTA pH8.0 修復(fù)液返藍(lán)3 ～5min，流水沖洗3 ～5min。19）逐級(jí)梯度酒精脫水，二甲苯透明、中性樹膠封片。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察CD138 在淋巴瘤中的表達(dá)情況。觀察CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者臨床特征、血液學(xué)指標(biāo)及預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 23.0 軟件對(duì)本研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，根據(jù)資料的性質(zhì)分別采用t檢驗(yàn)、F檢驗(yàn)（包括組與組之間的q檢驗(yàn)）和χ2 檢驗(yàn)，相關(guān)性分析及Kaplan-Meier 生存曲線與log-rank 檢驗(yàn)應(yīng)用Pearson相關(guān)分析法，P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD138 在淋巴瘤中的表達(dá)情況

94 例淋巴瘤患者CD138 的陽(yáng)性率為25.5%（24/94），其中B 細(xì)胞淋巴瘤患者CD138 的陽(yáng)性率為28.2%（22/78），T 細(xì)胞淋巴瘤患者CD138 的陽(yáng)性率為12.5%（2/16 例）。在94 例淋巴瘤患者中，DLBCL患者CD138 的陽(yáng)性率為25.0%（15/60），其他B 細(xì)胞淋巴瘤患者CD138 的陽(yáng)性率為38.9%（7/18 例）。在94 例淋巴瘤患者中，DLBCL 患者與其他B 細(xì)胞淋巴瘤患者CD138 的陽(yáng)性率相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.32，P＞0.05）。CD138 在DLBCL 組 織 中 陰性和陽(yáng)性的表達(dá)情況分別見圖1 和圖2。

圖1 CD138 呈陰性表達(dá)（×400）

圖2 CD138 呈陽(yáng)性表達(dá)（×400）

2.2 CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者臨床特征的關(guān)系

CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者的年齡、性別、臨床分期、淋巴瘤癥狀分組、IPI、是否為GCB 亞型無(wú)關(guān)（P ＞0.05）。在60 例DLBCL 患者中，CD138 陽(yáng)性患者的結(jié)外病灶多于CD138 陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。詳見表1。

表1 CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者臨床特征的關(guān)系[例（%）]

2.3 CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者血液學(xué)指標(biāo)的關(guān)系

在60 例DLBCL 患者中，CD138 陽(yáng)性患者Hb 和ALB 的水平均明顯低于CD138 陰性患者，CRP 的水平和RDW-CV 則明顯高于CD138 陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；CD138 陽(yáng)性患者與CD138陰性患者其余各項(xiàng)血液學(xué)指標(biāo)相比則均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均＞0.05）。詳見表2。

表2 CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者血液學(xué)指標(biāo)的關(guān)系（±s）

表2 CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者血液學(xué)指標(biāo)的關(guān)系（±s）

注：Hb 為血紅蛋白，RDW-CV 為紅細(xì)胞體積變異系數(shù)，WBC 為白細(xì)胞計(jì)數(shù)，N 為中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，LY 為淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)，M 為單核細(xì)胞計(jì)數(shù)，PLT為血小板計(jì)數(shù)，CRP 為C 反應(yīng)蛋白，ALB 為白蛋白，LDH 為乳酸脫氫酶，β2-MG 為β2- 微球蛋白，CEA 為癌胚抗原，CA125 為糖鏈抗原125，D-D為D-二聚體；* 代表P ＜0.05，** 代表P ＜0.01，其余均為P ＞0.05。

檢測(cè)項(xiàng)目 CD138 陽(yáng)性 CD138 陰性 t 值Hb（g/L） 107.93±16.71 121.38±23.48 2.0202*RDW-CV（%） 15.08±3.55 13.63±1.37 2.3023*WBC（×109/L） 5.93±3.27 6.40±2.27 0.6183 N（×109/L） 4.23±2.71 4.35±2.19 0.1731 LY（×109/L） 1.05±0.44 1.37±0.63 1.8120 M（×109/L） 0.52±0.33 0.53±0.31 0.1062 PLT（×109/L） 266.93±8275 221.16±89.68 1.2228 CRP（mg/L） 53.25±35.37 26.39±17.71 2.9921**ALB（g/L） 34.58±6.27 38.18±5.01 2.2609*LDH（U/L） 309.91±35.31 292.42±57.71 0.3198 β2-MG（mg/L） 3.45±2.09 2.77±1.72 0.3301 CEA（U/L） 2.40±1.56 1.19±1.02 1.0703 CA125（U/mL） 58.30±57.88 50.66±45.99 0.1659 D-D（mg/L） 1.33±0.98 1.45±1.40 0.2385

