嶺南排石口服液研制與刺桐堿含量測定的研究

劉群娣，萬 頌，蘇馨科，歐陽霄妮，黃俊明，李冬利，鄭小吉

（1. 廣東江門中醫藥職業學院南藥學院，廣東 江門 529000 ；2. 廣州市花都區人民醫院泌尿外科，廣東 廣州510800 ；3. 五邑大學生物科技與大健康學院，廣東 江門 529000）

嶺南排石口服液是以全國老中醫藥專家學術繼承工作指導老師、廣東省第二批名中醫師承項目指導導師余伯亮主任中醫師家傳經驗方“嶺南排石湯”為原方，并由廣東首屆職教名師、廣東江門中醫藥職業學院鄭小吉主任中藥師采用現代科學工藝研制而成，用于臨床多發結石癥的治療。嶺南排石口服液以牛大力、布渣葉、廣東土牛膝等為原料，其中牛大力為君藥。牛大力為豆科植物美麗崖豆藤Millettia speciosa Champ. 的干燥根，是嶺南常用的“藥食同源”藥材，其味甘、性平，具有補虛潤肺、補骨、強筋活絡的功效。刺桐堿、高麗槐素是嶺南排石口服液中主要的藥效成分[1-2]，且常被用作評價牛大力質量優劣的指標[3]。本文介紹了嶺南排石口服液的制備工藝，并以色譜圖中的主要色譜峰、牛大力的主要藥效成分刺桐堿為指標性成分，建立嶺南排石口服液中刺桐堿含量測定的簡便方法，用以對嶺南排石口服液進行質量控制。

1 儀器與試藥

ACQUITY UPLC H-Class PLUS 型高效液相色譜儀，配Empower 色譜工作站（購自上海Waters 科技有限公司）；ML204T 型電子分析天平（購自上海METTLER TOLEDO 儀器有限公司）。牛大力、布渣葉、廣東土牛膝等藥材均購自國藥控股國大藥房江門連鎖有限公司，并經廣東江門中醫藥職業學院鄭小吉教授鑒定為正品。嶺南排石口服液（批號：2021091701，2021091702，2021091703 ；規格：50 mL）；對照品刺桐堿（批號：P20A10U95634，含量：98%），購自上海源葉生物科技有限公司；甲酸為分析純，乙腈、甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 取干燥至恒重的刺桐堿對照品約1 mg，精密稱定后用50% 的甲醇溶解，制得質量濃度為62.50 μg/mL 的對照品溶液。精密吸取上述溶液，用50% 的甲醇進行逐級稀釋，即得到不同質量濃度的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液的制備 取嶺南排石口服液5 m L，置于50 mL 的容量瓶中，加50% 的甲醇定容至刻度，搖勻后經微孔濾膜過濾，即制得供試品溶液。

2.2 色譜條件

色譜柱：ACQUITYUPLCBEHC18（2.1mm×100mm，1.7μm）；流動相：0.1%甲酸水（A）-乙腈（B），梯度洗脫；檢測波長：278nm；流速：0.300mL/min；進樣體積：1μL；柱溫：30℃。梯度洗脫流動相比例見表1。

表1 梯度洗脫流動相比例

2.3 專屬性試驗

取對照品溶液、供試品溶液進樣分析，以50%的甲醇溶液為陰性對照溶液，結果見圖1。供試品溶液（圖1-C）與對照品溶液（圖1-A）的色圖譜中保留時間為2.8min 處有相同色譜峰，且紫外吸收光譜圖一致，而陰性對照溶液（圖1-B）在此處無色譜峰。表明該檢測方法的專屬性好。

