浸卵法測定甘肅省梨小食心蟲田間種群對8 種殺蟲劑的敏感性

劉月英, 周昭旭*,, 張美嬌, 曹利軍

(1. 甘肅省農業科學院 植物保護研究所/甘肅省農業害蟲天敵工程研究中心，蘭州 730070；2. 北京市農林科學院植物保護研究所，北京 100097)

梨小食心蟲Grapholita molesta(Busck)簡稱梨小，又名桃折梢蟲、東方蛀果蛾，是一種嚴重危害桃、梨等果樹的世界性蛀果類害蟲[1-2]，更是為害我國北方地區果樹生產的重要害蟲[3]，在多果樹混栽區發生為害尤為嚴重[4]。甘肅省由于充足的光熱資源，盛產梨、蘋果、桃、李、杏等多種水果，河西走廊已成為梨的重要栽培片區，但是，近年來梨小食心蟲危害嚴重，梨的產量損失達30%～70%以上。

梨小食心蟲作為一種鉆蛀性害蟲，整個幼蟲期均在果實或新梢中為害，而幼蟲期的化學防治難以發揮有效的作用，卵期和成蟲期是防治的關鍵時期[5-6]，其中卵期作為梨小食心蟲藥劑防治的關鍵時期之一，曾被廣泛推廣[7-8]。近些年，由于長期不合理、頻繁地使用化學農藥，導致梨小食心蟲已經產生了抗藥性[9]。為明確甘肅地區梨小食心蟲種群對常用化學與生物農藥的抗性水平，本研究采用浸漬法處理梨小食心蟲卵，對甘肅地區梨小食心蟲田間種群進行了殺蟲劑敏感性測定，以期為果園科學合理用藥防控梨小食心蟲及害蟲抗性治理提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 供試害蟲

梨小食心蟲G. molesta敏感品系來自西北農林科技大學植物保護學院，為室內長期飼養的梨小食心蟲種群，成蟲用體積分數為5%的蜂蜜水補充營養，幼蟲以人工飼料進行飼養，長期不接觸任何殺蟲劑。其他種群采集地和地理坐標見表1。室內用梨果飼養梨小食心蟲幼蟲，成蟲羽化后用5%的蜂蜜水補充營養，選取F1 代健壯飽滿、24 h以內所產的卵用于殺蟲劑敏感性測定。飼養條件為：溫度(26 ± 0.5)℃、相對濕度(RH) 60% ± 10%、光周期15 L : 9 D，光照度4 800 lx。

表1 梨小食心蟲種群采集地信息Table 1 Information on collection locations of G. molesta populations

1.2 供試藥劑

96%高效氯氟氰菊酯 (lambda-cyhalothrin) 原藥 (山東省青島凱源祥化工有限公司)，75%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽 (以下簡稱甲維鹽，emamectin benzoate) 原藥 (深圳諾普信農化股份有限公司)，95%阿維菌素 (abamectin) 原藥 (山東省青島翰生生物科技有限公司)，98%茚蟲威 (indoxacarb) 原藥 (深圳諾普信農化股份有限公司)，92%氯蟲苯甲酰胺 (chlorantraniliprole) 原藥 (山東濰坊潤豐化工股份有限公司)。

60 g/L 乙基多殺菌素懸浮劑 (spinetoram，SC)(美國陶氏益農公司)，25 g/L 溴氰菊酯乳油(deltamethyrin，EC) [ 興農藥業 (中國) 有限公司]，22.4% 螺蟲乙酯懸浮劑 (spirotetramat，SC) (上海悅聯化工有限公司)。

1.3 敏感性測定方法

1.3.1 藥劑配制 92%氯蟲苯甲酰胺原藥以N,N-二甲基甲酰胺 (DMF) 為溶劑進行溶解，其余4 種供試原藥均以丙酮為溶劑進行溶解，配制成104mg/L (田間種群的處理) 和103mg/L (敏感品系的處理) 的母液，再用含有0.1%吐溫80 的蒸餾水稀釋，按等比或等差法稀釋成5～7 個系列質量濃度，以相應有機溶劑的處理作為對照 (CK)，每濃度藥液量不少于50 mL。