2.4 CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者預(yù)后的關(guān)系

在60 例DLBCL 患者中，CD138 陰性患者的中位生存時(shí)間為20.5 個(gè)月，明顯高于CD138 陽(yáng)性患者的13.2 個(gè)月（P=0.029）。詳見圖3。

圖3 CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者預(yù)后的關(guān)系（P=0.029）

3 討論

既往有關(guān)CD138 的研究主要是集中在多發(fā)性骨髓瘤等漿細(xì)胞疾病的診斷和預(yù)后方面，而在DLBCL中的研究鮮有報(bào)道，且認(rèn)為幾乎是不表達(dá)的[7-9]。但更多的研究證實(shí)CD138 在DLBCL 中確實(shí)是有表達(dá)的，如Tzankow 等[10]報(bào) 道CD138 在DLBCL 中 的 陽(yáng)性率為17%。本研究發(fā)現(xiàn)，CD138 在各種B 細(xì)胞淋巴瘤中均有不同程度的表達(dá)，甚至在個(gè)別T 細(xì)胞淋巴瘤中也有表達(dá)。我們發(fā)現(xiàn)CD138 在DLBCL 中的陽(yáng)性率為25.0%（15/60），略高于張宏偉等[5]報(bào)道的15.1%。而郭新建等[11]報(bào)道GCB-DLBCL 中CD138的 陽(yáng) 性 率 為15.1%（8/53）、non-GCB 中CD138 的陽(yáng)性率為14.2%（7/90）。上述報(bào)道中CD138 陽(yáng)性率的不同可能與IHC 檢測(cè)技術(shù)、陽(yáng)性值判斷標(biāo)準(zhǔn)存在差異有關(guān)，也可能與病例數(shù)的多少及相關(guān)研究文章的時(shí)間跨度等有關(guān)。但總的說來，DLBCL 中確實(shí)有CD138 表達(dá)。本研究中我們發(fā)現(xiàn)CD138 在DLBCL中的表達(dá)僅與患者有無(wú)結(jié)外部位累及有關(guān)，而與其性別、年齡、臨床分期、淋巴瘤癥狀分組、IPI 及是否為GCB 亞型無(wú)關(guān)。該結(jié)果與郭新建等[11]的報(bào)道基本一致。在血液學(xué)指標(biāo)方面，本研究中CD138 陽(yáng)性患者Hb 和ALB 的水平均明顯低于陰性患者，而CRP 和RDW-CV 均明顯高于CD138 陰性患者。說明CD138 陽(yáng)性患者機(jī)體的炎癥反應(yīng)更為嚴(yán)重。既往的研究證實(shí)，炎癥狀態(tài)下CRP 的升高一方面可導(dǎo)致鐵調(diào)素（Hepcidin）的表達(dá)升高，使機(jī)體對(duì)鐵失利用，從而引起貧血，另一方面還可不同程度地?fù)p害機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)狀況，表現(xiàn)為ALB 降低，而ALB 降低又會(huì)影響Hb的水平，導(dǎo)致患者預(yù)后不良[12-15]。雖然早期有研究認(rèn)為CD138 的表達(dá)對(duì)DLBCL 患者預(yù)后的預(yù)測(cè)意義不大[5]，但更多的研究證實(shí)CD138 是DLBCL 患者預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子[4,16]。張素芳等[6]對(duì)83 例DLBCL 患者進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，CD138 陰性是患者預(yù)后良好的獨(dú)立保護(hù)因素。郭新建等[11]報(bào)道指出，DLBCL 患者表達(dá)CD138 是導(dǎo)致其生存期縮短的危險(xiǎn)因子（OR=1.399，95%CI 為1.022 ～1.914，P＜0.05）。本研究的結(jié)果表明，CD138 陽(yáng)性患者的預(yù)后較CD138 陰性患者差（二者的中位生存時(shí)間分別為13.2 個(gè)月和20.5 個(gè)月，P＜0.05）。另外我們還發(fā)現(xiàn)CD138 在GCB 亞型與非GCB 亞型患者中均有表達(dá)，且無(wú)明顯區(qū)別，這與相關(guān)文獻(xiàn)[11]報(bào)道的結(jié)果相一致。

由于本研究為單中心研究，且病例數(shù)偏少，時(shí)間跨度較長(zhǎng)，因此研究結(jié)果可能存在一定程度的偏倚，但部分DLBCL 患者確實(shí)表達(dá)CD138，且CD138 的表達(dá)與DLBCL 患者的預(yù)后有關(guān)。因此今后值得進(jìn)一步擴(kuò)大病例數(shù)、改進(jìn)檢測(cè)技術(shù)，以期進(jìn)一步明確CD138在DLBCL 中的確切表達(dá)情況及臨床意義，從而更好地指導(dǎo)臨床治療。