圖1 對照品溶液（A）、陰性對照溶液（B）及嶺南排石口服液供試品（C）的典型色譜圖

2.4 線性與范圍考察

取不同質量濃度的對照品溶液，按上述色譜條件進樣，記錄峰面積。以峰面積積分值對對照品溶液的進樣量進行回歸分析，以濃度（μg/mL）為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程：y= 4393x+3680.7（r=0.9999）。結果表明，刺桐堿的進樣濃度在0.10 ～62.5 μg/mL 之間時，與峰面積的值呈現良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取對照品溶液，按“2.2”項下的色譜條件連續進樣6 次，記錄峰面積。峰面積的相對標準偏差（RSD）均為0.07%（n=6），均小于2%，表明該檢測方法的精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一份供試品溶液，在室溫下分別放置0h、2h、4h、8h、12h、24h 后，進樣分析，記錄峰面積。峰面積的RSD 為0.39%，表明供試品溶液在24 h 內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批嶺南排石口服液（批號：2021091701），按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，并平行分為6 份，按“2.2”項下的色譜條件進樣分析，記錄峰面積。結果顯示RSD 為1.30%（n=6），表明該檢測方法的重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取已知含量的嶺南排石口服液（ 批號：2021091701）約0.05mL，平行分為6 份，分別加入上述對照品溶液適量，按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，并按“2.2”項下的色譜條件進樣分析，計算回收率。結果顯示加樣回收率為1.86%。詳見表2。

表2 加樣回收率試驗（n=6）

2.9 樣品含量測定

取嶺南排石口服液3 批，按“2.1.2”項下的方法制備供試品溶液，并按“2.2”項下的色譜條件進樣分析測定，計算樣品中刺桐堿的含量。結果見表3。

表3 三批嶺南排石口服液中刺桐堿含量（μg/mL）

3 嶺南排石口服液的制備工藝

通過研究，確定嶺南排石口服液的現代科學制備工藝流程。按驗方配比準備藥材原材料，按液料比3:1的比例加水煎煮2 次，第1 次煎煮120 min，第2 次煎煮80 min。合并兩次煎煮濾液，濃縮至液料比為1:1的濃縮液體積，靜置離心后取上清液，補液至液料比為1:1，即得嶺南排石口服液。制備工藝經藥廠試生產，通過樣品測定，發現以該工藝條件制備的成品穩定性較好。

4 討論

4.1 指標成分的選擇

根據處方組成及配伍原則，并結合文獻報道，對嶺南排石口服液可能含有的有效成分進行預試驗，綜合考慮各組分在處方中的含量差異和出峰響應差異，兼顧該制劑整體質量評價操作的簡便性，確定以主要色譜峰——刺桐堿（牛大力）活性成分作為質量控制的指標。

4.2 色譜條件的考察

本研究考察了多種流動相體系（包括乙腈- 水、甲醇- 水、乙腈-0.1% 甲酸水溶液）。以甲醇- 水系統作為流動相時，出峰時間推遲，峰變寬；以乙腈-水、乙腈-0.1% 甲酸水溶液作為流動相時，出峰時間相當，乙腈-0.1% 甲酸水溶液中各組分分離度及色譜峰峰形更好。故本研究選用乙腈-0.1% 甲酸水溶液作為流動相。本研究采用二極管陣列檢測器對樣品中各主要組分進行全波長掃描，刺桐堿的最大吸收波長為278nm，干擾成分在此波長也有吸收峰，故最終選擇將278nm 作為檢測波長。

圖2 刺桐堿紫外吸收光譜圖

5 小結

本研究建立了嶺南排石口服液的研制方法，并采用UPLC 法快速測定嶺南排石口服液中刺桐堿的含量，對3 個批次樣品進行了含量測定，結果顯示刺桐堿的含量范圍為76.06 ～81.72 μg/mL，其含量范圍波動較小，說明該生產工藝和樣品質量均較為穩定。采用UPLC 法測定嶺南排石口服液中刺桐堿的含量具有方便、快速、準確等優點，為建立嶺南排石口服液的質量標準提供了實驗依據。挖掘名老中醫經驗方是振興中醫藥的重要途徑，嶺南排石口服液的研制，為中醫藥治療臨床多發結石癥提供了一種效高價廉、服用方便、毒副作用小的中藥制劑，為發掘開發名老中醫經驗方開辟了新途徑。