3 種供試制劑均以蒸餾水為溶劑，采取梯度稀釋法配制，以清水作為對照 (CK)。每供試制劑設5～6 個稀釋處理，各處理藥液量不少于50 mL。

1.3.2 測定方法 采用浸漬法測定梨小食心蟲卵對供試藥劑的敏感性[10]：選擇健壯飽滿24 h 以內所產的卵粒，剔除無生命活力的癟卵及無效卵，制作卵卡，每個卵卡有效卵數量不少于20 粒，重復4 次。將待處理的卵卡放入藥劑中浸泡8 s 后，用吸水紙吸取卵卡表面多余的藥劑，將卵卡放入干凈已滅菌的培養皿中，將培養皿置于(26 ± 0.5) ℃，RH 60% ± 10%、光周期15 L : 9 D，光照度4 800 lx的人工培養箱內，5 d 后檢查卵的死亡率。卵粒最終顏色透明僅剩一層薄膜且有小孔為正常存活且已孵化的卵，卵粒變色或變黑未能完成發育及幼蟲最終不能脫離卵殼的卵視為死亡卵。

1.4 數據統計分析

采用Probit 軟件分析致死中濃度 (LC50) 值及95%的置信區間、斜率及標準誤、卡方值 (χ2) 及自由度 (df)。抗性水平參照小菜蛾[11]及水稻褐飛虱[12]的分級標準：抗性倍數 (resistance ratio,RR) ≤5 為敏感；5 ＜RR≤10 為低水平抗性，10 ＜RR≤100為中等水平抗性，RR＞100 為高水平抗性。

2 結果與分析

2.1 梨小食心蟲敏感品系對殺蟲劑的敏感基線

梨小食心蟲敏感品系對8 種殺蟲劑的敏感性見表2。根據8 種殺蟲劑的LC50值大小及其95%置信區間是否重疊進行分析，梨小食心蟲卵對乙基多殺菌素和溴氰菊酯最為敏感，其次是對氯蟲苯甲酰胺和高效氯氟氰菊酯，對阿維菌素和甲維鹽、茚蟲威的敏感性順次降低，對螺蟲乙酯的敏感性最差。

表2 梨小食心蟲敏感品系對不同殺蟲劑的敏感基線Table 2 The baselines of susceptibility to different insecticides of susceptible G. molesta strain

2.2 梨小食心蟲田間種群對殺蟲劑的抗性水平

從表3 統計分析結果看，3 個田間種群對乙基多殺菌素的抗性在10.24～14.27 倍之間，均表現為中等水平抗性，對溴氰菊酯的抗性在8.85～11.44倍之間，武威涼州種群表現為低水平抗性，蘭州榆中和張掖高臺種群均表現為中等水平抗性；3 個田間種群對高效氯氟氰菊酯、氯蟲苯甲酰胺及螺蟲乙酯的抗性在18.89～86.62 倍之間，均處于中等抗性水平，其中在武威涼州種群高效氯氟氰菊酯和氯蟲苯甲酰胺的活性最高，武威涼州種群對高效氯氟氰菊酯和氯蟲苯甲酰胺的抗性倍數要顯著低于張掖高臺種群和蘭州榆中種群對這2 種藥劑的抗性倍數，最高RR與最低RR之比分別為3.2和2.3；對阿維菌素的抗性在99.82～147.69 倍之間，蘭州榆中種群表現為中等水平抗性，武威涼州種群和張掖高臺種群均表現為高水平抗性；對甲維鹽和茚蟲威的抗性在135.19～189.81 倍之間，均處于高水平抗性。

表3 梨小食心蟲田間種群對不同殺蟲劑的抗性水平Table 3 Resistance levels of field populations of G. molesta to different insecticides

續表3Table 3 (Continued)

3 結論與討論

目前梨小食心蟲防控技術主要包括化學防治、性信息素防治、生物防治和物理防治等，后3 種技術受我國栽培模式和管理技術及產品自身限制，在實際生產上還需進一步完善，化學農藥防治仍是梨小食心蟲防控應用最普遍的技術[13]。在實際生產中由于長期頻繁使用廣譜性殺蟲劑導致梨小食心蟲抗藥性不斷增加，但目前研究主要是通過農藥的室內毒力、室內藥效或田間防效來反映農藥對梨小食心蟲的防治效果以進行高效藥劑的篩選[14-18]，關于梨小食心蟲抗藥性檢測鮮有報道。及時了解和掌握害蟲對藥劑的抗性水平及其分布，可以為農藥的合理使用和延長重點保護的藥劑類別及品種使用年限提供指導和依據[19]。

在本研究供試的8 種藥劑中，阿維菌素為抗生素類殺蟲劑，甲維鹽是由阿維菌素B1 為母體合成的一種新型半合成抗生素類殺蟲劑，茚蟲威為噁二嗪類殺蟲劑，螺蟲乙酯為季酸酮類殺蟲劑，氯蟲苯甲酰胺為雙酰胺類殺蟲劑，高效氯氟氰菊酯和溴氰菊酯為擬除蟲菊酯類殺蟲劑，乙基多殺菌素是大環內酯類抗生素殺蟲劑。本研究結果顯示，梨小食心蟲田間種群對阿維菌素、甲維鹽、茚蟲威和螺蟲乙酯的敏感性均較低，抗性風險高，不建議使用；其對乙基多殺菌素、溴氰菊酯、高效氯氟氰菊酯和氯蟲苯甲酰胺較為敏感，其中乙基多殺菌素和溴氰菊酯對梨小食心蟲卵的毒殺活性最高，RR＜14.3，推薦用于梨小食心蟲卵期防治，而高效氯氟氰菊酯和氯蟲苯甲酰胺由于其抗性水平普遍處于中等偏高水平，建議盡量少用。

由于梨小食心蟲具有特殊鉆蛀習性，其幼蟲除初孵期及老熟脫果期有數小時暴露在外，絕大部分時間均在果實中蛀食，梨小食心蟲僅成蟲和卵在外界環境中長時間暴露[20]， 故而對其防治的主要時期在卵和成蟲期。因此，目前主要通過梨小食心蟲成蟲和卵來篩選高效藥劑，并據此制定出相應的防治技術和規程[21]。目前，針對梨小食心蟲幼蟲的防治藥劑研究很少[14,16,18,22-23]。

楊雪琳等[14]測定了6 種藥劑對梨小食心蟲卵、老熟幼蟲和成蟲的室內生物活性，發現乙基多殺菌素和氯蟲 ? 噻蟲嗪對其卵和成蟲的防效均最好，是卵和成蟲防治的推薦藥劑，其次呋蟲胺、呋喃蟲酰肼也對其卵和成蟲有較好防效，但6 種藥劑對老熟幼蟲的毒殺效果均不理想；韓慧等[5]通過室內觸殺試驗，推薦梨小食心蟲卵期可采用溴氰菊酯防治，成蟲期可采用馬拉硫磷防治；杜恩強等[17]的試驗則表明，呋蟲胺對梨小食心蟲成蟲的速效性和殺滅作用均較強，而且呋蟲胺及高效氯氰菊酯、阿維菌素不但能直接殺滅成蟲，還會對成蟲產卵有一定抑制作用；姜軍俠等[24]的試驗表明，高效氯氰菊酯對梨小食心蟲卵的觸殺效果最好；劉中芳等[25]研究發現，氯蟲苯甲酰胺對梨小食心蟲卵有很好的防治效果；宮慶濤等[22]試驗表明，氟蟲雙酰胺、氯蟲苯甲酰胺和滅幼脲具有良好的卵/幼活性，能有效降低梨小食心蟲初孵幼蟲蛀果數量，對老熟幼蟲可以抑制其發育變態及繁殖；庾琴等[16]研究表明，阿維菌素、氯蟲苯甲酰胺、高效氯氟氰菊酯和呋蟲胺對梨小食心蟲初孵幼蟲有較強的毒殺活性。陳靜等[18]采用室內幼蟲接觸法和大田試驗的結果表明，高效氯氟氰菊酯對幼蟲效果較好，甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽和阿維菌素次之。

以上試驗結果說明，盡管由于梨小食心蟲卵、幼蟲和成蟲的形態結構及生理生化功能不同，故而針對其不同蟲態的有效藥劑也不盡相同，但彼此之間有較大的重復性和一致性，表現為乙基多殺菌素、高效氯氟氰菊酯和氯蟲苯甲酰胺等藥劑不僅對其卵的效果較好，對成蟲和幼蟲也均具有不同程度的兼滅作用，且實際生產中卵、幼蟲和成蟲往往同時發生。梨小食心蟲卵的抗藥性檢測結果從某種程度代表和反映了梨小食心蟲群體對藥劑的抗性水平，卵對藥劑的抗性檢測結果是指導果園科學合理用藥防控梨小食心蟲不可忽略的重要依據。

為了防止梨小食心蟲對乙基多殺菌素、溴氰菊酯、高效氯氟氰菊酯及氯蟲苯甲酰胺等藥劑產生進一步的抗性，延長藥劑的使用壽命，建議該地區要嚴格控制這些藥劑的使用次數，避免在同一生長季連續多次使用同一藥劑，可與氯蟲 ? 噻蟲嗪、呋蟲胺、滅幼脲和呋喃蟲酰肼等作用機制不同的藥劑輪換使用，同時可以對不同作用機制的農藥開展合理混用，并合理選擇增效劑，以實現減量增效、延緩抗性發展的目的。

由于抗性監測數據直接關系到害蟲抗性治理策略和綜合治理體系的制定，今后需對梨小食心蟲進行更大范圍抗藥性監測，明確其抗藥性現狀，為抗性治理提供科學依據。